布洛芬对映异构体的分析方法建立

布洛芬对映异构体的分析方法建立

肖成威

海南合瑞制药股份有限公司 海南 海口 570133

摘要 目的：建立高效液相色谱法分析布洛芬对映异构体；

布洛芬为苯丙酸类非甾体解热镇痛药，其分子中α位是手性碳原子，因此存在一对光学异构体。现代药理实验证明，其药理活性主要是由S-构型体产生的，但R-构型在体内亦存在生物转化的情形，可以做为活性物质的储存器，保持活性成分的含量水平。因此，同步得到布洛芬的两个对应异构体的分离方法对布洛芬的临床

研究和控制药品质量具有重要意义^[1]。参考李成平等发表的《高效液相色谱手性流动相法拆分布洛芬对映体》中的研究内容^[2]，创造性的以β-CD BR为填充柱对布洛芬进行拆分。省掉很多繁琐步骤，为试验提供了简便、有效、耐用的分析方法。

1. 仪器与试剂

安捷伦1260高效液相色谱仪；β-环糊精键合硅胶为填充剂（YMC β-CD BR（250mm×4.6mm，5μm或性能相当的色谱柱）；右旋布洛芬对照品（含量：99.9%，批号：101203-201201，来源：中国食品药品检定研究院）；左布洛芬对照品（含量：100%，批号：101405-201601，来源：中国食品药品检定研究院）。

2. 色谱条件

用β-环糊精键合硅胶为填充剂（YMC β-CD BR 250mm×4.6mm，5μm或性能相当的色谱柱）；以甲醇-三乙胺-醋酸（995：3：2，用醋酸调节pH值至6.5）为流动相；流速为0.7ml/min；检测波长为220nm；进样量：5µl。

3. 试验方法

取左布洛芬和右旋布洛芬对照品各5mg，精密称定，置20ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液取本品约25mg，精密称定，置50ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

3. 1. 专属性

称取本品约25mg置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取空白溶剂（流动相）、供试品溶液各5μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。从记录的色谱图可知，右旋布洛芬峰的保留时间17.670min，左布洛芬峰的保留时间20.307min；空白溶剂在以上两个位置均没有保留，对异构体的测定无干扰。取左布洛芬和右旋布洛芬对照品各5mg，精密称定，置20ml容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。精密量取5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。重复测定6次，结果见表1，色谱图见图1。

图1：系统适用性图谱

表1：异构体系统适用性试验结果

结果表明：系统适用性溶液重复进样6次，右旋布洛芬、左布洛芬保留时间相对标准偏差均＜2.0%，分离度均大于1.5。说明本方法系统适用性良好。

3. 2. 线性与范围

分别精密称取左布洛芬、右旋布洛芬对照品12.5mg各置25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为左布洛芬、右旋布洛芬贮备液。分别精密量取上述对照品贮备液2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml置10ml容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。得到浓度相当于40%、60%、80%、100%、120%的线性溶液。各取5μl注入液相色谱仪，线性回归方程为：y = 0.1703 x + 0.6480，相关系数R=0.9998，线性关系良好。

3. 3. 准确度

分别量取左布洛芬、右旋布洛芬对照品适量，配置成80%、100%、120%浓度溶液的样品各3份。取上述溶液各5μl分别注入液相色谱仪，试验结果表明，不同80%~120%浓度的右旋布洛芬、左布洛芬回收率均在95%~102%范围内，等浓度的三份供试品RSD值均≤2%。本方法准确度良好。

3. 4. 重复性

称取本品约25mg置50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，配置6份，依次进样。按面积归一化法以峰面积计算，重复性6份样品中，右旋布洛芬、左布洛芬的平均含量为50.33%、49.68%，RSD为0.92%、0.93%，重复性良好。

3. 5. 耐用性

表2：异构体方法耐用性试验内容条件表

通过改变上述色谱条件，来评估本品异构体含量测定条件有微小变动时，测定结果不受影响的承受程度，用于说明正常使用的可靠性。由上述试验结果可知，流动相pH值变化±0.2、流速变化±0.1ml/min以及检测波长变化±2nm对本品进行异构体测定，系统适用性溶液中分离度均大于1.5，各试验条件下异构体含量均为49.0~51.0%之间，说明当仪器色谱行为发生较小的变动时，对本品异构体测定结果无影响，该方法的耐用性良好，

4. 结果与讨论

通过对上述异构体测定方法进行方法学验证研究，试验结果表明：该方法的准确性高、精密度良好、溶液稳定性及色谱系统耐用性良好，右旋布洛芬与左布洛芬峰之间均得到有效分离，理论塔板数也较高，均符合系统适用性要求，说明该测定方法适用于布洛芬供异构体的检查。

参考文献：

1. 邱士伟，制备型高效液相色谱在手性分离中的应用研究[J].海峡药学,2016, 6 (15)

[2]李成 ，高效液相色谱手性流动想法拆分布洛芬对映体[J].药物分析杂志,2015, 14 (08),