摘要目的本研究旨在探讨葛根素对人肾组织性缺氧/复氧(H/R)诱导的急性肾损伤的体外保护作用。方法利用肾小管上皮细胞(HK 2)细胞和H/R处理模拟缺血再灌注损伤的体外实验。实验分为对照组(Control)、H/R处理组(0、6、12和24 h)、H/R 24 h +葛根素处理组、H/R 24 h +葛根素+ 3-甲基腺嘌呤(3-MA，Ⅲ类磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂)处理组、H/R 24 h + 3-MA处理组。采用免疫印迹法(WB)检测自噬相关蛋白的表达变化，用细胞计数试剂-8(CCK-8)检测细胞增殖情况，电子显微镜检测自噬体形成，原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测凋亡。结果与对照组相比，H/R处理组(24 h)微管相关轻链3-II(LC3-II)的表达增加，且自噬标志物P62的表达减少，自噬体数目增多，细胞活力降低，细胞出现炎症反应。葛根素作用与3-MA作用接近，与H/R处理组(24 h)相比，加入葛根素处理后可逆转H/R诱导的LC3、P62表达水平变化(P<0.05)，表现为细胞活力增加，降低了自噬体数目，减轻了细胞凋亡(P<0.05)。同时高迁移率族蛋白1(HMGB1)、Toll样受体4(TLR4)和活化B淋巴细胞的核因子κ-轻链增强子(NF-κB)的蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论葛根素可以通过HMGB1/TLR4/NF-κB轴抑制自噬来减轻体外模型的缺血再灌注损伤。
