转化生长因子－B和碱性成纤维细胞因子在儿童原发性局灶节段性肾小球硬化肾组织中的表达

转化生长因子－B和碱性成纤维细胞因子在儿童原发性局灶节段性肾小球硬化肾组织中的表达

李春玉聂磊梅梅李慧玲

李春玉聂磊梅梅李慧玲

佳木斯大学附属第一医院儿内科黑龙江佳木斯１５４００７作者简介:李春玉,(１９８０．１０－),硕士,主治医师,佳木斯大学附属第一医院儿内科.主要研究方向:小儿肾脏疾病及神经系统疾病.通讯作者:李慧玲(１９８１．０６－),女,硕士,主治医师,佳木斯大学附属第一医院儿内一科.主要研究方向:新生儿缺血缺氧性脑病.

【摘要】目的探讨转化生长因子－B(TGF－B)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)在儿童原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)肾组织中的表达.方法选择肾活检方法,明确诊断４５例原发性FSGS患儿,非肾小管间质患儿１７例,分为实验组１组,伴随肾小管间质患儿２８例,分为实验２组.同时,选择同期肾活检非FSGC,病例改变较强肾组织１８例,分为对照组.选择免疫组织化学方法,分析转化生长因子－B和碱性成纤维细胞在肾组织表达情况.结果在所有实验对象肾组织中,bFGF和TGF－B都有表达,在对照组、实验１组与实验２组均逐渐升高,三组之间存在显著性差异(P＜０．０５).bFGF和TGF－B表达,和肾小管间质指数具有正相关关系,相关系数分别为０．６６０和０．７６２,.同时,bFGF和TGF－B两者表达量,经过分析,也是一种正相关关系,相关系数０．５８３.结论针对肾小球硬化肾组织,bFGF和TGF－B均有较高表达.随着FSGS不断发展,在肾组织表达量也逐渐着呢家,使得肾小管间质逐渐发展为纤维化,在促进肾脏纤维化中,具有一定协同作用.【关键词】bFGF;TGF－B;肾小球硬化;肾组织【中图分类号】R５１２．６【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－１５０１－０１

局灶阶段性肾小球硬化,英文简称为FSGS,是肾小球部分出现毛细血管非炎症性的硬化性疾病,按照发病机制、病因分类,主要分为原发性FSGS与继发性FSGS.按照国际小儿肾脏诊断标准,在原发性FSGS中,儿童肾病患者肾活检为６％左右,站激素抵抗肾病肾活检３３．０％.然而,在确诊为FSGS后,进行１０年随访,约有３８％患儿发展为肾衰竭.进行２０年随访,大约１５~７７％患者,进入终末期肾衰竭,是一种高风险人群.根据相关研究,肾脏纤维化紧张中,细胞、生长因子,在FSGS患儿中,均有表达情况.本文选择原发性FSGS作为实验对象,选择免疫组织化学方法,探讨转化生长因子－B(TGFB)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)在儿童原发性局灶节段性肾小球硬化(FSGS)肾组织中的表达.

１资料与方法１．１一般资料选择肾活检方法,明确诊断４５例原发性FSGS患儿,非肾小管间质患儿１７例,分为实验组１组,伴随肾小管间质患儿２８例,分为实验２组.同时,选择同期肾活检非FSGC,病例改变较强肾组织１８例,分为对照组.在４５例患儿中,由３例肾病范围,表现为大量蛋白尿,其他４２例属于肾病综合征.在４５例患儿中,由４例肾活检时,发现有肾衰竭症状,主要为肌酐、血尿素氮比正常值水平明显要高,主要在实验２组中.１８例对照组患儿,主要为单纯性镜下血尿.１．２方法选择免疫组织化学方法,分析转化生长因子－B和碱性成纤维细胞在肾组织表达情况.具体步骤如下:把所选病例肾组织标本存档,２um切片,设置防脱片,在小于６０摄氏度环境下过夜.选择梯度酒精脱水,选择二甲苯脱蜡,选择蒸馏水洗脱.在抗原修复之后,滴加TGF－B的克隆抗体,和bFGF克隆抗体.显微图像分析:处于显微镜下,实施单盲读片,与DAB染色强度、染色范围,准确判断结果.若DAB显示阳性,在特定区域明确定位,出现对比鲜明棕黄色,属于特异性阳性反应.如果棕黄色愈深,则阳性强度越强.如果没有棕黄色着色,则属于阴性表达.在肾小球、肾小管区域内,选择１０个高倍视野监测,通过图像输入和增强,采取二值化处理和分割,获取免疫组织化学指数.１．３统计学分析本次研究患者的临床资料与数据全部采用SPSS１８．０统计学软件进行处理分析,计量资料采用t检验,治疗前后采用X２检验,P＜０．０５为差异有明显性,有统计学意义.

２结果所有实验对象肾组织中,bFGF和TGF－B都有表达,在对照组、实验１组与实验２组均逐渐升高,三组之间存在显著性差异(P＜０．０５).bFGF和TGF－B表达,和肾小管间质指数具有正相关关系,相关系数分别为０．６６０和０．７６２,.同时,bFGF和TGF－B两者表达量,经过分析,也是一种正相关关系,相关系数０．５８３.三组肾组织bFGF和TGF－B的免疫组织化学指数如表所示.表１三组肾组织bFGF和TGF－B的免疫组织化学指数比较

３讨论局灶阶段性肾小球硬化,英文简称为FSGS,是肾小球部分出现毛细血管非炎症性的硬化性疾病,按照发病机制、病因分类,主要分为原发性FSGS与继发性FSGS.按照国际小儿肾脏诊断标准,在原发性FSGS中,儿童肾病患者肾活检为６％左右,站激素抵抗肾病肾活检３３．０％.然而,在确诊为FSGS后,进行１０年随访,约有３８％患儿发展为肾衰竭.进行２０年随访,大约１５~７７％患者,进入终末期肾衰竭,是一种高风险人群.慢性肾脏病近年在我国的发病率呈逐渐增高的趋势.我国患儿原发性FSGS患病率大致在９．４％~１３．６％,而且发病率仍然在增加,每年达到７％以上.同全世界一样,我国FSGS也已开始呈现流行病学特点,成为一个必须重视的卫生问题.如未能积极控制,随着病情的进展,最终都将导致肾小球硬化及肾间质纤维化,从而进展为终末期肾脏病(ESRD).根据２００７年国际肾脏病学会最新资料,全世界有超过５亿人患有不同的肾脏疾病,每年超过百万人死于慢性肾脏疾病及并发的心脑血管疾病.目前研究发现生长因子(如,转化生长因子－β、结缔组织生长子CTGF、血小板源生长因子(PDGF)等为促纤维化因子,近年大量研究结果显示,虽然多种细胞因子参与肾间质纤维化的发生发展,但研究最多的和作用最明显的是转化生长因子－β.TGF－β是一种具有多种生物学效应的细胞因子.细胞因子调控异常,引起细胞因子网络紊乱,当机体组织损伤后,TGF－β可以被许多炎性细胞,如淋巴细胞、单核/巨噬细胞和血小板合成并释放,TGF－β的释放和活化促成纤维细胞的分裂、增殖、刺激包括纤维结合蛋白(FN)在内的多种细胞外基质沉积,

主要为肌腱蛋白、胶原和蛋白多糖,同时通过蛋白酶的合成及提高蛋白酶抑制剂的水平阻止细胞外基质降解,这些都有利于损伤修复,但是当TGF－β持续过度表达就会导致皮肤及脏器的纤维化疾病.可见TGF－β在损伤、炎症及纤维化之间起着一个连接的作用.研究认为TGFβ是肝硬化进展过程中最重要的促进肝纤维化形成的因子,它能促进ECM的合成并抑制ECM的降解.作为细胞基底膜主要成分的CⅣ主要分布在肝实质细胞的周围,在肝内合成与代谢,肝纤维化时基底膜含量明显增多,大量沉积,形成肝窦毛细血管化,血清CⅣ呈上升趋势.HA是大分子的糖胺多糖,在间质细胞合成,肝纤维化时,HA降解受阻并血液中沉积.存在于肝脏、胆管、血管及淋巴管基底膜中的,LN在肝细胞损伤后炎症修复过程中合成明显增加.TGFβ浓度升高将使肝细胞过度生长,导致正常细胞恶性变.随着肝硬化的发生其水平长期升高,且其水平与肝硬化严重程度相一致,表示TGFβ在肝硬化的形成和发展中有密切的联系.从本实验的结果中可以看出TGFβ的早期升高比HA、LN、CIV更能提示早期肝硬化.

碱性成纤维细胞生长因子是细胞生长和分化的重要调节因子,具有促血管生成、细胞增殖、细胞趋化、细胞迁移等活性,在细胞分化和机体发育过程中发挥重要作用.碱性成纤维细胞生长因子通过与细胞膜表面的特异性配体结合,进而引发细胞内的一系列级联反应,从而产生各种生物学效应.碱性成纤维细胞生长因子为一种广泛存在与人体内的一类多肽生长因子,bFGF具有中胚层和神经外胚层来源细胞具有显著的促增殖作用,会参与到多种组织创伤的修复中,为一种重要的创伤愈合因子,有多种生物学作用,具有促进肾间质成纤维细胞增殖和进系膜细胞增殖,对于足突细胞具有一定的破坏作用,导致肾脏疾病向慢性纤维化的方向发展,bFGF在肾小管间质病变中具有十分重要的检验价值.bFGF和IgA肾病肾小管间质病变具有密切的关系,在FSGS临床诊断上具有十分重要的意义.

在本组实验中,在所有实验对象肾组织中,bFGF和TGF－B都有表达,在对照组、实验１组与实验２组均逐渐升高,三组之间存在显著性差异(P＜０．０５).bFGF和TGF－B表达,和肾小管间质指数具有正相关关系,相关系数分别为０．６６０和０．７６２,.同时,bFGF和TGF－B两者表达量,经过分析,也是一种正相关关系,相关系数０．５８３.这说明,针对肾小球硬化肾组织,bFGF和TGF－B均有较高表达.随着FSGS不断发展,在肾组织表达量也逐渐着呢家,使得肾小管间质逐渐发展为纤维化,在促进肾脏纤维化中,具有一定协同作用.同时,bFGF、TGF－B在诊断FSGS疾病中,具有重要诊断价值.

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