Afatinib对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响

Afatinib对膀胱癌T24细胞生物学行为的影响

李卓李远伟卢强陈佳

湖南省人民医院湖南师范大学附属第一医院泌尿外科

摘要：目的研究阿法替尼（Afatinib）对T24细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响。方法采用不同浓度的Afatinib（0，1，5，10，20umol/L）作用T24细胞，用噻唑蓝（MTT）法研究Afatinib对T24细胞的增殖能力的影响；用流式细胞术（FCM）检测Afatinib对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响；用Transwell实验研究Afatinib对T24细胞的侵袭能力的影响。结果Afatinib对膀胱癌T24细胞的增殖能力有着抑制作用；对T24细胞有着促进凋亡的作用，Afatinib对膀胱癌T24细胞的侵袭能力有着抑制的作用。结论Afatinib抑制了T24细胞的增殖和侵袭能力，促进了T24细胞的凋亡。

关键词：Afatinib；侵袭；增殖；凋亡

近十多年来，随着分子肿瘤学的发展及对肿瘤与宿主之间复杂关系的深入研究，针对信号转导系统的信号转导干预治疗近年来进展迅速，并以这些通路和分子为靶点发展新的药物。这些药物在治疗既往化疗耐受的患者中取得了突破性进展，也增强了人们对于靶向药物治疗恶性肿瘤的信心。

Afatinib是一种不可逆的竞争性人类表皮生长因子受体1/2（HER-1/HER-2）抑制剂，它通过竞争性结合受体ATP结合区域方式特异性抑制人类表皮生长因子（EGFR）酪氨酸激酶的活性。有证据显示，在多种恶性肿瘤均发现EGFR的水平上调，如肺癌，头颈部癌，乳腺癌等，其中也包括膀胱癌【1，2】，本文就Afatinib对膀胱癌T24细胞体外的作用进行观察，初步探讨其在膀胱癌治疗中的可能价值。

1材料和方法

（1）主要试剂

人膀胱癌T24细胞株中国科学院上海细胞生物研究所

BIBW2992（Afatinib）美国Selleck

噻唑蓝（MTT）上海沪峰

（2）T24细胞培养和传代

T24细胞株置入DMEM（10%小牛血清、100U/mL青霉素、100U/mL链霉素）培养液，低速离心3min，弃去上清液，加入培养液，放置37oC，5%CO2培养箱中培养。当细胞约80%融合后，按1：5及时传代。每次传代时用0.25%胰酶（含0.01%EDTA）溶液消化。

（3）Afatinib对T24细胞细胞增殖的影响

取对数生长期的T24细胞制成单细胞悬液，调整配成细胞浓度为5×104/mL的细胞悬液。培养箱内培养。

（4）流式细胞术（FlowCytometry，FCM）检测T24细胞抗凋亡能力实验（Annexin-V/PI双染法）：

（5）细胞侵袭实验（Transwell法）检测Afatinib对T24细胞细胞侵袭的影响

（6）统计学分析

本实验数据资料通过SPSS17.0forWindows分析统计软件进行单因素方差分析。各实验计量资料用（X±S）表示，P<0.05表示差异有显著意义。

2.实验结果

（1）MTT法检测不同浓度Afatinib对人膀胱癌T24细胞增殖能力的影响

3讨论

国内外已经有许多文献报道EGFR与多种肿瘤的关系：Araujo【3】等人统计过在非小细胞肺癌中，有43-83%的患者有EGFR的高表达，同时他们还发现这些高表达EGFR的肿瘤病人有细胞突变的酪氨酸激酶受体，而这些受体被证实是EGFR受体突变的结果，这些突变的受体可以被酪氨酸激酶抑制剂吉非替尼所抑制。FriessH【4】等人发现HER-3与胰腺癌的病理分期相关，高度表达EGFR的患者病理分期高，生存率低。

通过我们的实验，Afatinib对膀胱癌T24细胞的增殖能力有着抑制作用，其抑制作用呈时间和剂量依赖性。对膀胱癌T24细胞有着促进凋亡的作用，对膀胱癌T24细胞的侵袭能力有着抑制的作用。Afatinib有望成为治疗膀胱肿瘤的一种有效安全的手段，不过仍需更多的理论基础和实验研究来佐证。

参考文献：

[1]MendelsohnJ.Targetingtheepidermalgrowthfactorreceptorforcancertherapy.JClinOncol，2002，20（18）：1-13.

[2]MoscatelloDK.Frequentexpressionofamutantepidermalgrowthfactorreceptorinmultiplehumantumors.CancerRes，1995，55（10）：5536-5539

[3]AraujoA，RibeiroR，AzevedoI，etal.Geneticpoly-morphismsoftheepidermalgrowthfactorandrelatedreceptorinnon-smallcelllungcancer-areviewoftheliterature.Oncologist，2007，12（2）：201–210

[4]FriessH，YaanakaY，KobrinMS，etal.EnhancederbB-3expressioninhumanpancreaticcancercorrelateswithtumorprogressionClinCancerRes，1995，1（11）：1413-1425.