SephadexG-10凝胶色谱法测定头孢羟氨苄的聚合物

SephadexG-10凝胶色谱法测定头孢羟氨苄的聚合物

万能

（湖南食品药品职业学院湖南长沙410208）

【摘要】目的：建立HPLC法测定头孢羟氨苄聚合物的方法。方法：色谱柱为葡聚糖凝胶PharmadexG-10柱（300mm×130mm），流动相A：0.05mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.0），流动相B：0.5%葡萄糖溶液。流速为0.5ml/min；检测波长为254nm，进样量为200μl。结果：头孢羟氨苄进样浓度在2mg/ml～8mg/ml的范围内与头孢羟氨苄高分子聚合物的峰面积呈良好线性关系（r=0.9998）。结论：该方法简便准确，灵敏度高，重现性好。

【关键词】头孢羟氨苄；聚合物；PharmadexG-10

ABSTRACT：OBJECTIVEToestablishaHPLCmethodfordeterminationofthepolymersinCefadroxil.METHODSTheChromatographiccolumnwasSephadexG-10(300mm×13mm),mobilephaseA,0.05mol.L-1phosphatebuffer(pH7.0);mobilephaseB,0.5%glucose,theflowratewas0.5ml.min-1,thedetectionwavelengthwas254nmandtheinjectionvolumewas200uL.RESULTSThecalibrationcurvewaslinearintheconcentrationrangeof2～8mg.Ml-1(r=0.9998).CONCLUSIONThemethodissimple,accurate,sensitiveandreproducible.

KEYWORDS：Cefadroxil；Polymers；SephadexG-10

β-内酰胺类抗生素临床中最常用的基本药物，同时也是较容易发生不良反应的药物之一，多年来的研究已证明，抗生素所致的过敏反应并非由药物本身所致，而是与制剂中高分子聚合物及内源性聚合物有关。2005年版中国药典已对收载的部分β-内酰胺类抗生素制定了所含聚合物的限度。对头孢羟氨苄所含相似聚合物的测定方法未见有关报道，本文利用葡聚糖凝胶PharmadexG-10凝胶色谱系统实现了对头孢羟氨苄中高分子聚合物的分离分析，为该药的质量控制提供一个新的检测方法。

1仪器及试药

1.1仪器

岛津SPD-10A高效液相色谱仪；T2000p色谱工作站，上海天美科学仪器有限公司；Ap250D十万分之一电子天平，上海奥豪斯国际贸易有限公司。

1.2试药

由A制药有限公司生产的头孢羟氨苄3批，批号分别为090104、090901、091103；由B制药有限公司生产的头孢羟氨苄2批，批号分别为20090601、20090903。蓝色葡聚糖2000（Parmacia分装），头孢羟氨苄对照品（批号：0431-9501，中国药品生物制品检定所）。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：葡聚糖凝胶G-10柱，10mm×300mm，40～120?m，由大连依利特公司生产。流动相A:pH7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液［0.05mol/L磷酸氢二钠溶液-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液（61：39）］；流动相B：0.5%葡萄糖溶液；检测波长：254nm；流速：0.5ml/min；进样量：200ml。用流动相B为流动相，0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000进行测定，理论塔板数892，拖尾因子1.77（见图1）。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液：取头孢羟氨苄对照品适量，用水溶解并稀释制成0.1mg/ml的溶液（见图2）。

2.2.2样品溶液：取头孢羟氨苄约0.25g，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，立即进样（见图3）。

图3供试品的聚合物图谱（流动相A）

2.3对照溶液的线性考察

精密称取头孢羟氨苄对照品5.1mg、7.8mg、10.6mg、15.3mg、19.7mg，分别置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取200ml注入液相色谱仪，以流动相B为流动相，记录色谱图，测定结果见表1。

表1头孢羟氨苄线性考察结果

图3头孢羟氨苄缔合物峰的线性范围

2.4缔合物峰的线性

取样品(090901)适量，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度制成系列浓度的溶液，立即精密量取续滤液200ml注入液相色谱仪，以流动相A为流动相，记录缔合物峰的峰面积，测定结果见表2。

表2缔合物峰线性考察结果

图4头孢羟氨苄缔合物峰的线性范围

2.5对照品溶液的重复性

取对照品溶液，连续进样6次，以流动相B为流动相，记录色谱图，并计算相对标准偏差(RSD)，结果见表3。

表3进样精密度测试结果

从表4数据可知，5批样品头孢羟氨苄聚合物的含量在0.076%～0.092%之间。

3讨论

3.1色谱条件：参照中国药典2005年版二部中收载的部分抗生素品种标准中的聚合物测定条件，分别以pH7.0的0.1mol/L磷酸盐缓冲液和pH7.0的0.05mol/L磷酸盐缓冲液为流动相A，对蓝色葡聚糖2000溶液与降解样品溶液进行研究，结果表明：以0.05mol/L磷酸盐缓冲液为流动相A，流速为0.5ml/min时，聚合物分离效果较好。参照文献【1】分别以水、0.01%十二烷基硫酸钠和0.5%葡萄糖溶液为流动相B，对蓝色葡聚糖2000溶液与对照品溶液进行研究，结果表明：以0.5%葡萄糖溶液为流动相B，流速为0.5ml/min时，头孢羟氨苄可缔合形成表观分子量较大的缔合物。

3.2聚合物的形成是一个动态的过程，聚合物的含量会随时间的延长而增大，故测定聚合物的含量时应在溶液配制后立即进样检测。

参考文献：

[1]霍秀敏.β-内酰胺类抗生素高分子杂质的研究.药品评价,2005,2(5),324-326.

[2]中国药典2005年版二部.