紫外-可见分光法测定甘草饮片中甘草酸的含量

紫外-可见分光法测定甘草饮片中甘草酸的含量

徐宁毛小明（通讯作者）

徐宁毛小明（通讯作者）

（安庆医药高等专科学校安徽安庆246052）

【摘要】目的：探讨甘草饮片中甘草酸的含量测定方法，方法：采用乙醇回流提取法提取甘草酸，并采用紫外分光法测定其含量，结果：甘草饮片中甘草酸在0.50～2.50mg/ml范围内线性关系良好，r=0.9994，平均回收率为98.88%RSD为1.47%（n=5）结论：本测定方法快速可靠，可较好控制甘草饮片的质量

【关键词】甘草酸；甘草饮片；紫外分光法；含量测定

【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2016）17-0328-02

甘草别名为甜草根为豆科多年生草本植物Glycyrrhiza.uralensis,账果甘草Glycyrrhizainflate.Bat，感光果甘草Glycyrrhiza.glabra.L的干燥根及根茎，是一种常用药物，被冠以“众药之王”称号，其药用价值倍受人们广泛关注，具有补脾益气，清热解毒，止咳祛痰，和中润肺，调和诸药之功效[1]。主要化学成分为三萜皂甙类：甘草甜素（甘草酸）、甘草次酸和甘草酸的钾钙盐。黄酮类化合物：甘草甙、甘草甙元等[2]。甘草酸具有保肝、抗炎、抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等作用[3]，甘草酸的乙醇和氢氧化铵溶液与H2SO4、香兰醛试液显色，在波长544nm处有最大吸收[4]。

1.材料

1.1药品与试剂

甘草饮片（上海医药公司安庆分公司提供并鉴定），甘草酸单铵盐标准品（中国药品生物制品检定所批号110731-201215），香兰醛试液（上海化学试剂分装厂），乙醇、硫酸、氢氧化铵均为国产分析纯试剂

1.2仪器

760CRT双光束紫外分光光度计（上海精密科学分析仪器厂），天然药物提取分离设备

2.方法与结果

2.1标准曲线方程的绘制

以甘草酸单铵盐为标准品，于80℃真空干燥2h后，精密称定，以80%乙醇为溶剂，配成每ml含1mg的标准溶液。精密吸取0.50、1.00、1.50、2.00及2.50ml,分别置10ml具塞试管中，加入80%乙醇稀释至总体积为5.0ml,并以80%乙醇为空白，各加香兰醛试液0.5ml混合，置水浴中，小心加入70%硫酸5.0ml混合，60℃保温20min,冷至室温后，于波长544nm处分别测定吸光度得回归方程为y=2.34x-0.72(x为mg/ml)r=0.9994,线性范围0.50～2.50mg/ml。

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2.2甘草酸的提取方法

称取甘草饮片细粉（40目）2.0g，置沙化提取器中，乙醚脱脂2～3h，挥去乙醚，再用80%乙醇回流提取[5]，提取液定量转移至50ml容量瓶中，用80%乙醇稀释至刻度备用。

2.3聚酰胺柱预处理

取2.0g聚酰胺粉，置小烧杯中，以少量蒸馏水悬浮，装入底部有棉花的小层析柱中（柱内径7～8mm,长140mm）,用95%乙醇洗至流出液澄清后备用[6]。

2.4供试品溶液制备

精密吸取2.2甘草酸提取液2.0ml加在聚酰胺柱上端，待溶液流至柱低上约0.5mm处，用中性乙醇洗至不出现黄色为止，继用1mol/L氢氧化铵乙醇溶液洗净甘草酸[7]，以80%乙醇作为空白溶液，同法处理后作为空白对照。

2.5精密度试验

精密吸取供试品溶液2.0ml（1mg/ml），以标准曲线方程绘制项下操作显色后，分成6份，在平行操作下于544nm波长处测定其吸收度，结果RSD为0.74%，表明本方法的精密度良好。

2.6稳定性试验

精密吸取供试品溶液2.0ml（1mg/ml），以标准曲线方程绘制项下操作显色后，分别于0h、2h、4h、6h、24h后，在544nm波长处测定其吸收度，结果见表1

表1甘草酸稳定性试验测定结果（n=5）

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2.8供试品测定

精密吸取供试品溶液2.0ml，80%乙醇溶解，再加试剂显色后，以80%乙醇作空白，在波长544nm处测定吸光度，计算含量

3.结论与讨论

本实验采用氨性乙醇回流提取甘草饮片中甘草酸，采用聚酰胺柱洗脱分离法提纯甘草酸，收率最高，可比水提法提高3倍以上[8]，结果比较理想，甘草酸在一定浓度范围内是符合朗伯-比尔定律，采用紫外-可见分光法测定其含量，简便可靠，可较好的控制药材质量。甘草酸含量测定方法很多，其中紫外-可见分光法更适合对甘草饮片进行质量的初步控制。

【参考文献】

[1]高学敏.中药学[M].北京：中国中医药出版社，2004：507-508.

[2]李薇，宋新波，张丽娟等.甘草中化学成分研究进展[J].辽宁中医药大学学报，2012,14（7）：40-42.

[3]木其尔，刘有平，李萌等.甘草酸单铵盐中有关物质的LC-MSn研究[J].中国医药工业杂志，2009,40（11）：844-845.

[4]程晓霞.甘草及其制剂中甘草酸的定量方法研究概况[J].时珍国医国药，2000，11（4）；380-381.

[5]郭锦棠，杨俊红等.微波与索氏提取甘草酸的正交实验研究[J].中国药学杂志，2002，37（12）：919-922.

[6]苑可武，白芳，杨波等.甘草酸的提取和精制方法概述[J].中国医药工业杂志，2002,33（7）：362-363.

[7]张小江，刘永录，马新蕾等.甘草中甘草酸的提取工艺研究[J].中兽医医药杂志，2010,1:31-32.

[8]鲁守平，孙群，王建华等.甘草中有效成分甘草酸的提取和测定方法研究概况[J].中国中药杂志，2006,31（5）：357-359.

省级质量工程项目：校企合作实践教育基地（项目编号2013sjjd034）；安徽省教育厅