蜂胶黄酮对龋齿病菌的体外抑菌实验

蜂胶黄酮对龋齿病菌的体外抑菌实验

邓博祥1邓浩文2向茜3宣逸婷4邓立5左雄

（1.长沙医学院2016级本科口腔医学2班湖南长沙410219）

作者介绍：邓博祥（1997-），男，汉族，湖南人，长沙医学院本科在读

基金项目：长医教[2018]77号-080

通讯作者：左雄伟，男，汉族，长沙医学院教师，从事多年的教学与科研工作。

摘要：目的探讨不同浓度的蜂胶黄酮对龋齿致病菌变形链球菌（S.m）、远缘链球菌（S.s）的影响。

方法配制不同浓度的蜂胶黄酮，得出最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）

结果蜂胶黄酮对S.m、S.s最小抑菌浓度(MIC)分别为0.40g/L、0.20g/L、;最小杀菌浓度(MBC)分别为0.80g/L、1.58g/L

结论在蜂胶黄酮浓度为0.40g/L时能完全抑制S.m、S.s的生长，在蜂胶黄酮浓度为1.58g/L时,能完全杀灭S.m、S.s

关键词蜂胶黄酮，龋齿，体外抑菌

龋病是人类的常见病及多发病之一，在各种疾病的发病率中，龋病位居前列，严重影响着人们的健康，蜂胶黄酮是一种天然的广谱抗菌物质[1]，有研究已证实蜂胶对葡萄球菌、大肠杆菌、白色链珠病、原生动物等具有抗病原微生物活性，因此研究蜂胶黄酮对龋齿病菌的抑菌作用有这重要的意义

1材料与方法

1.1：材料：

变形链球菌(S.m)和远缘链球菌(S.s)（首都医科大学口腔医学院生物研究室提供），BHI血琼脂培养基中，恒温箱，接种环，革兰染色试剂，TSA培养基(上海广悦生物科技公司提供)，蜂胶黄酮（湖南省桃江县名关蜂蜜养殖场提供）

1.2：蜂胶黄酮提纯方法[2]:

将天然蜂胶100g加工成颗粒状，放入棕色广口瓶内，加入60%乙醇500ml浸泡，将瓶子放于背光处，每日振荡四次，10天后用纱布过滤，过滤液体进行乙醇，水回收，实验时用60%乙醇稀释。

1.3龋齿致病菌纯培养

将冻干保存的菌种变形链球菌(S.m)和远缘链球菌(S.s)接种于BHI血琼脂培养基中,37℃微需氧活化培养48h(900ml/LN2,100ml/LCO2),经革兰染色镜检及生化鉴定为变形链球菌和远缘链球菌纯培养

1.4：相关指标测量

蜂胶对变形链球菌、远缘链球菌及其耐氟菌株的体外抑菌实验。将过滤除菌的100g/L的蜂胶溶液配制成25g/L的蜂胶TSA液,采用倍比稀释法将蜂胶配制成不同的浓度,最高浓度为25g/L,最低浓度为0.10g/L,共9个浓度,每支试管分装成1ml;采用麦氏比浊法[3]用TSA液体培养基将4种细菌配成细菌混悬液1.5×106CFU/ml,分别取0.05ml菌液加入1ml含不同浓度蜂胶的TSA中,37℃微需氧活化培养48h(900ml/LN2,100ml/LCO2),观察结果,实验管呈现澄明,摇匀后仍澄明者,认为该管无菌生长,从无菌生长的各管中找出最低药物浓度的实验管,该管的药物浓度即为最小抑菌浓度(MIC)。然后,将未见细菌生长的各管培养物各取一接种环涂布在TSA琼脂培养基中,37℃微需氧活化培养48h(900ml/LN2,100ml/LCO2),平板上无菌落生长的最小稀释度的药物浓度即为最小杀菌浓度(MBC)[4]。每一菌株的测定均重复3次,取MIC、MBC均值。设立阴性对照组和阳性对照组。

1.5：统计学分析

数据分析采用spss22.0进行Anova检验，检验水准α=0.05

2.实验结果：

2.1变形链球菌(S.m)最小抑菌浓度(MIC)

2.2远缘链球菌(S.s)最小抑菌浓度(MIC)

3.讨论：

龋病是一种常见口腔疾病随着城市人口的老龄化，其发病率呈明显的上升趋势。并且随着抗生素的长期使用可引起口腔和肠道菌群失调而导致其他疾病[5]。氟化物防龋是研究最多且广为认可的方法，但其应用有诸多局限性，所以探索一种新的有用的防龋材料成了当今的热点课题，蜂胶黄酮作为一种天然抗生素有广泛的抗菌活性，对口腔细菌及牙周致病菌均有抑制作用，本课题通过蜂胶黄酮对变形链球菌(S.m)和远缘链球菌(S.s)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度（MBC）的体外研究，科学的为蜂胶黄酮作为防龋材料提供了准确的剂量浓度范围。若实验条件允许，本实验还可进一步研究抗氟龋齿病菌的MIC和最小杀菌浓度MBC。

4.参考文献

[1]樊明文．关于免疫防龋［Ｊ］．中华口腔医学杂志，２００６，４１（５）：２７９－２８１．

[2]安砚波，王浩．响应面法优化蜂胶总黄酮的提取工艺[J]．中国蜂业，20i6，67(9)：46—49．

[3]刘莉华，宛晓春，李大祥．黄酮类化合物抗氧化活性构效关系的研究进展．安徽农业大学学报，2002，29(3)：265-270

[4]杨更森，侯晓薇。蜂胶对主要龋菌的实验报告[J].176现代口腔杂志1998年第12卷3期

[5]天佳主编．口腔疾病的微生物学基础．北京：人民卫生出版社，1999：43—55