托法替尼凝胶剂对日本大耳白兔的重复给药毒性研究

托法替尼凝胶剂对日本大耳白兔的重复给药毒性研究

李洁陈倩

李洁陈倩

【摘要】目的研究连续给予托法替尼凝胶剂对日本大耳白兔的毒性作用。方法以日本大耳白兔为研究对象，连续给药3个月，以体重、血生化、血液学、脏器系数、病理学检查为指标，评价其对日本大耳白兔的毒性作用。结果与对照组相比，各剂量组在外观、行为、体重、脏器系数、血液学和生化指标上均无明显差异；病理检查未见与药物相关的病变；停药后，未见延迟毒性反应。结论托法替尼凝胶剂长期用药，对日本大耳白兔无明显损害。

【关键词】托法替尼；凝胶剂；重复给药毒性

银屑病是一种常见的慢性皮肤病，目前认为与机体免疫功能失调密切相关[1,2]。托法替尼（Tofacitinib）是辉瑞公司开发的一种JAK激酶抑制剂，2012年批准上市，剂型为口服片剂，用于中、重度类风湿关节炎的治疗。Tofacitinib能抑制TNF、IFN-γ，减少IL-6、CD4的增殖作用，对银屑病等严重皮肤炎症有较好的疗效[3,4]。

Tofacitinib口服制剂存在较多不良反应，其中胃肠道反应和上呼吸系统感染最常见。因此给药途径的改变是减少其副作用的有效方法。研究表明，Tofacitinib经皮给药可明显降低口服制剂的副作用，并充分发挥局部治疗作用[5,6]。为了观察托法替尼凝胶剂可能产生的毒性反应和严重程度，本文参照有关指导原则，进行日本大耳白兔长期毒性试验研究，有关结果如下。

仪器与试药

1.仪器

CD3700血球分析仪（美国雅培）、CA1500血凝分析仪（日本希森美康）、生化分析仪（日本日立）、SPS401F电子天平(美国奥豪斯)、LEICAE1140包埋仪（德国飞勒斯）、HM325轮转切片机（德国美康）、E600光学显微镜（日本尼康）。

2.试剂与药品

托法替尼凝胶剂（含量：0.5%、2%，批号：140725）；空白凝胶（批号：140915）。

3.试验动物

日本大耳白兔，体重（2.3±0.2）kg，雌雄各半，年龄大约120d，合格证号：SCXK(粤)2003-0006。

方法

1.试验剂量的设置[7]

低剂量组：50mg/kg?d；高剂量组：200mg/kg?d；对照组：同等重量赋形剂（10g/kg?d）。

2.分组及给药方法

托法替尼凝胶剂低、高剂量组和对照组各10只，雌雄各半。给药前将动物脊柱两侧去毛，给药后玻璃纸覆盖，胶布和绷带加以固定，另一侧皮肤作为对照。6h后生理盐水洗去残留物，每天给药一次，连续给药3个月。

3.察指标

3.1一般指标

给药后连续观察动物外观体征和行为活动、粪便、饮水、进食量、皮肤刺激等情况，中毒反应的动物重点观察，死亡动物及时尸检。

3.2血液学指标

采血检测红细胞计数、网织红细胞计数、血红蛋白、红细胞容积、平均红细胞容积等指标。

3.3脏器称重和脏器系数

试验结束，剖取动物心、肝、脾、肺、肾、胸腺、睾丸、附睾、卵巢、子宫、脑等脏器，称重并计算脏器系数，脏器系数=脏器重(g)/体重(g)×100%。

3.4病理组织学检查

试验结束取脑、脊髓、垂体、胸腺、甲状腺、食管、唾液腺、胃、十二指肠等进行病理组织检查。

3.5恢复期观察

停药后，各组留4只家兔，雌雄各半，观察4周，考察毒性反应的可逆程度及延迟毒性反应。

3.6数据分析

数据用平均值±标准差表示，数据间差异性用SPSS13.0软件中的t检验，P＜0.05代表有显著差异。

结果

1.对动物一般状况的影响

给药期：给药1d后，各组均有1～3只兔皮肤出现红斑，继续给药红斑消失；高剂量组有1只动物在给药5周时脖子有1脓包，随后脓包自行破溃；各组均有2只兔脚掌皮炎。

恢复期：高剂量组1只兔在第2d突然呼吸困难,按濒死动物处理，进行有关检查，其它各组动物体征，行为活动、呼吸、粪便末见异常。

2.对血液生化指标的影响

给药期和恢复期，各剂量组指标与对照组比较无显著差异（P＞0.05）。

3.对脏器系数的影响

给药期和恢复期，各剂量组脏器系数与对照组比较无显著差异（P>0.05）。

4.病理组织学检查

给药期：高剂量组1例动物可见纤维细胞弥漫性增生，其它各组动物各脏器均未见异常。

恢复期：高剂量组濒死动物1例，局部肺泡腔消失；脑膜增厚，有大量单核细胞浸润；脊髓可见脊膜增厚，脊膜内和外围有大量单核细胞浸润，其它各组动物未见异常。

讨论

给药初期，部分动物皮肤出现轻度刺激性，但给药不久刺激症状消失，由于对照组也有刺激性，判断为赋形剂引起，同时少数动物脚掌皮炎，可能是家兔脚底皮毛稀软引起的。

高剂量组有动物的白细胞、嗜中性粒细胞和淋巴细胞略高于对照组，经病理检测，推测为动物个体差异，如单个动物脚掌皮炎较重、肝病及脖子脓包所致。高剂量组1只兔在恢复期濒死（病理切片判断为脑脊髓膜炎）。为了弄清是否药物所致，对高、低剂量组的血药浓度进行了含量检测，结果表明各剂量给药血药浓度检测值在给药期间内未发生变化，推测病变不是药物导致的，应该为自发性病变。

本次重复给药毒性试验结果表明，托法替尼凝胶剂按推荐人临床拟用剂量的416倍连续给药3个月，未发现明显的毒副作用，提示一定的临床剂量、给药途径和疗程应用托法替尼凝胶剂是安全的，研究结果为下一步的研究提供参考。

参考文献

[1]MendoncCO?BurdenA.D.Currentconceptsinpsoriasisanditstreatment[J].Pharmacology&Therapeutics,2003,99(2):133–147.

[2]WinterfieldLS,MenterA,GordonK,etal.Psoriasistreatment:currentandemergingdirectedtherapies[J].AnnRheumDis,2005,64(Suppl2):ii87-ii90.

[3]GhoreschiK.,JessonMI,LiuX.,etal.Modulationofinnateandadaptiveimmuneresponsesbytofacitinib(CP-690,550)[J].JImmunol,2011,186(7):4234-4243.

[4]MurrayPJ.TheJAK-STATsignalingpathway:inputandoutputintegration[J].JImmunol,2007,178(5):2623-2629.

[5]BalagueC.,PontM.,PratsN.,etal.Profilingofdihydroorotatedehydrogenase,p38andJAKinhibitorsintheratadjuvant-inducedarthritismodel:atranslationalstudy[J].BrJPharmacol,2012,166(4):1320-1332.

[6]WinthropKL.,YamanakaH.,ValdezH.,etal.Herpeszosterandtofacitinibtherapyinpatientswithrheumatoidarthritis[J].ArthritisRheumatol,2014,66(10):2675-2684.