西藏农牧学院公共教学部 860000
摘要:本研究利用紫外分光光度法对林芝下察隅“红阳猕猴桃”的维生素C进行测定,同时与四川猕猴桃维生素C含量进行对比分析。该方法具有准确、快速、稳 定、试剂易得等优点。通过测定,L-抗坏血酸的最大吸收波长为267nm,以此为依据绘制标准曲线对样品维生素C含量进行测定。结果表明林芝下察隅“红阳猕猴桃”维生素C的含量要明显高于市面上流行的四川品种。
关键词:紫外分光光度法 猕猴桃 维生素C
猕猴桃(学名:Actinidia chinensis Planch),也称奇异果,被称为“水果之王”[1]。其含有丰富的糖类、维生素 C、氨基酸和猕猴桃碱等。其中维生素C含量远高于其他一般果蔬。果蔬中维生素C含量的测定一般采用分光光度法、荧光法、高效液相色谱法、滴定法等。果蔬中维生素C主要以还原型抗坏血酸的形式存在[2]。笔者采用分光光度法测得L—抗坏血酸的最大吸收波长为267nm, 进而通过作出L-抗坏血酸标准曲线的方法测定两种不同品种猕猴桃中维生素C的含量[3]。具有快速、简便、准确的特点。
林芝下察隅“红阳”猕猴桃产自西藏自治区林芝市察隅县所辖下察隅镇。2017年12月22日,原中华人民共和国农业部正式批准对“下察隅“红阳”猕猴桃”实施农产品地理标志登记保护。地理坐标为东经95°41′-98°45′,北纬27°44′-29°32′。下察隅“红阳”猕猴桃保护区位于喜马拉雅山与横断山过渡地带的藏东南高山峡谷区,是典型的高山峡谷和山地河谷地貌[4]。下察隅“红阳”猕猴桃保护区地处原始森林地带,紧邻慈巴沟自然保护区,海拔低,植被茂密、四季常绿。保护区及周边人口密度低,以传统的农耕为主,无工厂、无污染,另外受印度洋暖湿气流的影响,气候独特,温和多雨,日照时间长。黑色沙壤土,富含有机质。
1、实验部分
1.1 仪器试剂
(1)UV725型紫外-可见分光光度计;石英吸收池2个;榨汁机;100mL容量瓶6个;1000mL
容量瓶1个;25mL容量瓶6个;1mL 吸量管。
(2)L-抗坏血酸
1.2 实验方法
(1)配制标准溶液:称取0.100g L-抗坏血酸,用蒸馏水溶解并定量转移至100ml的容量瓶中,定容、摇匀。配制好的溶液浓度为1000ug/L。分别吸取上述溶液0.00mL,1.00mL,2.50mL,5.00mL,10.00mL,15.00mL
于6只洁净且干燥的100mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至标线,摇匀。配制成浓度分别为0ug/L、10ug/L、25ug/L、50ug/L、100ug/L、150ug/L的6组L-抗坏血酸标准溶液。编号为1-6标样。(2)吸光度的测定。
绘制吸收光谱曲线。以蒸馏水为参比溶液,取上述配制的含L-抗坏血酸标准溶液中的标样5, 在220-320nm 范围内每间隔5nm测定一次吸光度,以波长为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制L-抗坏血酸的吸收光曲线,并确定最大吸光度对应波长 λmax。
(3)绘制标准曲线。以蒸馏水为参比,取上述配制的编号1-6标准溶液,于λmax波长处测吸光度,以溶液浓度为横坐标,吸光度为纵坐标作标准曲线。
(4)样品分析:样品清洗晾干。称取下察隅“红阳”猕猴桃(样品A)三份,质量分别为2.5104、2.5455、2.5566标号为样品A1、A2、A3分别放入榨汁机获得三份匀浆,用水稀释并将三份样品各移入25mL容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀。各取25ml,各分装在两只离心试管于 1000r/min下,离心10min,各取上层取清液0.3ml,以蒸馏水为参与在λmax处测吸光度。
称取四川猕猴桃(样品B)三份,质量分别为2.5072、2.5099、2.5542标号为样品B1、B2、B3分别放入榨汁机获得匀浆三份,用水稀释并将三份样品各移入25mL容量瓶中,并稀释至刻度,摇匀。各取25ml,各分装在两只离心试管于1000r/min 下,离心10min,各取上层取清液0.3ml,以蒸馏水为参与在 λmax处测吸光度。
二、结果与讨论
1. 吸收曲线
由
y
上述实验方法绘制L-抗坏血酸的吸收曲线(图一),由图一可知L-抗坏血酸的最大吸收波长为267nm处,以此作为标准曲线及样品分析的定量依据。
0.3000
0.2000
0.1000
X
0
220
240
2600
280
300
320
图1吸收光谱谱线2. 标准曲线
按上述实验方法根据表1绘制 A-M(100mL 容量瓶中所含维生素C的质量 ) 标准曲线 ( 图 2)。
表1
序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 |
A | 0.0000 | 0.0205 | 0.0605 | 0.1136 | 0.2598 | 0.4097 | 0.5540 |
M(ug/L) | 0 | 10 | 25 | 50 | 100 | 150 | 200 |
0
50
100
150
200
250
X
0.1000
0.2000
0.3000
0.4000
0.5000
0.6000
Y
图2标准曲线
3.样品测定及实验结果
将实验所测定的林芝下察隅“红阳”猕猴桃和四川猕猴桃的测定计算结果列于表 2 中。
表2
原始编号 | 序号 | 称重/g | 提取ml | 取液 | A | 含量mg/g | 平均含量 mg/g |
样品A | 1 | 2.5104 | 25.00 | 0.300 | 0.3257 | 3.998 | 3.870 |
2 | 2.5455 | 25.00 | 0.300 | 0.3196 | 3.872 | ||
3 | 2.5566 | 25.00 | 0.300 | 0.3097 | 3.740 | ||
样品B | 1 | 2.5072 | 25.00 | 0.300 | 0.2725 | 3.371 | 3.394 |
2 | 2.5099 | 25.00 | 0.300 | 0.2755 | 3.403 | ||
3 | 2.5542 | 25.00 | 0.300 | 0.2809 | 3.407 |
计算公式:维生素C含量(mg/g)=C×V/W
式中:C—通过标准曲线差的提取的样液中VC含量mg/mL;
V—提取样液总体积mL;
W—样品重量g。
样品分析:称取林芝下察隅“红阳”猕猴桃和四川猕猴桃,各三份分别测定上述6中样品中维生素C含量[mg/g] 分别为:样品A1 3.998, 样品A2 3.872, 样品A3 3.740, 平均含量3.870。样品B1 3.371, 样品B2 3.403,样品B3 3.407,平均含量3.394。由以上数据可见,林芝下察隅“红阳”猕猴桃维生素C含量明显高于四川猕猴桃维生素C含量。
结语
本次试验测量快速、稳定、使用试剂简单易得,经分析,本方法快速、准确、简便,有利于提高工作效率。
参考文献:
1[] Zuo Lang,tal.Evaluation of Antioxidant and Antiproliferative Properties of Three Actinidia( Actinidia kolomikta,ctinidia arguta,ctinidia chinensis )Extracts in Vitro[J].International Journal of Molecular Sciences,012,3(5):5506-5518.