稀释法在重度脂血凝血标本检测中的应用分析

稀释法在重度脂血凝血标本检测中的应用分析

黄江华 应军 郭伟 宋娟 李佳

三台县人民医院 四川绵阳 621100

[摘要] 目的 分析稀释法在重度脂血凝血样本检测中的应用价值。方法 选取我院2020年8月-2021年5月本院20例重度脂血样本，分别采用高速离心法及稀释法测定PT、APTT两项结果，同时用20例对照组数据所得到的线性回归方程将重度脂血样本的稀释后结果换算出稀释前结果，并将换算的稀释前结果与高速离心后未稀释检测结果作t检验分析。结果 重度脂血样本稀释前后两组数据差异无统计学意义（P>0.05 ）。结论 稀释法测定PT、APTT可应用于临床重度脂血样本。

[关键词] 稀释法 重度脂血 应用分析

凝血功能检测在出血和血栓性疾病诊断、溶栓与抗凝治疗监测及疗效观察等方面起着举足轻重的作用。目前，光学法全自动凝血分析仪在医学临床实验室已得到普遍应用，其操作简便，检测迅速、准确，是目前血栓／止血实验室中最常用的检测设备^[1]。凝血功能检测是最常用的止血／血栓筛查试验，包括凝血酶原时间(plasma prothrombin time，PT)，部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)和纤维蛋白原(Fibrinogen，Fbg)等，在临床应用中十分广泛，在术前检查，术后监测，出血性疾病诊断，抗凝治疗监测及各种凝血因子活性筛查中都有重要的临床意义^[2]。

日常工作中，我们常常会遇到重度脂血的样本。对于急诊病人，必须立即对样本进行检测，但常规方法离心处理后，血浆混浊程度仍然严重。虽然磁珠法血凝仪准确性高、重复性好、监测范围大，能从根本上消除黄疸、溶血、浑浊、气泡、乳糜等的影响，但由于检测步骤增加，目前适合基层检验单位使用。现阶段市面上以光学法全自动凝血检测仪为主，其优势有仪器结构简单、灵敏度高、成本低等方面，应用较广泛。但容易受血浆浊度、颜色等外观的干扰，尤其在检测重度脂血标本时因浊度变化较大会出现无法检出结果的情况，而导致临床医生误判^[3]。因此，直接对离心标本检测存在严重干扰，所检测出的结果也不能真实反映出病人凝血功能状态，对临床医生的诊断不能提供及时、准确的诊断依据。

针对临床实验室这一常见问题，现对本实验室重度脂血凝血样本的实验室处理方法加以研究验证，并根据实验结果不断优化凝血脂血样本的检验流程，旨在提高相关样本检测结果的准确性，使患者得到及时且准确的诊断。

1. 资料与方法

1. 一般资料

所选择的样本为2020年8月-2021年5月我院临床科室送检的住院病人及门诊就诊病人共20例重度脂血样本，其中2020年16例，2021年4例。男11例，女9例，年龄18～57岁，平均年龄45.31±3.11岁。同时随机留取这期间的20例外观正常的凝血样本作为对照组。其中男12例，女8例，年龄20～56岁，平均年龄44.24±2.35岁。所有选择样本排除血液疾病、肝脏疾病等原因对凝血功能的影响，两组样本的病人基本资料无统计学意义，此研究具有可比性。检测仪器为日本积水CP3000全自动凝血仪，以及配套的原装检测试剂、比色杯。采用KDC-140HR高速冷冻离心机用于脂血样本的离心，四川蜀科TDL-5M大容量冷冻离心机用于对照组样本及实验组样本常规检测法的离心。

（二）实验方法

1. 检测方法

将临床科室送检及门诊病人样本共20例重度脂血样本及20例对照组样本（所有实验样本采用四川瑞奇公司生产的专用凝血采样管，均用枸橼酸钠抗凝，抗凝比例为1:9,并按规范操作程序准确抽取2ml血量），采用四川蜀科TDL-5M大容量冷冻离心机以3000rpm/min的转速离心10分钟。同时检测对照组样本原倍血浆及用OVB缓冲液3倍稀释后凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)两项。检测过程中仪器运行正常，室内质控均在控，检测严格按照标准操作规程进行。记录稀释前后两组检测数据。

吸取3000rpm/min离心后的重度脂血样本100ul加入200ulOVB缓冲液中，充分混匀，制成3倍稀释血浆，并将剩余血浆吸入专用离心管中，放入KDC-140HR高速冷冻离心机以10000rpm/min的转速离心10分钟，丢弃乳糜上层，将清亮血浆层与已稀释3倍血浆同时测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)两项，得到相应稀释前后两组数据。

2. 统计方法

将20例正常外观样本（对照组）稀释前后两组数据采用SPSS20.0统计软件进行直线回归分析。同时用对照组数据所得到的线性回归方程将重度脂血样本的稀释后结果换算出稀释前结果。作好相关记录，并将换算的稀释前结果与高速离心后未稀释检测结果作t检验分析。定量资料均以均值±标准差方式表示，P<0.05判断为数据差异具有统计学意义。

2. 统计结果

（一）使用统计软件SPSS20.0对对照组20例样本稀释前后的两组PT、APTT检测数据作线性回归分析后，得到相应回归方程为:PT：y=0.415x+3.066(r=0.965,P=0.000),

APPT：y=0.361x+2.131(r=0.915,P=0.000)(其中x表示稀释后检测结果，y表示稀释前检测结果）。

（二）将20例重度脂血样本通过上述回归方程换算成稀释前结果，并与高速离心后直接测定的结果进行t检验分析，结果显示稀释前后两组数据差异无统计学意义（P>0.05 ）。比对结果见表1。

表1 重度脂血样本高速离心法与稀释法结果统计分析

项 目 PT(s) APTT(s)

稀 释回归法 11.052±3.410 30.547±3.852

高速离心法 10.897±3.611 31.381±3.269

P 值 >0.05 >0.05

3. 分析讨论

脂血标本经离心后外观成乳白色，大多原因为患者摄入油性食品过多，间隔时间较短，抽血时未完全代谢。部分患者为血脂代谢异常，或因疾病治疗输入脂肪乳，导致血液中乳糜微粒过多。凝血功能检测是较基本的一项检验项目，同时也是十分重要检验指标，特别是手术病人，是必不可少的检测项。目前常用的光学法全自动血凝分析仪容易被黄疸、溶血、乳糜血所干扰，这是光学法全自动凝血分析仪的主要缺点，在检测乳糜血标本的凝血项目时，机械式或电阻法是临床比较建议采用的检测方法，光学法凝血分析仪的抗干扰能力明显弱于机械式或电阻法^[4-5]。血凝分析仪中，磁珠法对脂血的抗干扰能力大大强于目前应用广泛的光学法中的比浊法。因磁珠法检测原理为加入血浆中的钢珠随着血浆的凝固，粘稠度不断增加，钢珠的振幅也逐渐减弱，仪器根据振幅变化判断血浆的凝固终点。基于这一优点，建议将不受黄疸、溶血、脂血等影响的磁珠法大力推广于实验室。

本次实验结果显示，通过用配套OVB缓冲液稀释3倍后检测的重度脂血样本回归处理结果与用高速离心机处理后的检测结果无显著统计学差异，PT、APTT统计P值均大于0.05，与陈欢的研究结果较一致^[6]。本实验需注意正常对照组应选择外观无肉眼可见异常的样本，充分排除溶血、黄疸、异常蛋白等对检测方法的干扰。同时抽血要顺利，避免抽血不顺引起血液微小凝固，肉眼不易发现而造成检测结果差异较大。采血量要准确，采血量过多或偏少均会造成血液与抗凝剂比例不准确，从而收集到的检测结果无研究意义。凝血功能检测标本采血量不足，尤其是低于标准刻度80％以下时，PT、APTT、TT、FIB和D-Dime检测结果均有较大影响。据报道，不准确的检验结果有大约80％可溯源至分析前不规范的操作程序，而标本采集的不规范、不准确是最重要的原因^[7] 。由于住院标本大多数由临床医生或护士采集完成（乡镇卫生院多为检验科人员完成），新进工作人员或实习同学操作时常出现不合格样本。因此，检验科可利用护理专项培训、质控活动、不良事件讨论等机会，肩负起对相关人员的宣传培训任务。通过培训，引起他们的高度重视，避免因再次采集标本对病人造成伤害的同时，尽量减少因不合格标本因素对检验结果造成影响，使检验科发出更加准确的报告，为临床医生的诊疗工作提供更好的检验支撑。

日常检验工作中，我们可以通过相对简单的高速离心方法快速处理脂血样本，以便对急诊病人、脂代谢异常病人及时提供准确的凝血功能结果。但对于大多数凝血检测实验室，均未购置高速离心机。因此，我们也可以通过稀释方法回归处理此类标本，为临床提供准确的检验结果。稀释回归法值得在中小型医院，特别是基层医院广泛推广。此外，本实验只对PT、APTT两项作了统计分析，常用的凝血功能FIB、TT两项未作统计分析，如脂血样本需获得较准确的检验结果，可采用相同的方法对此两项进行统计分析。虽然已有较多文献报告对稀释回归检测法给予了极大肯定，但各实验室所使用的仪器、试剂有所不同，应根据自己实验室实际情况对相关指标加以方法学验证，得出符合本实验室的回归方程。

尽管稀释回归检测法和高速离心检测两种方法均可以处理凝血脂血样本，但针对正常样本来说，稀释法需要耗费更多的检测时间。检测人员的操作规范性对稀释倍数的准确性有极大的影响，不同检测人员操作也难以标准化。此外，由于脂血严重程度的不同,对检测结果的影响程度未知,重度脂血标本甚至会出现检测不出结果的情况，导致实验室人员误报大于检测上限,从而严重影响临床医生对疾病的判断^[8]。本实验也未根据乳糜的不同程度（检测样本甘油三酯含量）综合分析稀释法的准确性，实验结果具有一定局限性。高速离心法虽简单易行，但高速离心机的配备也需要一定的财力，一般检测实验室未作为常规仪器购置。基于此情况，对于常规病人，遇到重度脂血样本时，我们可以建议临床医生告知病人第二天空腹采血，或临床医生先停用病人脂肪乳的输注，待病人恢复正常后重新采血检测。这样既可以避免检测脂血样本的繁琐，更能为临床提供准确的检测结果。当然，针对急诊样本，我们可以根据自身实验室条件选择上述两种方法及时处理相关样本，以免延误病人的诊断、救治。

参考文献

[1]李强,冯丽梅,郑磊,等. 稀释法在严重脂血标本凝血检测中的应用[J].血栓与止血学,2011,17(4):172-174.

[2] 丛玉隆.积极开展血栓与止血实验及质量控制[J].中华医学检验杂志,1998,21(5):261-262．

[3]彭传梅,高辉,王杨,等.稀释回归法在脂血标本凝血检测中的应用探讨[J].国际检验医学杂志,2016,37(4):494-495+498.

[4]尹及.凝血检测中影响因素分析[J].药物与人,2015,28(I):371.

[5]马燕鹏,曾雪梅,潘爱琴.早产儿凝血功能监测的临床意义及护理[J].国际医药卫生导报,2014,20(14):2172-2174.

[6]陈欢.脂血标本凝血PT、APTT检测应用稀释回归法临床分析.包头医学,2017,41(4):16-17.

[7]郭光辉,束振华.影响凝血四项测定结果的分析前因素.海南医

学,2010,21(24):108-109.

[8] 张健,厉淑青.凝血因子检测工作中两种处理乳糜血方法的评价[J].国际检验医学杂志,2013,34(13):1724-1725.

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