实时荧光定量PCR检测HPV-DNA在宫颈癌筛查中应用

实时荧光定量 PCR检测 HPV-DNA在宫颈癌筛查中应用

姜曼

常德市第一中医医院 病理科 本科 415000

【摘 要】目的：在宫颈癌筛查中采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA，探究临床诊断价值。方法：以2018年4月至2020年4月期间在我院进行的200例宫颈癌筛查的病患作为研究对象，所有病患均采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA和杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测HPV-DNA。分析两种检测方式的检测结果，进而判断检测方式的诊断价值。结果：经病理诊断检测出HPV-DNA阳性病患有126例，以此作为金标准。经实时荧光定量PCR检测后，HPV-DNA阳性病患有106例，诊断正确率为84.12%；经杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测后，HPV-DNA阳性病患有74例，诊断正确率为58.73%。结论：在宫颈癌筛查中采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA，具有较高的检测价值，其诊断结果准确率高，降低误诊率，可有效筛查宫颈癌患者。

【关键词】实时荧光定量PCR；HPV-DNA；宫颈癌筛查；杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）

Application of real-time fluorescence quantitative PCR detection of HPV-DNA in cervical cancer screening

[Abstract] Objective: To use real-time fluorescent quantitative PCR to detect HPV-DNA in cervical cancer screening to explore the clinical diagnostic value. Methods: 200 patients who were screened for cervical cancer in our hospital from April 2018 to April 2020 were used as the research objects. All patients were tested by real-time fluorescent quantitative PCR for HPV-DNA detection and hybrid capture 2-generation technology (HC-Ⅱ) Detection of HPV-DNA. Analyze the detection results of the two detection methods, and then judge the diagnostic value of the detection methods. Results: 126 cases of HPV-DNA positive patients were detected by pathological diagnosis, which was used as the gold standard. After detection by real-time fluorescent quantitative PCR, 106 cases of HPV-DNA positive patients were diagnosed with a correct diagnosis rate of 84.12%; after detection by hybrid capture 2 generation technology (HC-Ⅱ), 74 cases of HPV-DNA positive patients were diagnosed The correct rate is 58.73%. Conclusion: The use of real-time fluorescent quantitative PCR to detect HPV-DNA in cervical cancer screening has a high detection value. Its diagnostic results have a high accuracy rate and reduce the misdiagnosis rate, which can effectively screen patients with cervical cancer.

[Keywords] Real-time quantitative PCR; HPV-DNA; cervical cancer screening; Hybrid capture second generation technology (HC-Ⅱ)

宫颈癌疾病对于女性的健康有着较大的威胁，而且也是一种高发性恶性肿瘤，现阶段，宫颈癌疾病发病呈现出年轻化发展趋势^[1]。宫颈癌疾病发病前，会经历较长的病变时期，因此要重视宫颈癌疾病的筛查工作。高危型人乳头瘤病毒是一种双链DNA病毒，也是诱发宫颈癌疾病的主要因素，所以在宫颈癌筛查中，可将其作为关键指标进行检测筛查，诊断宫颈癌疾病^[2]。临床上，常用的宫颈癌筛查手段为实时荧光定量PCR检测、杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测等^[3]。为了探究两种检测方式的宫颈癌筛查价值，本次研究选取200例进行宫颈癌筛查病患，均采用两种检测方式进行筛查，数据分析如下。

1资料与方法

1.1一般资料

以2018年4月至2020年4月期间在我院进行的200例宫颈癌筛查的病患作为研究对象，所有病患均采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA和杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）HPV-DNA。病患的临床资料显示：病患平均年龄为（30.52±2.32）岁；学历：105例高中以下文化，60例大专文化，35例本科以上文化。所有患者临床资料经由统计学分析，P>0.05无意义。

本研究经由医学伦理委员会批准。且纳入标准：接受检测前3d,无性生活，无阴道用药情况；患者均接受本研究检测方式；均为自愿参加。排出标准：妊娠期女性；已确诊为宫颈癌患者；不愿接受本研究检测方式患者。

1.2研究方法

采集所有病患标本，清理病患宫颈口过多分泌物，清理干净后。利用生理盐水浸泡过得棉拭子擦拭病患宫颈口，顺时针旋转5周，获取脱落的细胞组织，并将棉拭子置入1ml无菌生理盐水试管内，漂洗干净后，做离心处理，获取下层细胞。并将试管放置在冷藏箱中待检。

1.2.1实时荧光定量PCR检测方法

将标本取出解冻，并振荡均匀。取200μ标本行离心处理，时间约为15min，吸取上清液留下沉淀，并在沉淀中加入50μ的DNA提取液，予以充分振荡，将振荡后的标本放置在沸水中浴15min，随后行离心处理，时间约为10min。取样品的上清液4μ放置在反应管中，行低速离心处理数秒后，利用美国ABI7300荧光定量PCR仪进行分析。处于50℃时反应2min，在94℃时反应2min，以93℃15s→50℃90s的循环方式反复循环40次。在仪器进行反应过程中，对其实施监控，在反应结束后，读取荧光定量PCR仪上的荧光值，整理检测结果。

1.2.2杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测方法

利用美国Digene公司生产的HC-ⅡHPV-DNA信号放大检测系统进行检测，从而检测HPV-DNA高危型和低危型，获取本项研究所需的实验数据。

1.3观察指标

分析两种检测方式的检测结果，进而判断检测方式的诊断价值。

1.4统计学分析

本文数据经SPSS26.0软件统计分析，P<0.05表示有意义。

2结果

经病理诊断检测出HPV-DNA阳性病患有126例，以此作为金标准。经实时荧光定量PCR检测后，HPV-DNA阳性病患有106例，诊断正确率为84.12%，HPV-DNA阴性病患有20例，诊断正确率为15.88%；经杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测后，HPV-DNA阳性病患有74例，诊断正确率为58.73%，HPV-DNA阴性病患有52例，诊断正确率为41.27%。

3讨论

宫颈癌是女性常见的恶性肿瘤疾病，对女性的身心健康产生不利影响。宫颈癌疾病的发病率逐年增加，为了缓解宫颈癌疾病的发病率，应遵循早发现早治疗的原则，加大宫颈癌疾病的筛查，提高宫颈癌疾病的治愈率^[4]。高危型人乳头瘤病毒与宫颈癌疾病发病有着密切关系，若是高危型人乳头瘤病毒持续高度感染，女性宫颈癌疾病的发病率越高，因此可以将HPV-DNA作为宫颈癌病变的关键指标，利用不同种检测方式在宫颈癌筛查中，判断HPV-DNA指标阴阳性，进而确定女性发生宫颈癌地风险，具有较高的诊断价值^[4]。阴道镜活检是宫颈癌临床诊断中的“金标准”，也是本研究的金标准。但是阴道镜活检具有有创的特点，虽诊断准确率高，但不适合在宫颈癌筛查中广泛运用^[5]。因此需要探究一种高效的检测方式，提升宫颈癌疾病的诊断正确率，确保宫颈癌病患得到及时的救治，降低误诊率。实时荧光定量PCR检测、杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测是两种常用的宫颈癌筛查手段，其中杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测操作专业，利用专业的仪器对样本进行自行处理，在检测过程中，最大限度地减少人为误差，确保检测结果的准确性^[6]。而实时荧光定量PCR检测方式具有较高的反复性，能够最大限度降低实验的误差性，从而保障诊断结果的准确度。实时荧光定量PCR检测是在常规PCR基础上采用荧光基因探针杂交定量PCR方法将目的基因扩增，依据荧光信号的强弱判断样本检查结果。实时荧光定量PCR检测方式弥补了PCR不能定量的不足之处，且具有简单方便、灵敏度高的特点，促使其被广泛地运用在宫颈癌筛查中。因此，本研究实验数据显示：经病理诊断检测出HPV-DNA阳性病患有126例，以此作为金标准。经实时荧光定量PCR检测后，HPV-DNA阳性病患有106例，诊断正确率为84.12%；经杂交捕获2代技术（HC-Ⅱ）检测后，HPV-DNA阳性病患有74例，诊断正确率为58.73%。

综上所述，在宫颈癌筛查中采用实时荧光定量PCR检测HPV-DNA，具有较高的检测价值，其诊断结果准确率高，降低误诊率，可有效筛查宫颈癌患者。

【参考文献】

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