乙型肝炎病毒患者的临床检测方法及应用价值

乙型肝炎病毒患者的临床 检测方法及应用 价值

佟承贺 姜 艳

（联勤保障部队第 970医院，山东威海 264200）

【摘要】目的：探究在乙型肝炎病毒检测中应用荧光定量PCR法（FQ-PCR）的应用价值。方法：选择近年我院收治的128例乙型肝炎病毒携带者分别采用酶联免疫吸附（ELISA）血清标志物检测、FQ-PCR检测，对比不同检测方法的诊断阳性率。结果：各组中均有不同程度的HBV-DNA复制，其中1组的阳性率及HBV-DNA拷贝数平均值高于其他各分组（P＜0.05）；两组的HBV-DNA阳性率高于3~7组（P＜0.05）。结论：FQ-PCR可有效反应HBV感染阳性率及复制状态，对诊断乙型肝炎病毒携带者具有重要价值。

【关键词】荧光定量PCR法；乙型肝炎病毒；检测

Clinical detection methods and application value of hepatitis B virus in patients

Tong Chenghe and Jiang Yan

(970 Hospital of joint service support force, Weihai 264200, Shandong)

[Abstract]Objective: To explore the application value of FQ-PCR in hepatitis B virus detection. Methods: 128 cases of hepatitis B virus carriers in our hospital in recent years were selected and detected by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and FQ-PCR respectively. Results: there were different degrees of HBV-DNA replication in each group. The positive rate and average copy number of HBV-DNA in group 1 were higher than those in other groups (P<0.05); the positive rate of HBV-DNA in two groups was higher than that in groups 3 ~ 7 (P<0.05). Conclusion: FQ-PCR can effectively reflect the positive rate of HBV infection and replication status, which is of great value in the diagnosis of HBV carriers.

[Key words] fluorescent quantitative PCR; hepatitis B virus; detection

长期携带乙型肝炎病毒（HBV）会持续损害肝脏，并诱发肝癌、肝硬化等危症，以往临床多采用酶联免疫吸附（ELISA）血清学检测，但鉴于临床广泛应用抗病毒药物引起HBV病毒变异，往往会增加传统检测的难度^[1]。荧光定量PCR（FQ-PCR）是近年新兴的检测技术，有助于快速准确地测定HBV。对此，本研究将对近年我院收治的128例乙型肝炎病毒携带者分别采用FQ-PCR和传统ELISA血清学检测进行对比，其宗旨为探究FQ-PCR在乙型肝炎病毒检测中的价值，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选择2018年3月~2019年2月期间我院收治128例乙型肝炎病毒携带者，其中男68例，女60例；年龄35~72岁，平均（49.2±2.5）岁；均符合《传染病学（第9版）》中相关诊断标准，乙肝表面抗原（HBsAg）S/CO≥15。排除凝血功能障碍、出血倾向者、精神疾病及意识障碍者。

1.2方法

所有患者均采集空腹状态下的肘部静脉血2ml，常规抗凝、离心后，取上清液，并置于-20℃冰箱中储存待检，检测时均严格按试剂说明书进行操作，结果判断按试剂盒及试剂说明书标准进行判定。

1.2.1ELISA法血清学检测

应用美国分子有限公司提供的酶标仪，上海科华生物股份有限公司提供的ELISA试剂盒，采用LISA法检测乙肝表面抗体（HBsAb）、HBsAg、乙肝e抗体（HBeAb）、乙肝核心抗体（HBcAb）、乙肝e抗原（HBeAg）。

1.2.2FQ-PCR法检测

应用美国ABI公司提供的ABI 7500Fast荧光定量分析仪，上海浩源生物公司提供的乙肝病毒核酸定量检测试剂盒，采用FQ-PCR定量检测HBV-DNA载量。

1.3统计学分析

采用SPSS22.0统计学软件进行数据分析，不同检测的阳性率用百分比（%）表示，比较采用x²检验；拷贝数以平均值表示，拷贝数对数值采用x±s表示，比较用t检验。以P＜0.05为比较差异有统计学意义。

2结果

乙型肝炎阳性各组中均有不同程度的HBV-DNA复制。在88例HbsAg阳性血清中，HBV-DNA阳性73例，阳性率为83.0%（73/88）；在86例HBV-DNA阳性血清中，经ELISA检测HbeAg阳性者50例，占FQ-PCR定量检测的58.1%（50/86）。

在ELISA阳性各组中，1组的HBV-DNA阳性率及拷贝数的对数值、拷贝数的平均值均高于其他各组（P＜0.05）；2组的HBV-DNA阳性率高于3~7组（P＜0.05）。

表1 两种不同检测方法比较

注：※与2~7组比较，P＜0.05；△与3~7组比较，P＜0.05。

3讨论

乙型肝炎是临床常见慢性传染病之一，现已成为全球性的严重公共卫生问题，我国是乙型肝炎大国，乙肝病毒（HBV）对肝脏造成极为严重的危害，严重者甚至会出现原发性肝癌、肝硬化等症，因此及时有效监测乙型肝炎，并积极治疗，有助于阻断病毒传染，并对把握病毒复制、监控肝炎治疗预后有积极意义^[2]。

以往临床多采用ELISA法血清学检测，此检测方法操作简单，检测迅速，且灵敏度、特异度均较高，但该检测方法仅能反映当前一段时间内机体对病毒免疫应答状态，而不能准确反应HBV感染复制情况及感染程度，加之，广泛使用抗病毒药物，会增加HBV变异株，会降低ELISA法检测的敏感度和准确度^[3~4]。

近年来，随着生物技术日益发展，FQ-PCR法为测定HBV提供了新方向，该检测技术融合DNA探针杂交和PCR技术的优势，利用闭管检测、荧光技术，能直接探测荧光信号的变化，继而有助于定量、定性分析HBV-DNA载量，以助临床分析HBV复制水平和感染性，对判断HBV病毒感染程度有重要价值^[5]。有学者指出^[6]，FQ-PCR在检测HBV-DNA中存在一定不足，不能检测出病原体数量、不能反应病原体入侵后机体的免疫应答状态等，因此临床可根据实际情况结合两种检测方法进行诊断。

HbsAg是诊断健康携带者和急性乙肝患者的主要生化指标，HbeAg是判断血清中是否有HBV感染的主要指标^[7]。大三阳指标提示HBV-DNA传染性强、复制率高^[8]。本研究结果显示，1组的HBV-DNA阳性率及拷贝数的对数值、拷贝数的平均值均高于其他各组（P＜0.05）。结果提示，FQ-PCR和ELISA在反应HBV-DNA复制方面具有良好的一致性，但相较于ELISA检测，FQ-PCR能更好的判断大三阳患者正处于HBV感染状态，且能准确、定量反应出HBV-DNA载量，有助于判断HBV携带患者是否处于HBV感染期。另外，本结果显示，2组的HBV-DNA阳性率高于3~7组（P＜0.05），但HBV-DNA拷贝数的对数值、拷贝数的平均值与3~7组比较无统计学意义（P＞0.05）。提示小三阳患者处于感染潜伏期，需密切监测病情进展情况，并根据检测结果，指导临床抗病毒治疗。

综上所述，FQ-PCR法在检测HBV中，可真实反应HBV感染和病毒DNA复制情况，可在早期诊断、评估HBV传染性及治疗疗效评估等方面中为临床提供可靠的参考依据，必要时可联合ELISA，以提高临床诊断准确性。

参考文献：

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