HPLC法测定甘海胃康片中甘草苷的含量

HPLC法测定甘海胃康片中甘草苷的含量

张鹏

江苏恒新药业有限公司，江苏 镇江 212009

摘要：目的：采用HPLC法对甘海胃康片中甘草苷含量进行测定。方法：Shim-packC18为色谱柱,乙腈∶0.1%醋酸(20∶80)为流动相;流速:1.0ml/min;检测波长:276nm，柱温30℃。结果：甘草苷浓度在10.02～50.10 mg/L 之间线性关系良好, 回归方程为y=16.751x-0.91（R²=0.9999）,平均回收率98.3%,RSD=1.0%(n=6)，重现性好，RSD=1.0%(n=5),供试品溶液在10h内稳定，RSD为0.6%。结论：该方法简单、可靠、专属性强，可用于甘海胃康片的质量控制。

[关键词]:甘海胃康片；甘草苷；高效液相色谱法；含量测定

甘海胃康片是由甘草、 海螵蛸、沙棘、枳实、白术、黄柏、延胡索、绞股蓝8味中药组成的复方制剂。具有健脾和胃，收敛止痛等作用。黄柏^[1]为该制剂的主要药物之一，含有盐酸小檗碱等有效成分。甘草是豆科植物的干燥根茎和根,是常用且重要的中药材,具清热解毒，祛痰止咳的作用,其有效成份为甘草苷，甘草苷为黄酮类物质，甘草苷的含量是确保本品功效的一个重要指标。原标准^[1]中仅对甘草仅进行了薄层色谱的鉴别，尚无含量测定的内容。经典的黄酮含量多采用紫外测定方法^[2]，本文参考了药典及文献,采用高效液相色谱法测定了甘海胃康片中甘草苷的含量，从而为该制剂质量标准规范化研究提供科学依据。

1 仪器与试药

1.1　仪器　

Agilent1100高效液相色谱仪，G1314A VWD检测器（安捷伦公司）, Shim-packC18(250mm×4.6mm，5μm)为色谱柱，UV-2401PC紫外分光光度仪（岛津UV-2401）。

1.2　试药

　 对照品甘草苷由中国药品生物制品检定所提供(批号:110826-200712,含量测定用);甘海胃康片(批号：171027、171201、180103)。乙腈甲醇为色谱纯,水为纯化水,其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件　

色谱柱: Shim-packC18(250mm×4.6mm，5μm),流动相: 乙腈∶0.1%醋酸(20∶80),λ=276nm,F=1.0ml/min,T=30℃，理论塔板数：6672。

2.2对照品溶液的制备　

精密称取甘草苷对照品10.01mg置50mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成对照品储备液(每1mL含甘草苷200.2μg)。再精密吸取对照品储备液3mL置20mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得甘草苷对照品溶液(每1mL含甘草苷30.03μg)，色谱图见图1。

图1甘草苷对照品溶液色谱图

2.3供试品溶液的制备

取10粒甘海胃康片的内容物，精密称定(得5.0512g/粒)，混匀,精密称取本品约2.0,置索氏提取器中，加甲醇80ml,回流提取至溶液无色，提取溶液浓缩约3ml,转移至25ml容量瓶,用甲醇定容至刻度,摇匀,过滤，取续滤液，即得样品溶液，色谱图见图2。

图2供试品溶液色谱图

2.4 线性关系考察

精密称取甘草苷对照品储备液 (200.2μg /mL)1mL、2mL、3mL、4mL、5mL于20mL容量瓶中，定容，摇匀，,分别吸取上述溶液10μl,注入液相色谱仪进样器,测定,以峰面积为纵坐标(Y),对照品浓度(mg/L)为横坐标(X),绘制标准曲线,得回归方程为y=16.751x-0.91（R²=0.9999）,线性范围为10.02～50.10 mg/L结果表明峰面积与浓度呈良好的线性关系。

2.5精密度试验

取对照品按上述色谱条件进行HPLC分析,连续进样5次,每次10μl, 记录峰面积，RSD为0.7%，测得说明仪器精密度良好。

2.6重现性试验

取同一批样品（批号100401）5份，分别照供试品溶液制备方法,制得5份供试品溶液，进样，记录峰面积,测定含甘草苷为0.320 mg/粒，RSD为1.0%，结果表明方法重现性良好

2.7稳定性试验

取同一批供试品溶液(批号100401)供试液,于室温放置,每隔2小时测一次,共测5次,RSD为0.6%。结果表明,供试液中甘草苷在10h内稳定。

2. 8. 加样回收率试验　

分别取本品含量已测定的制剂(批号100401)6份,各约1.0 g,精密称定,同供试品溶液的制备方法，精密加入甘草苷对照液(0.2002mg/ml)各1.6、2.0、2.4ml, 照含量测定法测定含量，计算回收率分别为97.07%、97.10%、99.51%、98.87%、98.98、98.43。平均回收率98.3%，RSD为1.0%。2.9 空白试验

按处方比例称取除甘草以外的其他药材，按制备工艺制成供试液，依样品测定法测定，在主成分出峰处无干扰。结果见图3。

　图 3 阴性对照液色谱图

2.10 样品含量测定

取不同批号(批号171027、171201、180103)制剂样品,分别按供试品溶液的制备方法制备,取样品溶液和对照品溶液，各进样10μL，读取峰面积值，按外标法计算样品中甘草苷的含量，结果见表1。

表1 样品含量测定结果（n=3）

3讨论

3.1检测波长的选择：

通过测定甘草苷的紫外吸收光谱可知，甘草苷在276nm波长有最大吸收,结合药典^[3]及参考文献,选用276nm为检测波长,实验表明它确能很好地满足样品中的组分测定。

3.2流动相的选择：

曾分别比较不同的乙腈-0.1%醋酸和甲醇-0.1%醋酸分离系统，不同比列的流动相体系进行实验，结果表明乙腈∶0.1%醋酸(20∶80)溶剂系统分离效果较好，且峰形对称，色谱分离的效果更为稳定、理想。

3.3提取条件的选择：

供试品溶液的制备 在样品处理过程中，曾比较了以水、不同比例的乙醇和甲醇、流动相为溶剂，回流提取、索氏提取和超声提取，结果表明以甲醇为溶剂，索氏提取较完全，且同原标准中陈皮苷的提取方法一致。

参考文献

[1] 犹卫, 王敏, 马天俊. HPLC法测定复方甘草合剂中甘草苷的含量[J]. 资源开发与市场, 2005(06):491-492.

[2] 赵晓莉, 崔小兵, 吴皓. HPLC双波长法测定复方甘草合剂中甘草苷,甘草素及异甘草素的含量[J]. 中成药, 2002, 24(3):175-175.

[3] 黄晓丹. HPLC法同时测定炙甘草汤中甘草苷、甘草素、异甘草素的含量[J]. 中国药房, 2012(35):3346-3348.

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