多批次牛黄解毒片中添加土大黄苷的检测

多批次牛黄解毒片中添加土大黄苷的检测

陆君1郭琳1胡佳1逯春玲

陆君1郭琳1胡佳1逯春玲2

（1辽宁省锦州市食品药品检验所辽宁锦州121001；2朝阳市中医院辽宁朝阳122000）

【摘要】目的采用多种鉴别方法对牛黄解毒片进行是否含有土大黄苷的定性鉴别。方法采用显微鉴别、纸色谱法、聚酰胺薄膜色谱法、高效液相色谱法：色谱柱：AgilentTC-C18柱（250×4.6mm,5um)；柱温：25℃；流动相：乙腈-水（20：80）；流速：1.0ml/min；采用二极管阵列检测器，检测波长：328nm；对样品中的土大黄苷进行定性鉴别。结果12批样品中检出3批含有土大黄苷，检出率在25%。结论通过定性鉴别实验检测牛黄解毒片中是否含有土大黄苷，确保该药的疗效以及用药安全。

【关键词】牛黄解毒片土大黄苷显微鉴别薄层色谱法高效液相色谱法

【中图分类号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）35-0167-02

牛黄解毒片是收载于《中国药典》的常用中成药，其处方由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草八味药材组成。其功效为清热解毒，用于火热内盛，咽喉肿痛，牙龈肿痛，口舌生疮，目赤肿痛。[1]本文作者在检验工作中发现，方中的大黄目前市场中存在多个《中国药典》收载品种以外的混伪品,并存在充正品投料的现象,近年国家食品药品监督管理局已有对含大黄成分的中成药检查土大黄苷的药品检验补充检验方法颁布。本文采用了显微鉴别，纸色谱法，聚酰胺薄层色谱法及高效液相色谱法对多批牛黄解毒片进行检测，结果准确可靠，真实的体现了牛黄解毒片的质量优劣。

1.材料

1.1仪器与试剂

HitachiL-2000系列高效液相色谱仪（L-2130二元高压高通量泵，L-2200自动进样器，L-2300柱温箱，L-2455二极管阵列检测器，D-2000数据工作站系日本日立公司产品）；KQ-500E型医用超声清洗器（昆山超声仪器有限公司）；BX53研究级系统显微镜；赛多利斯BP-211D型电子天平；聚酰胺薄膜（台州市路桥四甲生化塑料厂，规格：8×8cm,批号：2012年10月27日）；土大黄苷对照品（中国药品生物制品检定所供含量测定用，批号：110994-200504）；乙腈为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；其它试剂均为分析纯。水为超纯水。

1.2样品抽取市售药品12批，批号如下：20120806、20121201、20120606、20110901、120201、130101、1123140、111002、120401、121120、120220、121128。

2.方法与结果

2.1测定方法

2.1.1显微鉴别正品牛黄解毒片中草酸钙簇晶大而多，棱角钝，直径60～140μm；而伪品与正品相比较，草酸钙簇晶少而小，棱角尖，直径50～60μm。[1]

2.2纸色谱法：供试品溶液的制备：分别取牛黄解毒片各2片，除去包衣，研细，加甲醇10ml,超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。取供试品溶液10μl,点于滤纸上，以45%乙醇展开，取出，晾干，放置10分钟，置紫外光灯（365nm）下检视，正品不显持久的亮紫色荧光。而劣品则显持久的亮紫色荧光。以此初步判定是否含有土大黄苷。[2]

2.3聚酰胺薄膜色谱法：对照品溶液的制备：取土大黄苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。供试品溶液的制备同2.2.

吸取上述二种溶液各5μl，分别点于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-甲酸乙酯-丙酮-甲酸-甲醇（30:5:5:0.1:20）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，正品未检出亮蓝色荧光斑点；而劣品检出亮蓝色荧光斑点。其代表性色谱图见图1[3]

1.对照品2.供试品

图1

2.4HPLC法

2.4.1色谱条件色谱柱：AgilentTC-C18柱（250×4.6mm,5um)；柱温：25℃；流动相：乙腈-水（20：80）；流速：1.0ml/min；采用二极管阵列检测器，检测波长：328nm；

2.4.2对照品溶液的制备：取上述2.3项下的对照品溶液1ml，加甲醇稀释至10ml，即得。其代表性色谱图见图2

2.4.3供试品溶液的制备：取上述2.2项下的供试品溶液1ml，加甲醇稀释至10ml，即得。其代表性色谱图见图3

2.4.4测定法：分别精密吸取对照品溶液供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，即得。

2.4.5结果判断：通过对12批不同厂家生产的牛黄解毒片样品测定，有121120、20120806、20121201、120220、20120606、20110901、121128、120201共8批未出现与对照品色谱主峰保留时间完全相同的色谱峰。有130101、1123140、111002共3批出现与对照品色谱主峰保留时间完全相同的色谱峰，经由紫外吸收光谱法验证，均在280～400nm波长范围的紫外吸收光谱与对照品相同；另外批号为120401的样品在与对照品峰相应保留时间处有一较小吸收峰，但紫外吸收光谱不完全一致，故排除在外。其代表性色谱图见图4、图5.[4]

3讨论

3.1劣品牛黄解毒片中含有土大黄苷成分,无泻下作用或作用很弱，而且具有致腹痛和收敛涩肠的副作用。大黄质量的真伪直接影响到该药的质量，关系到该药的疗效及用药安全。经过此次检验过程，发现确有使用或误投大黄伪品的现象。

3.2各生产企业应加强管理，不给不良药贩以可乘之机；企业采购人员也应加强学习，收药要识药、懂药，以免造成投料出错。而作为药检及药监部门也应加强检验监督工作，使得药品质量有进一步的提高。

参考文献

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2010：566-567.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2010：22.

[3]国家食品药品监督管理局.中药材及中药饮片药品检验补充检验方法和检验项目批准件.编号2010001.

[4]国家食品药品监督管理局.药品检验补充检验方法和检验项目批准件.编号2008013.