结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况研究

结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药情况研究

肖慧霞 王福锐 王晓平 刘静 陈敏 田旭升

宁夏回族自治区第四人民医院结核病参比实验室 宁夏，银川市 750021

摘 要:目 的:对结核分枝杆菌的实验室检测方法学评价及耐药性进行分析。方 法：筛选我院在一年之间抽取的120例结核病患者的痰液共360份进行研究，进行涂片镜检、罗氏固体培养、BACT/ALERT3D60液体培养及Genexpert分子检测等4种实验室检测，观察检测结果及药敏实验结果。结 果：虽然Genexpert分子检测阳性率与液体培养阳性率相似，但分子检测时间更快，使用Genexpert分子检测所需时间更短(P<0.05)；结核分支杆菌对氧氟沙星的耐药性最高。结 论:通过对结核分支杆菌进行实验室检测发现，Genexpert分子检测对结核分枝杆菌的诊断具有重要价值，同时结核分枝杆菌对临床上经常使用的抗结核药物均有一定的耐药性，值得引起重视。

关键词：结核分支杆菌；检测方法；耐药

Methodological evaluation of laboratory test and study on drug resistance of Mycobacterium tuberculosis

Xiao Huixia, Wang Furui, Wang Xiaoping, Liu Jing, Chen Min, Tian Xusheng

Reference Laboratory of Tuberculosis, The Fourth People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Yinchuan 750021, China

Abstract: Objective: To evaluate the laboratory testing methodology and analyze the drug resistance of Mycobacterium tuberculosis. Method: a total of 360 samples of sputum extracted from 120 tuberculosis patients in our hospital within one year were screened for study. Four laboratory tests were conducted, including smear microscopy, Roche solid culture, BACT/ALERT3D60 liquid culture and Genexpert molecular detection, to observe the detection results and drug sensitivity test results. Results: Although the positive rate of Genexpert molecular detection was similar to that of liquid culture, the molecular detection time was faster and the detection time required by Genexpert molecular was shorter (P<0.05). Mycobacterium tuberculosis showed the highest resistance to ofloxacin. Conclusion: Laboratory testing of Mycobacterium tuberculosis showed that Genexpert molecular testing was of great value in the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis. Meanwhile, Mycobacterium tuberculosis showed certain drug resistance to anti-tuberculosis drugs frequently used in clinical practice, which was worthy of attention.

Key words: Mycobacterium tuberculosis; Detection method; Drug resistanc

结核分枝杆菌作为结核病的重要致病菌，在人群中得到广泛传播，在外界的环境中存在比较强的抵抗力，这也就导致耐药菌株比较容易出现

^[1]。此次研究旨在评价结核分枝杆菌的实验室检测方法，分析结核分枝杆菌耐药情况。特别抽取了我院的120例结核病患者的痰液样本进行研究，并分别对其实施涂片镜检、固体培养、BACT/ALERT3D60液体培养及Genexpert分子检测4种检测方式，阳性菌株进行5种常用抗结核药物的药敏试验，对检测结果进行统计和分析。

1. 一般资料和检测方法

1.1一般资料

筛选2018年1月至2019年1月间在我院收治结核病患者120例，并采集他们的样本共360份进行研究，每人采取3份痰液，对其进行检验，并对检测结果进行分析。患者平均年龄为（45.36±4.86）岁。

1.2检测方法

1.21检测中所需仪器包括: LED 荧光显微镜、BACT/ALERT3D60分枝杆菌液培养仪器、多色巢式荧光定量PCR仪(Genexpert)；相关的染液、罗氏培养基、专用的液体培养瓶及分子检测试剂盒。将采集的液痰分别进行涂片镜检、固体培养、 BACT/ALERT3D60液体培养、多色巢式荧光定量PCR(Genexpert)分子检测。

1.22药敏试验的方法：采用比例法，将链霉素、异烟肼、利福平、氧氟沙星,乙胺醇等五种常用抗结核药物进行药敏试验。

1.23本研究中所有检测均按《结核病实验室检验规程》中相应的标准化操作程序进行操作。^[2]。

1.3统计学分析

使用SPSS20.0软件纳入研究数据，t值检验,通过（x±s）表示；x²值检验,通过率（%）表示，判定统计学差异的标准为P＜0.05。

2. 结果

2.1实验室检测结果

使用Genexpert分子检测时间为（2.50±0.48）h，Genexpert分子检测与涂片镜检（1.50±0.25）h对比时间较长，液体培养（264.05±1.08）h时间更长(t=20.2410、1497.3746、1606.2729，P<0.05)；但是，利用Genexpert分子检测后的阳性率（60.00%）与液体培养阳性率 (58.33%)相似，固体培养阳性率50.83%，涂片镜检阳性率（35.83%）最低，X²=14.04、12.19、5.50，P<0.05。

2.2药敏试验结果分析

对培养阳性的70株结核分支杆菌开展药敏试验后发现，全敏感51株，敏感率72.85%；耐一种菌株数为13株，耐药性18.57%；耐药一种以上菌株数为6株，耐药性8.57%；耐链霉素菌株数6株，耐药性8.57%；耐异烟肼菌株数7株，耐药性10.0%；耐利福平菌株数3株(Genexpert分子检测也显示利福平耐药)，耐药性4.28%；耐乙肝丁醇1株，耐药性1.42%；耐氧氟沙星12株，耐药性17.14%，氧氟沙星的耐药性最高。

3.讨论

近几年，对结核分枝杆菌的检测方式分为几种，包括涂片镜检、固体培养法以及液体培养法等等^[3]。但是，随着检验技术的发展，逐渐形成了以Genexpert分子检测为主的新型检测手段，并且已经在临床上得到广泛应用。在过去的时间内,临床上以涂片镜检的方式为主，并以涂片镜检的检测结果作为衡量结核病的主要标准^[4]。这种方法经此次研究分析，检测所需时间最短，但是阳性率最低，对结核分枝杆菌的敏感度不高。同时，这种检测方式容易受到其他因素的影响，必须连续检验三次后，再根据检测结果得出阳性率，具有一定的局限性^[5]。Genexpert分子检测在痰标本中的检测下限为131CFU/ml，其灵敏度高，操作简便，诊断速度快，生物安全性高，检测过程不易受干扰等特点^[6]，此次研究也发现，虽然Genexpert分子检测阳性率与液体培养阳性率相似，但分子检测时间最快， Genexpert分子检测阳性率对比罗氏固体培养及涂片镜检最高。对结核分支杆菌开展药敏试验后发现，氧氟沙星的耐药性最高。

综上所述，Genexpert分子检测结核分枝杆菌优势明显，值得推广和关注。

参考文献：

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[2]赵雁林，逄宇等.结核病实验室检验规程.人民卫生出版社.标准书号：ISBN 978-7-117-20769-0/R.20770

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