高效液相色谱法测定恩替卡韦分散片剂含量

高效液相色谱法测定恩替卡韦分散片剂含量

蓝丽萍

蓝丽萍(广东省惠州市中心人民医院516000)

【摘要】目的：建立高效液相色谱法（HPLC），用于恩替卡韦分散片中恩替卡韦含量的测定。方法：色谱柱选用安捷伦C18，流动相为“甲醇-0.1%甲酸的超纯水”，检测波长为254nm，进样量为10μL。结果：恩替卡韦在1～10μg/mL浓度范围内，线性良好，其回归方程为A=25.90c+2.31（r=0.999）。5个批次样品中恩替卡韦平均标示含量为99.20%。结论：本方法简便、准确，可用于恩替卡韦分散片中恩替卡韦含量测定。

【中图分类号】R927.2【文献标识码】B【文章编号】2095-1752（2013）12-0327-01

DeterminationofentecavirinentecavirdispersibletabletbyHPLC

【Abstract】Objective:TodevelopanHPLCmethodforthedeterminationofentecavirinentecavirdispersibletablet.Methods:DetemiantionwasperformedonAgilentC18column.Mobilephaseconsistedofmethanolandultrapurewater(0.1%formicacid).Thewavelengthwas252nmand10μLofsamplewasinjectedtoHPLCanalysis.Results:Thelinearrangeofentecavirwas1～10μg/mLanditsequationwasY=25.90c+2.31（r=0.999）.Theaveragedlabelingamountsofmaincomponentsof5batchesofsampleswere99.20%.Conclusions:Themethodissimple,rapidandaccurate.Itcanbeusedforthedeterminationofentecavirinentecavirdispersibletablet.

恩替卡韦是由美国百时美施贵宝公司研制开发的一种核苷类似物，临床上用于慢性乙肝的治疗，于2005年在中国批准上市。研究表明，恩替卡韦比其他核苷类药物更有效[1]。恩替卡韦对HBV的抑制作用强，所需药物浓度很低，它能够阻断嗜肝DNA病毒复制的3个时期:引导、反转录和DNA依赖的DNA合成[2]。本文建立恩替卡韦HPLC方法，用于恩替卡韦分散片中恩替卡韦含量的测定。

1仪器与材料

HPLC仪包括泵、进样器、紫外检测器购自安捷伦公司。恩替卡韦分散片（批号见表2）、恩替卡韦对照品（纯度为99%）以及处方辅料均由厂家提供。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为安捷伦C18，流动相的有机相为甲醇，水相为含0.1%甲酸的超纯水，采用梯度洗脱（见表1），流速保持为1.0mL/min；紫外检测检测波长设为254nm；进样量为10μL。

2.2溶液的制备

2.2.1供试品溶液：取同一批次恩替卡韦分散片5片，研成的粉末适量，约相当于恩替卡韦2mg，精密称定，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，过滤；精密量取滤液5mL，置于20mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。5个批次均按此操作配制。

2.2.2对照品溶液：精密称取恩替卡韦对照品为10mg，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为母液；精密量取母液10mL，置于100mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2.3方法选择性

取2.2.1项下供试品溶液、2.2.2项下对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样，并以空白辅料的甲醇溶液作为对照进样分析。结果，在上述色谱条件下，保留时间为12.54min，峰形对称，没有出现干扰。

2.4线性关系考察

取2.2.2项下对照品溶液，用甲醇稀释成浓度分别为10、8、5、2、1μg/mL的溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样分析，记录每个浓度下峰面积。以进样浓度（c）为横坐标，恩替卡韦的峰面积（A）为纵坐标进行线性回归，得方程A=25.90c+2.31，r=0.999，表明恩替卡韦在1～10μg/mL浓度范围内线性良好。

2.5精密度试验

取2.2.2项下对照品溶液，用甲醇稀释为2、5、8μg/mL的溶液，按2.1项下的色谱条件进样，每个浓度连续进样6次进行测定。结果，3个浓度的峰面积值的RSD均小于0.5%。

2.6重复性试验

精密称取同批样品6份，按2.1项下的色谱条件进样测定，并利用2.4项下的回归方程计算每份样品的含量。结果显示，平均含量为99.21％，RSD＝0.28％，表明本方法重复性良好。

2.7稳定性试验

取供试品溶液1份，在0、1、2、4h分别按2.1项下的色谱条件进样测定，以峰面积计算，RSD为0.23％，结果表明，供试品溶液在4h内相对稳定。

2.8回收率试验

取同批样品，按测试浓度的80％、100％、120％3个浓度分别加入恩替卡韦对照品，每个浓度3份，按2.1项下的色谱条件进样。结果发现，回收率为98.8%，RSD为1.1%。

2.9样品含量测定

取2.2.1项下6个批次供试品溶液，按2.1项下的色谱条件进样，记录峰面积，并按峰面积外标法，利用2.4项下回归方程计算含量，结果详见表2。结果表明，此5批恩替卡韦的平均标示含量为99.20%。

3讨论

3.1波长的选择

紫外全波长扫描显示，恩替卡韦在254nm处有吸收峰，且辅料、有关物质在相同的保留时间内没有干扰，因此选用254nm作为检测波长。

3.2流动相与梯度的选择

水相中加入0.1%的甲酸，有利于改善峰型，减小拖尾。本实验中，采用“甲醇-0.1%甲酸水”为流动相时，色谱峰基线稳定，恩替卡韦的峰形对称。在实验洗脱条件下，与其辅料和有关物质均能得到很好的分离。

综上所述，本方法操作简便、快捷，结果准确、可靠，能够快速、准确测定恩替卡韦分散片中恩替卡韦的含量，可用于该制剂中恩替卡韦的质量控制。

参考文献

[1]罗生强，张玲霞.恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎的最新进展.中国新药杂志，2006,15.

[2]中华医学会肝病学分会，中华医学会感染病学分会.慢性乙型肝炎防治指南.胃肠病学和肝病学杂志，2011，20.