行气坦尼卡尔胶囊中芦荟苷和胡椒碱的含量测定

行气坦尼卡尔胶囊中芦荟苷和胡椒碱的含量测定

罗恒磊 孙琰琴 冀祖恩 张薇

新疆全安药业股份有限公司，新彊维吾尔自治区巴音郭楞蒙古自治州库尔勒市 841000

摘要：目的 对行气坦尼卡尔胶囊中的芦荟苷和胡椒碱建立测定方法。方法 色谱柱（AKZONOBEL Kromasil100-5C18，4.6*250mm）；流动相：乙腈-水梯度洗脱；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：350nm。结果 采用HPLC法测定行气坦尼卡尔胶囊中芦荟苷、胡椒碱的含量，方法学研究表明，含量测定方法的专属性好，其他成分和辅料对样品测定无干扰。芦荟苷和胡椒碱的浓度与色谱峰面积之间呈良好的线性关系，芦荟苷的线性范围为0.095～5.700ug，相关系数r=0.9995；胡椒碱的线性范围为0.02～1.20ug，相关系数r=0.9999。芦荟苷的检测限为0.011ug，定量限为0.330ug；胡椒碱的检测限为0.024ug，定量限为0.084ug。精密度连续五次进样的RSD分别为1.36％和1.08％；24小时稳定性试验的RSD分别为1.44％和1.47%；重复性试验的RSD分别2.49％和2.77％；加样回收率分别为101.82％和101.70％，RSD分别1.18％和1.93％。以上结果说明此方法稳定、可靠。

关键字：芦荟苷；胡椒碱；高效液相法；

中国分类号：R917 文献标识码：A

行气坦尼卡尔胶囊为常用的维吾尔医成方制剂，由芦荟、胡椒、硼砂和天仙子四味药材组成，收载于《卫生部药品标准-维吾尔药分册》（1998 年版）。本方性质干热，具生干生热，清理肠胃，增加食欲，通畅除胀，通便，散气止痛等功效，临床用于湿寒性或黏液质性消化器官疾病，如肠胃功能不佳，食欲不振，肠阻腹胀，便秘等。由于原部颁标准中无含量测定内容,为了控制该制剂的质量，保证临床用药安全、有效，采用高效液相法测定行气坦尼卡尔胶囊中芦荟苷和胡椒碱的含量。结果表明该含量测定方法稳定、重复性好。

一、实验部分

1.试剂和药材

高效液相色谱仪：Agilent 1100；

芦荟苷对照品：购自上海融禾医药科技发展有限公司，纯度99.0%；

胡椒碱对照品：购自中国药品生物制品检定研究院，纯度98.8%；

乙腈：色谱纯，天津市彪仕奇科技发展有限公司产品；

水：双蒸水，自制；

磷酸：分析纯，天津市天河化学试剂厂。

2.方法与结果

2.1 溶液制备

对照品溶液的制各 取芦荟苷对照品、胡椒城对照品适量，精密称定，加甲醇制成毎lml含芦荟苷100ug、胡椒城20ug的混合溶液,即得。

供拭品溶液的制各 取行气坦尼卡尔胶囊内容物,研细,取约0.1g,精密称定,置100ml棕色容量瓶中，加甲醇90ml,超声处理(功率250W,频率40kHz)15分钟,取出,放冷,用甲醇稀释至刻度,摇匀，滤过，取续滤液,即得。

2.2 色谱条件

色谱柱：AKZONOBEL Kromasil 100-5C18，4.6*250mm；流动相：乙腈-水梯度洗脱（表1）；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；检测波长：350nm。实测理论板数按芦荟苷峰计算为19285。

在此色谱条件下，供试品色谱中芦荟苷及胡椒碱色谱峰与相邻色谱峰有较好分离（芦荟苷与两侧色谱峰分离度分别为：2.19、1.77，胡椒碱与两侧色谱峰分离度分别为：2.42、2.85），阴性样品无干扰，专属性较好。

表1 芦荟苷胡椒碱含量测定流动相梯度

3．方法学考察

3.1 标准曲线的绘制

3.1.1 芦荟苷标准曲线与线性范围：精密称取芦荟苷对照品1.9mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀制成每1ml含0.19mg芦荟苷的溶液。分别精密吸取0.5、1、2、5、10、15、20、25、30μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线。回归方程为Y=1389X-9.009，相关系数r=0.9995。芦荟苷的线性范围：0.095～5.700μg（见图 1）

_{图 1 芦荟苷标准曲线}

3.1.2 胡椒碱标准曲线与线性范围：精密称取胡椒碱对照品2.0mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1ml含0.04mg胡椒碱的溶液。分别精密吸取0.5、1、2、5、10、15、20、25、30μl，注入液相色谱仪，测定峰面积。以进样量（ug）为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线。回归方程为Y=6726X+16.13，相关系数r=0.9999。胡椒碱的线性范围：0.02～1.20μg（见 图 2）。

图 2 胡椒碱标准曲线

3.2 定量限 按照《中国药典》质量标准分析方法验证指导原则中定量限进行测定，信噪比为10:1时，能被定量测定的芦荟苷最低量为11ng、胡椒碱为0.88ng。

3.3 精密度考察：取本品内容物(批号为20200705)制备供试品溶液，连续进样6次，测得芦荟苷、胡椒碱的平均峰面积为1285.1、1159.8，RSD分别为1.36%、1.08%。结果表明仪器精密度良好。

3.4 稳定性考察：取本品内容物(批号为 20200705)制备供试品溶液，分别在0，2，4.5，7，10，13，16，19，24小时进样，测得芦荟苷、胡椒碱的平均峰面积为1266.4、1148.9，RSD分别为1.44%、1.47%。结果表明样品,溶液在24小时内稳定。

3.5 重复性试验：取本品内容物(批号为 20200705)，称取6份，按供试品溶液的制备方法制备供试品，测定峰面积，测得芦荟苷、胡椒碱的平均含量为27.45mg、4.68mg，RSD分别为2.49%、2.77%。结果表明方法的重复性较好。

3.6 准确度试验

3.6.1 芦荟苷回收率试验

精密称取芦荟苷对照品24.6mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇制成浓度为0.246mg/ml的对照品溶液；另精密称取胶囊内容物(批号为20200705)25.0mg共6份，分置25ml棕色量瓶中，精密称定，分别加入芦荟苷对照品溶液各10ml，充分吸附后，再加甲醇10ml，超声30分钟，取出，放冷、以甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过得回收率供试品；另同时称取两份胶囊内容物各50mg，置50ml棕色量瓶中，不加对照品溶液，以甲醇提取制备供试品溶液。所有供试品均按含量测定方法测定，计算出回收率，结果表明样品含量测定方法可行（见表2）。

表2 芦荟苷准确度试验结果

序号	1	2	3	4	5	6	7	8
称样量(mg)	25.5	25.7	25.2	25.8	25.5	25.3	48.5	50.9
测得芦荟苷总量 (mg)	4.92	4.97	4.87	5.01	4.94	4.89	4.62	4.85
实际含量（mg）	2.43	2.45	2.40	2.47	2.56	2.55	折算含量均值为 95.2mg/g
芦荟苷入量 （mg）	2.46
回收率(%)	101.25	102.44	100.50	103.76	102.12	100.87
平均回收率(%)	101.82
RSD(%)	1.18

3.6.2 胡椒碱回收率试验

精密称取胡椒碱对照品3.95mg，置100ml棕色量瓶中，加甲醇制成浓度为0.0395mg/ml的对照品溶液；另精密称取胶囊内容物(批号为20200705)25.0mg共6份，分置25ml棕色量瓶中，精密称定，分别加入胡椒碱对照品溶液各10ml，充分吸附后，再加甲醇10ml，超声30分钟，取出，放冷、以甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过得回收率供试品；另同时称取两份胶囊内容物各50mg，置50ml棕色量瓶中，不加对照品溶液，以甲醇提取制备供试品溶液。所有供试品均按含量测定方法测定，计算出回收率，结果表明样品含量测定方法可行（见表3）。

表3 胡椒碱准确度试验结果

序号	1	2	3	4	5	6	7	8
称样量(mg)	25.5	25.2	25.0	25.0	25.9	25.1	50.2	50.1
测得胡椒碱总量 (mg)	0.7816	0.7825	0.7835	0.7908	0.8091	0.7837	0.7488	0.7767
实际含量（mg）	0.3902	0.3856	0.3825	0.3825	0.3963	0.3840	折算含量均值为 15.3mg/g
胡椒碱入量 （mg）	0.3950
回收率(%)	99.09	100.49	101.52	103.37	104.51	101.19
平均回收率(%)	101.70
RSD(%)	1.93

4．三批中试产品芦荟苷及胡椒碱的含量测定 取三批中试样品，均照上述方法制备供试品溶液，微孔滤膜滤过，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，计算含量。测定结果见表4。

表4 三批中试产品中芦荟苷及胡椒碱含量测定结果

批号	芦荟苷含量（mg/粒）	胡椒碱含量（mg/粒）
20200705	27.45	4.68
20200706	29.64	4.74
20200707	27.54	5.07
均值	28.21	4.83

根据测定结果，含量限度下调20%，暂定本品每粒(标示装量0.3g)含芦荟苷不得少于24mg，含胡椒碱不得少于3.30mg。

5.讨论

制剂中药材直接粉碎混合入药，根据药典中的限度芦荟药材中芦荟苷含量不少于18.0%，胡椒中胡椒碱含量不少于3.3%，折算处方量中，芦荟占49.23%，胡椒占36.92%，折算理论含量应为本品每粒（标示量0.3g）含芦荟苷不少于26.6mg，含胡椒碱不少于3.65mg。

经方法学研究和对三批中试样品的测定，表明此含量测定方法专属性强，符合药典要求，可以有效检验产品的质量。