膝骨性关节炎患者关节滑液IL-6表达及临床意义

膝骨性关节炎患者关节滑液IL-6表达及临床意义

马川杨家福江锋陈巍

马川杨家福江锋陈巍（四川省泸州医学院附属中医医院骨科四川泸州646000）

【中图分类号】R684【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)16-0007-02

【摘要】目的检测膝骨性关节炎（KneeJointOsteoarthritis，KOA）患者关节滑液中细胞因子IL-6在其不同严重程度中的表达，探讨它们的内在关系和特点。方法采取36例膝骨性关节炎病例组和6例对照组的膝关节滑液，采用酶联免疫吸附法（ELISA法）测定IL-6的表达水平。结果IL-6在KOA各严重程度组与对照组中的表达：IL-6的水平在病情严重程度相对较轻的患者中也可显著升高，但各严重程度组与对照组比较，无统计学意义（P=0.143＞0.05），各严重程度组组间比较，无统计学意义（P＞0.05）；IL-6与ISOA指数呈零相关（r=0.078,P=0.651＞0.05）。结论KOA中度严重程度以上患者关节滑液中IL-6表达在早期即可显著升高，但与KOA的严重程度无明显相关性，尚不能以其关节滑液中IL-6的具体水平作为判定关节严重程度。

【关键词】膝骨性关节炎严重性指数白细胞介素6

【Abstract】ObjectiveTotestkneeosteoarthritis(KneeJointOsteoarthritis,KOA)jointsynovialfluidinpatientswithcytokineIL-6intheirvaryingdegreesofseriousness.Exploringtheinherentrelationshipandthecharacteristics.MethodsIL-6weremeasuredconcurrentlyinsynovialfluidsamplesfrom36patientswithkneeosteoarthritisandfrom6non-osteoarthritispatients.ThedeterminationoftheIL-6werecarrideoutusingELISA.ResultsIL-6intheseverityoftheKOAandcontrolgroupsintheexpression:IL-6levelsofseverityofillnessinpatientswithrelativelyminoralsocanbesignificantlyincreased,buttheseverityofthegroupandthecontrolgroup,nostatisticalsignificance（P=0.143＞0.05）,theseverityofthegroupofinter-groupcomparison,nostatisticalsignificance（P＞0.05）;IL-6andISOAindexwaszero（r=0.078,P=0.651＞0.05）.ConclusionKOAmorethanmoderateseverityofthejointsynovialfluidinpatientswithIL-6expressionatanearlystagecanbesignificantlyincreased,buttheseverityoftheKOAwasnosignificantcorrelationcannotbeintheirsynovialfluidinjointsofIL-6determinethespecificlevelastheseverityofthejoints.

【Keywords】KneeosteoarthritisSeverityIndexInterleukin-6

膝骨性关节炎（KneeJointOsteoarthritis，KOA）是人体外周动力关节最常见的一种退行性关节疾病，其病因和发病机制至今尚不完全清楚，目前认为是各种原因引起关节软骨纤维化、劈裂、溃疡、脱失而致的全关节疾病，与年龄、肥胖、超负荷运动、遗传、性别等因素有关，其最基本的病理改变是关节软骨的损伤退变，其早期X线征象不明显。而通过病变部位分泌物--关节滑液的检测能间接反映关节软骨代谢状况的特异性分子，可能成为KOA早期诊断的有效方法。本研究采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定正常人及KOA患者关节滑液中IL-6的水平，研究KOA的病变严重程度与关节滑液中IL-6的关系，探讨其在KOA发病中所起的作用及临床上判断KOA病理变化的可能性。

1资料

1.1对象KOA患者36例，女27例，男9例，平均年龄57.69±9.27岁。对照组6例，男性3例，女性3例，平均年龄52.00±5.37岁。分别为无膝关节疾患的胫骨上段骨囊肿1例，股骨下段骨折2例，胫骨中上段骨折患者2例，小腿严重毁损伤截肢患者1例。各组年龄比较,无统计学意义（F=1.488，P=0.233>0.05），具有可比性。

1.2诊断、分组、纳入和排除标准（1）临床诊断标准为中华医学会骨科学分会制定的《骨关节炎诊治指南》（2007年版）中关于KOA的诊断标准。（2）严重程度分组标准采用MichelLequesen推荐的膝骨性关节炎严重性判断方法（ISOA）。（3）纳入标准为符合临床诊断标准，属中度严重程度及以上，半年内未进行过膝关节腔穿刺、注射等治疗。排除风湿性疾病、感染性关节炎、代谢性关节病、关节内肿瘤以及其他特异性关节疾病。

2方法

2.1关节滑液的抽取患者在首次行膝关节腔穿刺、冲洗术，关节镜检查及其他相应手术时，首先注入0.9%生理盐水1.0ml,反复回抽、注入3遍后，尽量将液体抽出，再注入一生化管中，3000转/分离心5分钟，冷藏于-20℃的冰箱内备测。

2.2IL-6测定吸取100ul样品、稀释标准品分别至每孔，36℃孵箱避光孵育90分钟，洗板5次；分别加入生物素化抗体稀释液和生物素化抗体工作液，孵育60分钟，洗板5次；分别加入酶结合物稀释液和酶结合物工作液，再次孵育30分钟，洗板5次；加入显色底物1，孵育15分钟；加入终止液，混匀，并于3分钟内，在450nm波长处测定OD值。最后绘制标准曲线，以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品浓度，根据标本OD值在标准曲线查出其浓度。

2.3统计学方法采用SPSS13.0统计学软件对实验数据进行检验，计量资料采用均数±标准差（x-±s）描述。组间差异采用单因素方差分析，两两之间采用Pearson相关分析。

3结果

3.1不同严重程度膝骨性关节炎患者关节滑液中IL-6表达变化KOA各严重程度组与对照组比较（P＞0.05），无统计学意义；各严重程度组IL-6水平组间两两比较无统计学差异（P＞0.05）（见表1）。

表1不同严重性程度组与对照组之间IL-6表达的比较（x-±s,pg/ml）

Table1ComparisonbetweenseverityandcontrolgroupinIL-6（x-±s,pg/ml）

注：F=1.835,P=0.143＞0.05。

3.2IL-6与ISOA之间的相关性相关性分析显示，IL-6与ISOA之间呈零相关（P＞0.05）（见表2）。

表2IL-6与ISOA之间的相关性

Table2CorrelationbetweenIL-6andISOA

注：r为相关系数。

4讨论

IL-6与KOA严重程度间的关系和特点如下：

正常人免疫组化测不出IL-6，但在OA滑膜衬里细胞中可以检测到其存在。IL-6和IL-1、TNF-α不同，虽然不能刺激软骨细胞及滑膜细胞产生PGE2和胶原酶，但可增强IL-1、TNF-α在OA中的破坏作用，促进成纤维细胞合成和基质微生物的降解，加重软骨的损伤。关节内局部高水平的IL-6还可刺激滑膜内的B淋巴细胞，参与OA时的病理免疫反应。但IL-6本身对蛋白酶、前列腺素或基质蛋白的合成没有直接作用，还可以刺激组织基质金属蛋白酶抑制因子（TIMP）的合成，从这个方面讲IL-6对软骨又有保护作用。因此，IL-6在OA的关节中有双重作用，既促进软骨分解，与MMPs有关，又能促进软骨的修复和再生。

有研究表明IL-6的水平在早期轻度患者滑液中的表达可能显著升高，但与病变程度并非完全一致。而本次研究我们发现，IL-6含量在KOA患者与对照组的比较中，IL-6的水平在病情严重程度相对较轻的患者中也可显著升高,但各严重程度组与对照组比较，无统计学意义（P=0.143＞0.05），可能与本试验样本含量较少，变化幅度较大有关；而IL-6在各KOA严重程度病例组组间比较（P＞0.05），无统计学意义，IL-6与ISOA指数呈零相关（r=0.078,P=0.651＞0.05），证实了IL-6表达水平与病变程度并非完全一致，IL-6在KOA中的双重作用，既促进软骨分解，又促进软骨的修复和再生。因此，我们尚不能以IL-6在关节滑液中的具体水平来对膝关节骨性关节炎的具体严重程度进行评估。

关节滑液来源于病变局部，相对于血清检测，更能客观而直接的反映其病变程度，因为各种标志物在进入血液循环系统之前，将在关节液或淋巴系统中进一步降解，关节液提供了用来识别从关节软骨所释放出的所有片段的更多机会；同时还可以避免或减少其他疾病及干扰因素对结果造成的影响。因此，检测分析关节滑液中IL-6在各严重程度组中的表达水平较血清检测具有更大的临床意义。但同时，关节滑液检查作为一种有创的检测方法，对于部分病情程度较轻或无明显临床症状的患者不易接受，其标本样较血清更难获取，故本次试验由此未将轻度严重程度的KOA患者纳入病例组进行检测，是本次研究不完整的憾事，对此尚有待于进一步的深入研究。

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