地中海贫血的基因诊断

地中海贫血的基因诊断

袁松

南充市南部县人民医院 四川南充 637300

地中海贫血（地中海贫血）是一种最常见的常染色体隐性遗传疾病的血液。由缺陷引起的血红蛋白链合成的减少或缺失导致血红蛋白的减少。链/非链失衡导致一组溶血性疾病。目前还没有经济有效的方法来治疗这种疾病。人群分子筛查和基因诊断对高危夫妇进行产前诊断。为了避免重症地中海贫血患儿的出生，国内外首选预防措施，因此，准确实用的分子诊断是实现大规模诊断的关键。它是分子检测、路径选择和产前诊断的前提。

1. 地中海贫血的概述

地中海贫血是由珠蛋白基因突变引起的，是一组常染色体隐性遗传病，目前地中海贫血的患病率呈上升趋势。临床治疗方法在临床研究过程中，很难维持有效的治疗。为了达到根治的效果，我们需要进行婚前检查、产前筛查、遗传信息等方面的遗传控制尤为重要。地中海贫血基因孕妇应增加妊娠早期产前基因检查可提高地中海贫血的基因诊断水平目的是在适当的控制下降低贫血儿童的出生率最有效的预防手段。

二、地中海贫血的分子学基础

人类血红蛋白有两种类型，由亚单位和两种球状体的四分体组成，分为a类和b类。地中海贫血的生化缺陷可导致全球比例失衡导致血红蛋白减少的溶血性贫血。根据血红蛋白的类型，主要是在临床上a-地中海贫血2和/或1基因突变的分子基础是a-珠蛋白的合成减少，b-珠蛋白过剩，导致被破坏为低效的造血细胞和红细胞。β–地中海贫血的基础是基因的突变，b珠蛋白的数量减少，导致剩余的数量减少。珠蛋白沉积在红细胞膜上，对红细胞造成损害。突变的主要原因是点突变（>99.5%）。b珠蛋白基因簇的大量缺失。根据这一说法，我们可以依靠不同方法分析其分子机制和血液学表型。应用一种实用的技术检测地中海贫血基因突变，以明确诊断。

三、地中海贫血的基因诊断方法

1、扩增检测技术

1.1突变扩增系统技术

在操作突变扩增系统技术时要同时应用聚合酶链式反应技术与电泳检测技术。在这个阶段，突变增强系统技术的应用只需要一个PCR反应电泳能以较高的成本提供正常的检测结果。它具有成本低、方法简便、检测时间短等优点，但其局限性如下：很难同时检测多个突变以及产能低等缺陷。

1.2跨越断裂点技术

跨越断裂点技术是一项新技术。地中海贫血缺失基因突变检测方法及其机制，其原理是在缺失的片段中建立引物，以了解所发现的基因患者基因是否存在缺失、扩增等情况，正常情况下在这种情况下，如果引物设计中有缺失片段，则引物之间存在间隙它通常会保持一定的距离，这样就不会加强目标碎片；如果一个片段缺失，引物之间的差异不显著缩短了距离，同时增强了目标碎片。

1.3实时荧光定量PCR

荧光实时定量PCR是一种有效的方法，它是采用荧光化学循环PCR方法，在DNA的反向扩增中，总产物量的检测方法往往出现在DNA的反向扩增中。在反应过程中DNA序列已被定量分析，以了解地中海贫血病人基因突变的发展过程。在聚合酶链反应的发展过程中在放大阶段，荧光信号可以用来评价放大阶段的发展。当反应随着各项指标的增加而放大时，可进行实时检测。CT值和模板的原始拷贝数不同，而且有着明显的线性关系，这也是定量测定的重要依据。当检测到地中海贫血基因突变时，测定核酸的拷贝数。荧光实时定量PCR是最灵敏的方法。该方法也广泛应用于DNA基因表达的研究中。

2、聚合酶链式反应

目前临床实验室检测地中海贫血的常用方法是交叉断点PCR技术，用一对引物对应一个突变类型，并通过PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳，对应扩增产物的片段长度，进行检测。另一种方法就是应用PCR反向斑点杂交技术对地中海贫血基因的α/β点突变进行膜杂交，扩增目的序列和扩增产物，但这两种商业试剂盒的方法，手工工作量大，过程繁琐，影响因素多。

3、杂交检测技术

South杂交在地中海贫血基因检测中的应用是地中海贫血诊断的金标准，临床检验证明该技术是有效的，且具有稳定性强、检测率高、检测准确等优点与其他检测技术相比，也存在一些不足，如检测时间过长等。由于使用寿命长，操作复杂，需要增加放射性同位素灯。Southern杂交很少用于常规诊断。

4、基因测序技术

基因测序技术是指聚合酶链反应技术的发展，是一种检测产品突变的方法，不仅通过检测确定基因突变在测试样本中的位置，甚至鉴定突变基因突变类型在地中海贫血的临床遗传学鉴定中起着重要作用。它对基因测序技术的有效识别也起到了重要作用。在实际应用中，该技术具有灵敏度高、流量大、效率高等特点，可用于突变试验，评价了该方法的识别效果。

四、地中海贫血的基因诊断的展望

基因诊断在地中海贫血中的临床实践中，使用的药盒通常针对当地和当地人口。随着世界各地的人口流动以及人口迁移，越来越多的新突变被发现和报道，

区域基因突变谱日趋复杂多样，传统的地中海贫血基因诊断试剂盒存在技术手段的限制。因此，传统的基因诊断不应取代地中海贫血检测。我们应该坚持先做地中海贫血检测，再做地中海贫血基因诊断的策略，我们必须坚持基因型一致性的基本原则。

五、小结

总之，不同的技术要与被测对象和实验室的特殊情况结合，另外，还要选择合适的方法，采取有效的图解策略，准确及时地了解地中海贫血的基因型，为地中海贫血的防治提供依据，基因诊断对地中海贫血的筛查和临床治疗具有积极而深远的意义。