肝舒健丸的质量标准研究

肝舒健丸的质量标准研究

刘灿辉

邵阳市食品药品检验所湖南邵阳422001

【摘要】目的：建立肝舒健丸的质量标准。方法：用TLC法对人参/三七、虎杖、丹参、白花蛇舌草、当归进行定性鉴别；用HPLC法测定虎杖中虎杖苷的含量。结果：薄层色谱图斑点清晰，阴性对照无干扰；虎杖苷的线性范围为0.038-0.38μg，r=0.9999，平均回收率99.1%，RSD为0.82%（n=6）。结论：该方法专属性强，灵敏度高，重现性好，可有效地控制肝舒健丸的质量。

【关键词】肝舒健丸；虎杖苷；薄层色谱法；高效液相色谱法

肝舒健丸为衡南县中医院生产的制剂品种，由人参、三七、虎杖、丹参、白花蛇舌草等21味药组成，具有柔肝理气，补脾健胃，清热解毒，活血化瘀的功效，用于慢性乙型肝炎的治疗。原质量标准仅有显微鉴别和熊果酸的薄层色谱鉴别，原标准中的熊果酸薄层色谱鉴别缺乏专属性，方中四味药中均含有熊果酸，故予以删除；对原显微鉴别进行了补充和完善；增加了人参/三七、虎杖、丹参、白花蛇舌草和当归的薄层色谱鉴别；并采用HPLC法对虎杖中虎杖苷进行含量测定，能更有效地控制本品质量。

1仪器和试药

仪器——高效液相色谱仪（型号：岛津LC-20A）、电子天平（型号：AB204-N型）以及梅特勒（上海）有限公司提供的电子天平（型号：AG-135）。

试药——三七对照药材（120941-201108）、丹参对照药材（120923-201113）、人参对照药材（120917-200609）、虎杖对照药材（120980-201005）、白花蛇舌草对照药材（121183-201003）、当归对照药材（120927-201014）、大黄素对照品（110756-200110）、大黄素甲醚对照品（110758-201013）、虎杖苷对照品(111575-200502，供含测用)。

2方法和结果

2.1薄层色谱的鉴别

2.1.1人参、三七薄层色谱鉴别（如图1所示）。

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图2蜈蚣TLC图

1.阴性样品2.3.4供试品

5.虎杖药材6.大黄素、大黄素甲醚

2.1.3丹参薄层色谱鉴别[1]（如图3所示）。

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图4白花蛇舌草TLC图

1.阴性样品

2.3.4供试品

5.白花蛇舌草对照药材

2.1.5当归薄层色谱鉴别[3]（如图5所示）。

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图5当归TLC图

1.阴性样品

2.当归对照药材

3.4.5供试品

2.2测定虎杖苷的含量（避光操作）

2.2.1UltimateTMXB-C18(4.6×250mm，5μm)——色谱条件色谱柱；乙腈-水（18：82）——流动相；306nm——检测波长；35℃——柱温；1.0ml/min——流速；10μl——进样量。

2.2.2制备对照品溶液——提取适量虎杖苷对照品，加稀乙醇制成溶液（20μg/1ml）。

2.2.3制备供试品溶液——提取本品剪碎并混匀，放置具塞锥形瓶中，加25ml的稀乙醇溶液，超声处理30分钟，再称定重量（放冷后），使用稀乙醇将减失重量补足，将其摇匀并进行过滤，取续滤液。

2.2.4制备阴性样品溶液——提取不含虎杖的阴性样品，制备方法与2.2.3项下方法相同。

2.2.5系统适应性试验——吸取10μl的对照品、10μl的阴性样品以及10μl的供试品溶液，将提取的供试品溶液注入到液相色谱仪中，按照上述色谱条件进行测定。如图6-8所示，结果显示阴性样品无干扰（见图6～8）。

2.2.6线性关系考察——分别精密吸取浓度为19.00μg/ml的虎杖苷对照品溶液2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，将对照品溶液注入液相色谱仪，测定峰面积积分值，横坐标：对照品浓度，纵坐标：峰面积，得虎杖苷的回归方程——r=0.9999，Y=35013X+1740.5，发现虎杖苷在0.038～0.38μg范围内。

图6对照品HPLC图图7供试品HPLC图图8阴性样品HPLC图

2.2.7精密度试验——取虎杖苷对照品溶液，进样6次，利用峰面积积分值计算虎杖苷的RSD为0.37%。

2.2.8稳定性试验——取同一供试品溶液，于0h、2h、4h、8h、12h、16h进样10μl，1.13%为虎杖苷峰面积RSD，则说明供试品溶液16h内处于稳定状态。

2.2.9重复性试验——取6份同一批号样品，测定其虎杖苷含量，结果RSD为1.44%，说明具有良好的重复性。

2.2.10回收率试验——取2.5g左右供试品（批号：20120320，含量：0.1025mg/g）6份，分别加入虎杖苷对照品适量，与2.2.3项下同法操作，如表1所示。

表1：虎杖苷回收率（n=6）

2.2.11样品含量测定，如表2所示。

3讨论

方中的人参和三七均为贵细药材，在TLC鉴别时，相互有干扰，所以在实验中将它们放在同一薄层板同时展开，结果比较理想。

在TLC鉴别白花蛇舌草时，原用齐墩果酸作对照[4]，但阴性样品有干扰，且缺乏专属性。后参照白花蛇舌草注射液标准，进行上柱处理，用5%三氯化铝乙醇溶液显色，结果比较理想。

在虎杖的TLC鉴别中主要鉴别其中的蒽醌类成分，而虎杖苷为其主要活性成分，具有重要的药理作用，例如抗脂质、抗过氧化损伤以及保护患者的肝脏等[5-6]，因此在本次实验中将虎杖苷的含量作为含量测定指标中的一项内容。在实验时曾考察回流和超声处理方法，结果相差不大，但回流的样品溶液难以过滤，因此在本次研究中选择超声处理方法是可行的。

本次实验结果表明，文中采用的质量控制方法具有较强的专属性以及较好的重现性，具有令人满意的回收率和检测的精密度，由此可得，该方法能够作为肝舒健丸的质量控制方法。

参考文献：

[1]苗明三、李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京：人民卫生出版社，2000：247

[2]卫生部药品标准中药成方制剂第十七册WS3—B—3176—98：67

[3]药典委员会.中国药典2010年版一部[S].北京：化学工业出版社，2010：70

[4]谭永红.吴苏澄.姜云平等.胃炎停胶囊中白花蛇舌草、延胡索、高良姜的薄层色谱鉴别[J].华西药学杂志.1998.13(4)：265

[5]林芸竹.龚涛.张志荣.复方虎杖降脂胶囊中虎杖的鉴别和虎杖苷的含量测定[J].华西药学杂志.2005.20(6)：544

[6]余琼.张玉萍.方步武.蒿鳖养阴软坚方中虎杖苷的含量测定[J].时珍国医国药.2010.21(4)：821