阿魏酸哌嗪分散片人体生物等效性研究刘兰余瑞莲

阿魏酸哌嗪分散片人体生物等效性研究刘兰余瑞莲

刘兰余瑞莲

刘兰余瑞莲

（深圳市龙华新区人民医院药剂科广东深圳518109）

【摘要】目的：研究阿魏酸哌嗪分散片与阿魏酸哌嗪片在人体的相对生物利用度，评价二者是否等效。方法：18名志愿者随机交叉单次口服阿魏酸哌嗪分散片或普通片200mg后，采用HPLC法测定血药浓度，用3p97软件计算两者的药动学参数，并评价其生物等效性。结果：分散片和普通片的药-时曲线符合口服吸收一室模型。T1/2ke分别为（0.57±0.45）和（0.57±0.46）h；Tmax分别为（0.35±0.22）h和（0.31±0.13）h；Cmax分别为（2.99±1.46）mg?L—1和（3.01±1.55）mg?L—1；AUC（0～T）分别为（2.20±1.12）和（2.07±1.00）mg?h?L—1。阿魏酸哌嗪分散片的相对生物利用度为(106.80±15.65)%，经方差分析、双单侧t检验及（1-2?）置信区间法统计分析，各药动学参数无显著差异(P>0.05)。结论：阿魏酸哌嗪分散片与普通片具有生物等效性。

【关键词】药动学；生物利用度；色谱法；高效液相；生物等效性；阿魏酸哌嗪分散片

【中图分类号】R285【文献标识码】B【文章编号】1003-5028（2015）5-0158-02

阿魏酸哌嗪片（piperazineferulatetablet）商品名保肾康片，临床上用于各种原因所致肾小球疾病。为评价山东诚创医药技术开发有限公司研制的阿魏酸哌嗪分散片在健康男性受试者的药动学特征及与市售阿魏酸哌嗪片是否等效，本文建立了可靠的血药浓度测定方法，并对国产分散片和普通片的药动学及生物等效性进行了研究。

1材料与方法

1.1药物与试剂受试药物阿魏酸哌嗪分散片（山东诚创医药技术开发有限公司，每片100mg，批号20030825，含量95.4%，简称分散片）；参比制剂阿魏酸哌嗪片（海南林恒制药厂生产，每片50mg，批号021002，有效期至2004/09；批准文号：琼卫药准字（1995）第000035号；商品名保肾康，简称普通片）。阿魏酸哌嗪标准对照品（山东诚创医药技术开发有限公司提供，批号010323，含量为99.8%，简称PF）。甲醇、冰醋酸为分析纯，乙腈为HPLC级，三蒸水。

1.2仪器Agilent1100系列高效液相色谱仪，Agilent1100泵系统，Agilent1100可调波长紫外检测器和Agilent1100工作站；色谱柱KromasilTMC187u粒径，150×4.6mmID；固定进样环50μl；参考文献[2]，选择如下色谱条件：流动相：甲醇∶4%冰醋酸∶乙腈=25∶62∶13(V∶V∶V)，流速1.0ml?min—1；紫外检测波长：310nm；柱温：室温。

1.3标准液的配制精密称取PF23.6mg，用适量甲醇溶解，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，即为472mg?L-1的PF标准储备液。

1.4样品处理[2]0.5ml血清，定量加甲醇3.0ml，旋摇2min，3340×g离心5min，精取上清液3.0ml，置70℃水浴中用氮气吹干。残留物用50μl流动相复溶，进样40μl。

1.5受试者18例健康男性自愿受试者，年龄(21.7±1.64)a，18～24a；体重(59.1±9.27)kg，49～85kg；身高(170.1±5.22)cm，160～178cm。试验前所有受试者经肝功、肾功、血压、心电图检查均正常。受试者在知情情况下填写自愿者同意书。

1.6试验方案采用随机交叉试验设计，单剂量口服给药。将18名受试者随机分为A，B两组，每组9名，在I、II阶段分别交叉服药，交叉服药前经1wk清洗期。试验前禁食12h后，于次日晨8时空腹吞服分散片或普通药200mg(200ml温开水服药)。服药当日统一进标准餐(服药3h后进早餐)。受试期间禁止剧烈活动、吸烟、饮酒及含酒精、咖啡因类饮料，试验期间禁止使用一切非试验药物，并由医护人员进行健康监护。采集服药后0.05，0.083，0.17，0.33，0.5，0.75，1.0，1.5，2.0，3.0，4.0h静脉血3.0ml，分离血清，低温保存（-20℃），及时测定。间隔1wk后交换口服另一种制剂，按前述方法采取静脉血。

1.7统计方法学采用3p97计算软件，计算各个体的药动学参数，Cmax，Tmax以实测值计算，AUC按梯形面积法计算。对2种阿魏酸哌嗪制剂的AUC、Cmax、Tmax进行方差分析，双单侧t检验，（1-2?）置信区间法进行统计分析，判断生物等效性。

2结果

2.1阿魏酸哌嗪色谱图在本实验所采用的色谱条件下，血清中PF的tR为5.2min左右（见图1），PF峰形良好，且不受血清内源性物质的干扰。

2.6生物等效性评价用双单侧t检验分析2制剂的Cmax和AUC(0-T)，高、低侧t检验均有显著差异(P＜0.05)，1-2?（?=0.05）置信区间分别为80.2%~121.6%和99.4%~113.2%，表明两种制剂的Cmax和AUC(0-T)均生物等效（?=0.05）。Tmax用非参数统计分析结果（Wilcoxon法）表明两制剂间差异无显著性（P＞0.05）。以上结果表明两制剂生物等效。

3讨论

有关阿魏酸及阿魏酸钠测定的报道较多见[1,2]，而阿魏酸哌嗪血药浓度测定及药动学较少见报道。用山东诚创医药技术开发有限公司提供质量标准中HPLC适应性的色谱条件(甲醇:0.1%醋酸=60:40)测定血清中PF，PF与血清内源性物质分离效果差，峰形欠佳；参阅有关文献[1,2]，对流动相的组成比例进行了调节，当流动相组成甲醇:4%冰醋酸:乙腈为25:62:13时，峰形得到了改善，峰形好且与血清内源性物质分离好。

曾用沉淀蛋白法、不同有机溶剂萃取法处理样品后进样分析，研究表明沉淀蛋白法灵敏度低；而用甲醇萃取法将血清中的PF浓缩复溶后再进样分析，外标法定量，结果重现性好，回收率较高，完全可满足PF血药浓度测定及生物等效性研究的要求。

双单侧t检验是国际上判断生物等效性通用的一种统计学方法[3]。双单侧t检验是使用小概率原理，此时无效假设(H0)为两种药物不等效。备择假设(H1)为两种药物等效。在H0成立时，t1，t2服从自由度为n-2的t分布。查t临界值表，得到tα(n-2)，如果t1，t2均大于相应的t临界值时(P＜0.05)，拒绝H0，接受H1，认为两药物等效。

由图2和表1可见，2种阿魏酸哌嗪制剂在人体内吸收、分布、消除较为接近，阿魏酸哌嗪分散片的相对生物利用度为（106.80±15.65）%，本试验为新剂型阿魏酸哌嗪分散片的临床应用提供了依据。

参考文献：

[1]黄敬群，黄熙，张莉等.RP—HPLC测定人血清中阿魏酸浓度的改进方法[J].中草药，2012，32(9):792～794.

[2]任志强，刘丽君，龙艾兵.高效液相色谱法测定血浆中阿魏酸钠含量[J].中国药房，2013，14(1):33～34.

[3]余松林主编.医学统计学.人民卫生出版社，2009,8：330.