雷公藤配伍乌梅对小鼠血肌酐、尿素氮的影响

雷公藤配伍乌梅对小鼠血肌酐、尿素氮的影响

王加峰

山东中医药大学

摘要　目的:通过对实验小鼠血肌酐和尿素氮指标的测定分析研究雷公藤配伍乌梅的减毒效果。方法:根据每组小鼠的质量（0.2ml/10g）:分别以雷公藤与乌梅1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1：10、2:1、3:1、4:1、5:1、10:1比例、雷公藤单煎煮取一定量的水煎液，分别标记为1至12组，13组为空白对照组(生理盐水)。按照0.2ml/10g的量按组给小鼠连续灌胃7天后，每只小鼠分别摘眼球取血，以3500 r/min离心10 min，吸取上清液，分别按说明书使用血肌酐、尿素氮试剂盒，分别使用分光光度计测定其吸光度值。结果: 总体来说，雷公藤配伍乌梅具有减毒功效，对于小鼠血肌酐、尿素氮指标具有积极影响。对于小鼠血肌酐指标，雷乌配伍水煎液中，雷乌10:1水煎液作用最好，雷乌1：10水煎液作用最差，且其毒副作用高于雷公藤单煎水液。对于小鼠尿素氮指标，雷乌配伍水煎液中，雷乌10:1水煎液作用最好，但其效果略低于雷公藤单煎水液，雷乌1:5水煎液作用最差。

关键词：血肌酐 尿素氮 雷公藤 乌梅

一、综述

雷公藤性苦、辛、寒，有大毒，归肝、肾经，具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛、杀虫解毒等功效，常用于治疗类风湿性关节炎、麻风病、顽癣、湿疹、疥疮等。从药理作用来看，雷公藤有抗炎、镇痛、抗肿瘤、降低血液粘滞性、改善微循环及降低外周血管阻力、促进肾上腺合成皮质激素样的作用，同时，对多种肾炎模型有预防和保护作用。然而，雷公藤的毒性成分大大降低了雷公藤在各个领域的广泛应用，据临床观察,雷公藤的毒副作用发生率为58.1%,主要表现为对肾脏、内分泌系统的损害。孙蓉等将雷公藤对大鼠肾毒性作了研究,发现雷公藤高、低剂量组对大鼠肾脏造成不同程度的肾脏形态学改变,主要是高剂量组皮质肾小管内有大量的均匀红染物质,肾小管上皮可见浊肿,间质内淋巴细胞增多、血管扩张、部分肾小球囊扩张、毛细血管球缺血。张鑫提出雷公藤制剂导致肾损害主要表现为，逐渐发生或迅速出现少尿"水肿"血尿"蛋白尿"管型尿"腰痛或伴肾区叩击痛等，严重者可致急性间质性肾炎"急性肾功能不全，甚至造成急性肾衰竭。

现如今临床上已有较多雷公藤配伍减毒增效的研究，最常见为雷公藤配伍甘草，如：马哲通过雷公藤配伍甘草减毒增效研究发现雷公藤与甘草配伍后，雷公藤甲素的含量有所降低。此外，陈厚爱等采用均匀设计方法进行实验，提示女贞子对雷公藤多苷在一定程度上有减毒作用。对于雷公藤对肝肾的副作用现有配伍何首乌、蛇床子、芦荟、大枣、刺蒺藜、半枝莲达到减毒效果的研究。对于雷公藤生殖系统的副作用现有配伍巴戟天、淫羊藿、枸杞子、车前子、覆盆子达到减毒效果的研究，虽然我国已有关于雷公藤配伍的多方面的研究，但临床应用并不明显。

乌梅为传统的收敛固涩药,始载于《神农本草经》,列为中品,由蔷薇科植梅Prunusmume(Sieb.)Sieb.etZucc.干燥近成熟果实经熏制或烘制等方法加工而成[10]。乌梅性酸、涩、平，归肝、脾、肺、大肠经，具有敛肺、涩肠、生津、安蛔等功效。沈红梅等[11]以人原始巨核白血病细胞系（HIMeg）和人早幼粒白血病细胞系（HL-60）为研究对象，经体外抗肿瘤及体内免疫调节试验结果表明，乌梅具有抑制人原始巨核白血病细胞和人早幼粒白血病细胞生长的作用。前期研究报道表明，乌梅及其制剂在体外对大肠艾希菌、伤寒杆菌、铜绿假单细胞菌等均有抑制作用，而且对仓须癣菌等真菌也有一定的抑制作用。陈士英的研究表明，乌梅提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠埃希菌均有抑制作用。

雷公藤的主要成分为生物碱类，乌梅的主要成分为有机酸。生物碱与有机酸结合必然会发生一定反应，因此猜想乌梅中的有机酸成分必然会对雷公藤的生物碱成分产生一定影响从而影响其药效作用。同时，与雷公藤配伍的诸多药物中都含有有机酸成分，如：甘草中含有甘草酸、齐墩果酸等成分，女贞子中含有齐墩果酸、乙酰齐墩果酸等成分, 巴戟天、蛇床子、刺蒺藜含有棕榈酸成分，枸杞子含有牛磺酸成分，车前子含有车前子酸等成分，半枝莲含有果酸成分，何首乌中含有大黄酸成分, 瓜蒌、白术、茯苓、淫羊藿、覆盆子、芦荟子含有有机酸成分。常见酸味中药有乌梅、五味子、山楂、木瓜、马齿苋、覆盆子、山茱萸、桑葚、石榴皮、罂粟壳、诃子、青果、白及、五倍子、炒枳壳、白芍、佛手、炒枳实等，其pH值如下：乌梅2.97，五味子3.11，山楂3.22，木瓜3.38,马齿苋5.25，覆盆子4.75，山茱萸3.41，桑葚4.86，石榴皮5.50，罂粟壳6.48，诃子3.595，青果3.115，白及4.68，五倍子3.88，炒枳壳4.10，白芍5.59，佛手4.71，炒枳实5.70。乌梅在诸多酸性中药中酸度最高。此外，雷公藤味辛，具有祛风除湿、活血通络、消肿止痛的作用，因此具有发散作用；乌梅味酸，具有收敛生津的作用。二者配伍后一散一收，相反相成。基于以上原因，猜想雷公藤与乌梅配伍可以达到减毒甚至是增效的效果。

二、实验研究

1.实验材料与器材

1.1实验材料

小白鼠130只（雌雄各半，体重（20±2）g），购于山东中医药大学实验中心，常规饲养 3d后用于试验；雷公藤300克、乌梅100克，购于山东中医药大学附属医院；血肌酐、尿素氮试剂盒，购于南京建成生物工程研究所。

1.2实验器材

sc-3612低速离心机，WFZ UV-2100型紫外分光光度计，10～100µL 微量加样器；一次性塑料试管（10×75）；一次性离心管（1.5 mL）；一次性注射器（2.5 mL）。

2、实验方法

130只小鼠常规饲养3d后，按雌雄各半、体重均匀原则随机分为13组，每组10只小鼠。根据每组小鼠的质量（10g/0.2ml），分别以雷公藤与乌梅1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1：10、2:1、3:1、4:1、5:1、10:1比例、雷公藤单煎煮取一定量的水煎液，分别标记为1至12组，13组为空白对照组(生理盐水)。按照10g/0.2ml的量按组给小鼠连续灌胃7天后，每只小鼠分别摘眼球取血，待，3500 r/min离心10 min，吸取上清液，分别按说明书使用血肌酐、尿素氮试剂盒，分别使用分光光度计测定其吸光度值。

3、统计学处理

采用spss17.0软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差表示，组间比较

采用单因素方差分析，p<0.05为差异有统计学意义。

4、实验结果

实验结果显示，血肌酐指标，与雷公藤单煎组相比，雷乌1:10组与其相关性最强，其他组均p<0.05,有差异；与空白组相比，除雷乌3:1组、雷乌1:2组、雷乌5:1组、与雷乌10:1组外，其他组均p<0.05，有差异且所提此四组与空白组的相关性依次增大。尿素氮指标，与雷公藤单煎组相比，除雷乌4:1组、雷乌1:10组、雷乌5:1、雷乌1:1组、空白组与雷乌10:1组外，其他组均p<0.05,有差异，且所提此六组与雷公藤单煎组的相关性依此增大；与空白组相比，除雷乌1:1组、雷乌10:1组与雷公藤单煎组外，其他组均p<0.05,有差异，且所提此三组与雷公藤单煎组的相关性依次增大。

由图1-1-1可以看出，图中顺序的不同比例的雷乌水煎液对于小鼠血肌酐的影响波动较大。雷乌1:1至雷乌1:2阶段，血肌酐值呈下降趋势，雷乌1:2至雷乌1:3阶段，血肌酐值呈上升趋势，雷乌1:3至雷乌1:5阶段，血肌酐值呈下降趋势，雷乌1:5至雷乌1:10阶段，血肌酐值呈急剧上升趋势，并达到最大值，雷乌1:10至雷乌2:1阶段，血肌酐值呈急剧下降趋势，雷乌2:1至雷乌3:1阶段，血肌酐值仍呈下降趋势，雷乌3:1至4:1阶段，血肌酐值呈上升趋势，雷乌4:1至10:1阶段，血肌酐值呈下降趋势，并达到除空白组之外的最小值，雷公藤单煎组血肌酐值略低于雷乌1:10组。

由图1-1-2可以看出，雷公藤配伍乌梅有减毒效果，图中顺序的不同比例的雷乌水煎液对于小鼠尿素氮的影响总体呈下降趋势有统计学意义。雷乌1:1至雷乌1:2阶段，尿素氮值呈下降趋势，雷乌1:2至雷乌1:3阶段，尿素至呈上升趋势，雷乌1:3至雷乌1:4阶段，尿素氮值呈下降趋势，雷乌1:4至雷乌1:5阶段，尿素氮值呈上升趋势，并达到最大值，雷乌1:5至雷乌1:10阶段，尿素氮值呈较急剧下降趋势，雷乌1:10至雷乌2:1阶段，尿素氮值呈上升趋势，雷乌2:1至雷乌3:1阶段，尿素氮值仍呈上升趋势，雷乌3:1至雷乌10:1阶段，尿素氮值呈下降趋势，雷公藤单煎组尿素氮值达到除空白组之外的最小值。

5、实验结论

总体来说，雷公藤配伍乌梅具有减毒功效，对于小鼠血肌酐、尿素氮指标具有积极影响。

对于小鼠血肌酐指标，雷乌配伍水煎液中，雷乌10:1水煎液作用最好，雷乌1：10水煎液作用最差，且其毒副作用高于雷公藤单煎水液。

对于小鼠尿素氮指标，雷乌配伍水煎液中，雷乌10:1水煎液作用最好，但其效果略低于雷公藤单煎水液，雷乌1:5水煎液作用最差。

6、讨论

雷公藤的毒副作用主要在于对机体肾脏功能的损伤，而同血肌酐和尿素氮是肾脏功能的两个最重要的指标，尿素氮是人体内蛋白质代谢的主要终末产物，肌酐是肌肉在人体内代谢的产物，二者主要由肾小球（肾脏的重要组成部分）滤过排出体外。血尿素氮和血肌酐一样，在肾功能损害早期可在正常范围之内，当肾小球滤过率下降到正常的 50％以下时，二者的浓度才迅速升高。因此，血肌酐及血尿素氮水平反映了肾功能的状况：它们的水平越高，肾功能的损伤程度越严重。通过实验结果可以看出，不同比例的雷乌水煎液，对于小鼠血肌酐和尿素氮的数值具有不同影响。雷乌10:1水煎液对于血肌酐、尿素氮指标的作用具有一致性，均使小鼠血肌酐、尿素氮的数值接近正常水平，因此临床使用雷公藤时可少佐乌梅以达减毒效果，临床配伍使用时可以参考借鉴此比值。此外，对于机体血肌酐指标，雷乌3:1、雷乌1:2、雷乌5:1水煎液具有积极作用，其对于肾脏功能的损害作用依此降低；对于机体尿素氮指标，雷公藤单煎水液使其最接近正常水平，且雷乌1:1水煎液也具有积极作用。

三、问题与展望

实验结果表明，在使用雷公藤的过程中少佐乌梅具有减毒功效，雷乌10:1效果最佳，临床使用时可以借鉴相关比例。下一步要通过进一步实验研究，确定雷公藤与乌梅配伍是否具有增效效果，以更好指导临床；此外，诸多实验研究表明，雷公藤配伍甘草具有较好的减毒增作用，临床应用较多，进一步通过对乌梅减毒效果与甘草减毒效果的比较，对乌梅的减毒效果进行定性分析。

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本项目在山东中医药大学大学生创新创业训练平台完成，获得学校2014-2015年度大学生研究训练计划（SRT）项目立项资助，项目编号2014225”