三种方法检测肺炎支原体的临床与应用

三种方法检测肺炎支原体的临床与应用

王新新

王新新

(河南省济源市第二人民医院459000)

【摘要】目的：探讨分析三种方法检测儿童肺炎支原体的临床与应用。方法：随机抽取在2011年5月至2013年12月间来我院治疗肺炎支原体的180例患儿，留取他们的咽拭子和血清标本，分别采用荧光定量PCR法、快速培养法和血清抗体法进行检验，比较三种方法的阳性检出率，进行回顾性对比分析。结果：荧光定量PCR法共检出47例阳性患儿，阳性率为26.11％，快速培养法共检出49例阳性患儿，阳性率为27.22％，血清抗体法共检出30例阳性患儿，阳性率为16.67％。荧光定量PCR法和快速培养法的阳性率显著高于血清抗体法，差异具有统计学意义（p＜0.05）；荧光定量PCR法和快速培养法的阳性率比较不具有较大差异（p＞0.05）。结论：荧光定量PCR法和快速培养法均能够有效的检出肺炎支原体，值得在临床上推广使用。

【关键词】荧光定量PCR法快速培养法血清抗体法肺炎支原体儿童

【中图分类号】R725.6【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）06-0023-02

肺炎支原体是临床上患者支原体肺炎的病原体，它是能够引起患者呼吸道感染的通过唾沫飞溅从而进行传播的介于细菌和病毒之间的一类微生物。支原体肺炎的主要发病人群是青少年，发病季节以秋冬见多[1]。患者的临床症状大部分表现为阵发性的刺激性的咳嗽、头痛、发热、咽喉痛等。肺炎支原体不仅能够引起一般的肺炎，还能够引发较严重的双侧肺炎以及其他的并发症，严重危害着患者的身体健康[2]。目前临床上对于肺炎支原体的检测主要有荧光定量PCR法、快速培养法和血清抗体法等方法，它们的特异性和敏感性都有差异。我院就探讨分析三种方法检测儿童肺炎支原体的临床与应用这个课题展开研究，取得了令人满意的成果，现报道如下。

1资料和方法

1.1基本资料

随机抽取在2011年5月至2013年12月间来我院治疗肺炎支原体的180例患儿，其中男101例，女79例，年龄为4个月至13岁，平均年龄为4.3岁。这些患儿的临床症状表现为：发热、头痛、咽喉发炎疼痛、气喘。患儿在进入医院后用一次性的咽拭子取两份标本，并且抽取3ml的静脉血。

1.2仪器和试剂

荧光定量PCR：中山大学达安基因股份有限公司生产的肺炎支原体核酸定量检测试剂盒，PCR扩增仪：LightCyler基因扩增仪（罗氏公司生产）。

快速培养法：培养基取自武汉菁华时间科技有限公司生产的肺炎支原体快捡试剂盒。

血清抗体法：潍坊市康华生物技术有限公司生产的肺炎支原体IgM抗体检测试剂盒。

1.3方法

荧光定量PCR：选取一份咽拭子标本根据仪器上的说明进行操作。

快速培养法：选取一份咽拭子标本，将它接种到液体培养基中，然后将咽拭子放到瓶子中，瓶子外的东西舍去，在37℃下培养大约6h。

血清抗体法：将抽取的患者的3ml血液在3000r/min下离心10min，分离出血清，根据说明书的指示进行MP-IgM的检测。

1.4检测标准

荧光定量PCR：咽拭子标本的MP-DNA含量≥5.0×106基因拷贝，那标本即为阳性结果；

快速培养法：如果经过接种后获得的液体由红色转变为澄清的黄色，结果即为阳性；

血清抗体法：在操作3min后，阳性结果即为出现2个斑点，1个即为阴性结果，但是若没有斑点出现，则需要重新检测，操作可能存在失误或者是不规范的地方。

1.5统计学处理

研究中的基本的数据都采用SPSS13.0软件进行统计处理。计量的资料运用x-±s表示；利用t检验；计数资料以X2进行检验；计数资料以率（％）表示。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2结果

荧光定量PCR法共检出47例阳性患儿，阳性率为26.11％，快速培养法共检出49例阳性患儿，阳性率为27.22％，血清抗体法共检出30例阳性患儿，阳性率为16.67％。荧光定量PCR法和快速培养法的阳性率显著高于血清抗体法，差异具有统计学意义（p＜0.05）；荧光定量PCR法和快速培养法的阳性率比较不具有较大差异（p＞0.05）。附表一做详细的介绍。

表一三种方法检测肺炎支原体的阳性检出率情况比较

荧光定量PCR法快速培养法血清抗体法

阳性47（26.11％）49（27.22％）30（16.67％）

阴性133（73.89％）131（72.78％）150（83.33％）

3讨论

肺炎支原体肺炎的大部分发病人群是儿童，他们的身体免疫机制还没有发育成熟，抵抗外界病毒和细菌的能力比较弱，所以在感染了肺炎支原体后，病情一般不容易控制，反复发作，给治疗带来困难[3]。所以及早的检测出肺炎支原体是早期预防和治疗的关键，目前临床上主要的检测方案都存在着敏感度低，耗时比较长的缺点，限制了临床应用。

我院就对荧光定量PCR法、快速培养法以及血清抗体法这三种方法对肺炎支原体的阳性检出率进行比较分析，结果显示荧光定量PCR法、快速培养法以及血清抗体法的阳性率分别为26.11％、27.22％、16.67％。从结果中我们可以发现荧光定量PCR法和快速培养法的阳性率显著高于血清抗体法，差异具有统计学意义；荧光定量PCR法和快速培养法的阳性率比较相近。所以在临床上运用荧光定量PCR法和快速培养法是比较有效的，而且快速培养法的成本比较低，对于一些基层医院是比较适宜使用的。对于血清抗体法检测值最低的原因可能与患儿的病程有关，当肺炎支原体感染了一周后IgM值显著升高，4周时达到最大值，之后就缓慢的下降，如果患儿是在4周以后入院治疗的，则会导致血清抗体法检测率较低[4]。但是总体来看，三种方法对肺炎支原体的检测阳性率都不是很高，这可能与它们对病毒的敏感性不高有关[5]。

综上所述，在对患儿进行肺炎支原体检测的时候，医院要根据实际情况选择适当的方法，PCR法对仪器和操作的要求比较高，容易造成失误，从而影响检测结果，而快速培养法是一种价格低廉，操作方便的方法，是比较适合在医院进行实际操作的，能够满足临床要求，而且检测阳性率在同类比较下是较高的，值得推广使用。

参考文献

[1]王楠，张国成，刘芳.等.快速培养结合显微镜排除法检测肺炎支原体的研究[J].临床儿科杂志，2010,28(8):760—767.

[2]林艳.3012例儿童肺炎支原体检测结果分析[J].中国妇幼保健，2012,27(2):220—221.

[3]陈宜.肺炎支原体的检测方法的比较分析[J].检验医学与临床,2011,8(16):2002—2003.

[4]廖春盛，戴晓波，刘建军.等.呼吸道感染患者肺炎支原体检测的临床意义[J].国际检验医学杂志，2011,32(13):1474—1477.

[5]徐卫东.儿童肺炎支原体检测方法比较与分析[J].现代实用医学，2011,23(10):1112—1114.