植物油中脂肪酸组成的快速高效测定

植物油中脂肪酸组成的快速高效测定

王晓敏

佛山市禅城区粮油检测中心 广东 佛山 528000

【摘要】：本实验建立了一套快速高效的植物油中脂肪酸组成的测定方法。在GB 5009.168-2016的基础上改良了植物油中脂肪酸组成的测定方法,对皂化及甲酯化过程进行了优化，待测液经离心后，进入GC-FID进行测定，通过优化的程序升温条件，37种脂肪酸甲酯均能很好地分离，植物油中的脂肪酸组成及含量均能得到正确的分析。结果表明，该实验方法缩短了前处理及仪器分析时间，使用更少更安全的化学试剂，同时37种组分均能高效分离，可以作为植物油中脂肪酸组成的快速测定技术得以推广和应用。

【关键词】：脂肪酸组成；气相色谱法；植物油

食用油脂中的脂肪酸是人体主要的热量来源之一,同时能提供人体必需而自身又不能合成的必需脂肪酸。《中国居民膳食指南（2016）》建议食用油每天摄入量为25～30g，人体通过膳食摄入的脂肪中，约50%就是来自食用油脂^［1］。相较于动物油，植物油中含有较多不饱和脂肪酸，对人体的健康有很大益处^［2］，因此，食用植物油作为人们生活中的重要副食品，是人体必需能量的重要来源，质量好坏与每个人的身体健康息息相关。脂肪酸组成作为食用油的基本特性之一，其测定对食用油类别的判定极其重要。

1 材料与方法

1.1 原料与试剂

1.1.1 花生油

1.1.2 37种脂肪酸甲酯混标，ANPEL，CDAA-252795-25mg

1.1.3 正庚烷，色谱纯

1.1.4 甲醇，色谱纯

1.1.5 氢氧化钾

1.2 仪器和设备

1.2.1 气相色谱仪，岛津，GC 2010 Plus

1.2.2 万分之一电子天平，德国赛多利斯股份有限公司，BS224S

1.2.3 低速台式离心机，湘仪实验仪器开发有限公司，L600

1.2.4 漩涡振荡器，上海热电仪器有限公司，M37610-33CN

1.2.5 SP-2560毛细管色谱柱，SUPELCO，100.0m×0.250mm×0.20μm

1.3 试剂配制

1.3.1 37种脂肪酸甲酯标准溶液：将37种脂肪酸甲酯标准物质全部转移至10mL容量瓶中，正庚烷定容。

1.3.2 氢氧化钾甲醇溶液（2mol/L）：将13.1g氢氧化钾溶于100mL甲醇中，涡旋溶解混匀，注意放热。

1.4 实验方法

1.4.1 试样的称取

称取均匀试样0.1g（精确至0.1mg，约含脂肪100mg）至50mL具塞离心管中。

1.4.2 脂肪的皂化和甲酯化

于1.4.1试样中加入10mL正庚烷（1.1.3），涡旋混匀；加入3mL氢氧化钾甲醇溶液（1.3.2），涡旋1min，4000rpm离心3min，取上清液上机。

1.5 仪器方法

进样口温度：250℃；进样量：1μL；进样模式：分流；分流比：20:1；柱流量：1.58mL/min柱温条件：初始温度50℃，保持2min，以25℃/min升至105℃，保持2min，以15℃/min升至190℃，保持10min，以1℃/min升至210℃，保持10min，以10℃/min升至230℃，保持10min；检测器：FID；检测器温度：300℃。

2 结果与分析

2.1 定性分析

通过比较未知峰与同样条件下测得的37种脂肪酸甲酯标准溶液的保留时间，对脂肪酸进行定性分析。

图1 37种脂肪酸甲酯混标色谱图

备注：1.丁酸甲酯；2.己酸甲酯；3.辛酸甲酯；4.癸酸甲酯；5.十一碳酸甲酯；6.十二碳酸甲酯（月桂酸甲酯）；7.十三碳酸甲酯；8.十四碳酸甲酯（肉豆蔻酸甲酯）；9.顺-9-十四碳一烯酸甲酯；10.十五碳酸甲酯；11.顺-10-十五碳一烯酸甲酯；12.十六碳酸甲酯（棕榈酸甲酯）；13.顺-9-十六碳一烯酸甲酯；14.十七碳酸甲酯；15.顺-10-十七碳一烯酸甲酯；16.十八碳酸甲酯（硬脂酸甲酯）；17.反-9-十八碳一烯酸甲酯；18.顺-9-十八碳一烯酸甲酯（油酸甲酯）；19.反-9,12-十八碳二烯酸甲酯；20.顺-9,12-十八碳二烯酸甲酯（亚油酸甲酯）；21.二十碳酸甲酯（花生酸甲酯）；22.顺-6,9,12-十八碳三烯酸甲酯（γ-亚麻酸甲酯）；23.顺-11-二十碳一烯酸甲酯；24.顺-9,12,15-十八碳三烯酸甲酯（α-亚麻酸甲酯）；25.二十一碳酸甲酯；26.顺-11,14-二十碳二烯酸甲酯；27.二十二碳酸甲酯（山嵛酸甲酯）；28.顺-8,11,14-二十碳三烯酸甲酯；29.顺-13-二十二碳一烯酸甲酯（芥酸甲酯）；30.顺-11,14,17-二十碳三烯酸甲酯；31.顺-5,8,11,14-二十碳四烯酸甲酯（花生四烯酸甲酯）；32.二十三碳酸甲酯；33.顺-13,16-二十二碳二烯酸甲酯；34.二十四碳酸甲酯（木焦油酸甲酯）；35.顺-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸甲酯（EPA甲酯）；36.顺-15-二十四碳一烯酸甲酯（神经酸甲酯）；37.顺-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸甲酯（DHA甲酯）

2.2 定量分析

每一组分的含量与峰面积成正比，根据面积归一法求出植物油中脂肪酸的相对含量。

图2 花生油中脂肪酸组成色谱图

表1 花生油中脂肪酸组成

3 结论

本实验在GB 5009.168-2016的基础上改良了植物油中脂肪酸组成的测定方法，使用了氢氧化钾甲醇溶液对脂肪进行了皂化及脂肪酸甲酯化，简化了过程，同时避免了使用危害性较大的三氟化硼甲醇溶液，待测液经涡旋、离心后，进入GC-FID进行测定。通过优化的程序升温条件，37种脂肪酸甲酯总体分析时长为63min，其中60min内已完成全部出峰，37种目标峰均能很好地分离，植物油中的脂肪酸组成及含量均能得到正确的分析。对该方法进行了重复性实验,其相对标准偏差在4%以下,因此该方法具有很好的重复性。

参考文献:

[1]中国居民膳食指南[M].2016

[2]马冠生. 动物油？植物油？健康选择有理“油”! [N]. 中国医药报, 2014-08-25 (008)