不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值

不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法对菌阴肺结核的诊断价值

董庆焕 郑小红

安陆市普爱医院，湖北孝感， 432600

【摘要】目的：分析菌阴肺结核诊断时不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法的价值。方法：择60例疑似菌阴肺结核患者，将结核菌培养诊断作为金标准，开展支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法、荧光定量 PCR 法检测。对比结果。结果：支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测与金标准检测诊断度、特异度以及敏感度一致，效果较佳，显著优于荧光定量 PCR 法。结论：在对菌阴肺结核患者实施检测时，支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测效果较佳，具有显著价值，而荧光定量 PCR 法效果存在一定的误差性。

【关键词】菌阴肺结核；支气管冲洗液；结核菌培养；支气管冲洗液涂片；噬菌体生物扩增法检测；荧光定量 PCR 法

结核病是一种由结核杆菌所导致的慢性疾病，可能会累计患者全身多个器官。在临床上多表现为慢性过程，少数患者可能存在起病急^[1-2]。治疗时间长，药物的副作用较大，导致患者机体免疫能力下降明显，极易出现肺部感染等并发症^[3]。由于当前抗生素糖皮质激素以及免疫抑制剂的广泛使用，导致病菌存在增加趋势，结核病患者伴有高发病、高感染以及高耐药趋势不断呈现上升状态，因此如何有效及检测并控制结核病成为现阶段讨论的热点问题^[4-5]。患者在患有菌阴肺结核后，若未及时采取治理措施，死亡概率较大，对患者的生命健康造成严重威胁，但是该类疾病在早期却又缺少显著的表现，在病情发展一段时间后，可能会出现严重并发症状，因此在临床上对其进行诊断时，难度较大^[6-7]。而作为菌阴肺结核疾病诊断中的重要措施，支气管镜检查在其诊断中具有重要意义，其不仅可以将患者病灶进行准确显示，还能够为后期医护人员制定治疗方案提供参考依据^[8]。基于此，本次研究选取60例疑似菌阴肺结核患者，分析不同支气管冲洗液结核分枝杆菌检测方法的价值。现报道如下。

1资料与方法

1.1临床资料

对象：疑似菌阴肺结核患者；时间：2019.12-2020.12；例数：60例。所有患者均签署知情同意书，男/女：33/27例，年龄：18~31，平均（25.12±1.22）岁；病程1~27个月；平均（17.14±1.22）月。

纳入指标：（1）所有患者均存在菌阴肺结核相关临床症状；（2）患者临床资料齐全 ；（3）患者依从性高，积极配合医护人员工作；（4）患者未存在消瘦、血痰、无力等症状。

排除指标：（1）患者存在肝肾基础型功能疾病；（2）患者为活动性肺结核患者；（3）患者合并存在肿瘤；（3）患者存在精神意识障碍，无法与医护人员正常交流；（4）研究一半退出患者。

1.2方法

支气管镜检查。局部麻醉后将支气管镜从鼻腔插入支气管，观察肺及支气管黏膜有无异常症状。 有明显病变患者将 5~10 mL 生理盐水对整个肺脏进行彻底冲洗， 吸引器吸尽所有冲洗液并装于标本瓶中，检测 2~3 次。无明显病变患者可将支气管镜插入可疑部位，对病段或亚段支气管开口处用生理盐水冲洗。

支气管冲洗液涂片：将支气管镜采集的冲洗液标本进行实验室检测，严格按照《结核病诊断实验室检验规程》进行操作。通过萋－尼氏染色抗酸染色法检测抗酸杆菌，阳性：超过 3 条抗酸杆菌/300 视野。

结核菌培养：采用 BACTEC MGIT 960 型全自动分枝杆菌快速培养仪器进行标本分离、培养。将标本接种于血平板和麦康凯平板，于35℃恒温箱培养18～24h，观察菌落生长情况，随后进行革兰染色、分离、鉴定。

噬菌体生物扩增法：采用武汉康珠生物技术有限公司提供的结核分枝杆菌检测试剂盒进行检测，阳性：①多个噬菌体斑融合成透明状；②噬菌斑数量超过 20 个；二者满足其中一个即为阳性。

荧光定量 PCR 法：采用 KAPA 定量荧光 PCR 法检测冲洗液结核分枝杆菌的基因数量，阳性：结核分枝杆菌基因数量超过 1×103拷贝/mL。

1.3观察指标

分析不同方法的检测结果，与患者病情结果相对比。

1.4统计学分析

数据利用SPSS20.0分析。计数资料用x²检验，计量资料用t检验。P＜0.05为有意义。

2结果

2.1 检查结果分析

60例研究对象经检测，金标准检测结果为24例患者均为阳性结果，即菌阴肺结核，剩余36为其他疾病。

2.2 敏感度、特异度及准确度结果

支气管冲洗液涂片检测结果为23例患者均为菌阴肺结核，剩余37例患者为其他疾病。噬菌体生物扩增法检测结果为24例患者均为菌阴肺结核，剩余36例患者为其他疾病。荧光定量 PCR 法检测结果为27例患者均为菌阴肺结核，剩余33例患者为其他疾病。

支气管冲洗液涂片结果：敏感度为91.67%（22/24）、特异度为97.22%（35/36）、准确度为95.00%（57/60）。噬菌体生物扩增法检测结果：敏感度为87.50%（21/24）、特异度为91.67%（33/36）、准确度为90.00%（54/60），荧光定量 PCR 法检测结果：敏感度为58.33%（14/24）、特异度为88.46%（23/36）、准确度为61.67%（37/60），详见表2。支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测与金标准检测诊断度、特异度以及敏感度一致，效果较佳，显著优于荧光定量 PCR 法。

表2 检测结果对比

3讨论

肺结核作为一种慢性传染疾病，患者患有结核病后对其身体健康会造成较大的危害，同时还会对其他的健康人群安全造成威胁^[9-10]。所以做好结核病的预防措施，具有重要意义。结核病慢性传染源的主要特点为以下几点。（1）传染性强。作为一种传染性较强的疾病，结核病的传播途径主要是飞沫传染^[11]。结核病患者打喷嚏、咳嗽或者在说话的过程中，都可能会将带有结核杆菌的飞沫传播到空气之中，健康人群在呼吸到被污染的空气之后，其被感染的风险会较大。（2）传染速度快。结核病在传播时，若途径合适，并且存在易感机体的状况下，在短时间内传染源便会入侵易感人群中，例如部分体质比较差的婴幼儿、老年以及营养不良的人群^[12]。（3）传播的范围广泛。结核病患者在确诊之前，具有一段时间的潜伏期。由于该类疾病的感染性较强，并且其到达外环境中也可以长时间地存在，因此并不需要被感染者以及其他人群与感染者有直接身体接触，便可能受到感染^[13]。例如在学校、商场、公交车以及地铁等人员密集的场所，环境一旦被感染，便可能会出现大范围的传播。因此当前应采取有效的检测措施，对肺结核患者开展检测，早期明确结核分枝杆菌性质对治疗方案的选择具有指导意义^[14]。

纤维支气管镜检查常应用于支气管结核和淋巴结支气管瘘的诊断，支气管结核表现为黏膜充血、溃疡、糜烂、组织增生形成瘢痕和支气管狭窄，可以在病灶部位钳取活体组织进行病理学检查和结核分枝杆菌培养。对于肺内结核病灶，可以采集分泌物或冲洗液标本做病原体检查，也可以经支气管肺活检获取标本检查。支气管镜检查是临床诊断肺结核的有效方法，可以直观观察病灶情况。利用活检钳、毛刷刺激肺泡、支气管，生理盐水冲洗可以疏通支气管，增加排痰量，采集冲洗液标本进行细菌学检查。同时，将生理盐水注入肺实质、远端气道，病灶接触范围广，刺激咳嗽，有利于排除结核杆菌，吸引器能够搜集大量冲洗液，提高检出率。结核在支气管镜下表现：根据气管支气管结核的发展进程、严重程度和类型等，可表现为气管、支气管黏膜充血、水肿、肥厚、糜烂、溃疡、坏死、肉芽肿、瘢痕、管腔狭窄、管腔闭塞、管壁软化及支气管淋巴结瘘等。

抗酸染色涂片是细菌学检查的基本方法，通过石炭酸复红初染、盐酸酒精处理、碱性美兰复染后结核分枝杆菌为红色，对结核分枝杆菌敏感性强。分枝杆菌细胞壁中的肽聚糖外周包裹着大量脂质，难以着色，且与燃料结合后酸性脱色剂难以脱色。所以，通过抗酸染色可以判断患者体内是否存在结核分枝杆菌，操作简单，是临床诊断肺结核的金标准。但是结核菌培养抗酸染色耗时约为20d甚至更长，检查费用昂贵，存在明显的不足。

荧光定量PCR法利用荧光标记的寡核苷酸探针或荧光染料，对结核菌的某个特定核酸序列的DNA拷贝数量进行快速体外扩增至百万倍，通过DNA探针、PCR杂交技术观察荧光变化情况，记录NDA模板定量。具有敏感度高、检测时间短，在早期诊断中有着明显优势。但是该方法对仪器设备、技术、人员要求高，假阳性结果较多。

噬菌体生物扩增法利用结核分枝杆菌噬菌体对活性结核分枝杆菌的感染作用大量繁殖，裂解菌体后释放子代噬菌体，快速感染指示细胞，裂解后产生噬菌斑。而其他不能感染的噬菌体加入杀毒剂后会失去活性，通过噬菌斑数量可以判断是否存在结核分枝杆菌。该法对技术、检验设备要求低，24h即可检出。研究中出现误差情况，可能与标本采集不当、活性菌量少、感染时间、噬菌体浓度等因素有关，还需扩大试验样本，提高准确率。

本次研究中，60例研究对象经检测，金标准检测结果为24例患者均为阳性结果，即菌阴肺结核，剩余36为其他疾病。支气管冲洗液涂片检测结果为23例患者均为菌阴肺结核，剩余37例患者为其他疾病。噬菌体生物扩增法检测结果为24例患者均为菌阴肺结核，剩余36例患者为其他疾病。荧光定量 PCR 法检测结果为27例患者均为菌阴肺结核，剩余33例患者为其他疾病。支气管冲洗液涂片结果：敏感度为91.67%（22/24）、特异度为97.22%（35/36）、准确度为95.00%（57/60）。噬菌体生物扩增法检测结果：敏感度为87.50%（21/24）、特异度为91.67%（33/36）、准确度为90.00%（54/60），荧光定量 PCR 法检测结果：敏感度为58.33%（14/24）、特异度为88.46%（23/36）、准确度为61.67%（37/60）。支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测与金标准检测诊断度、特异度以及敏感度一致，效果较佳，显著优于荧光定量 PCR 法。因此可以看出利用支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测方式，可以有效鉴别出患者疾病的差异。

另外，利用支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测，能够使临床医师更加深入地了解患者病灶受损情况，为后期的临床治疗方案的确定，提供科学建议，缩短患者的治疗时间，提高治疗效果。所以临床医师在对菌阴肺结核患者诊断时，可以利用支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测，了解患者目前是否处于正常水平，若出现阳性反应，应加强重视，分析患者是否存在菌阴肺结核疾病，避免出现漏诊或者误诊情况，发挥其参考作用，提高临床诊断效果，减少疾病对患者的损伤。

本次研究存在一定问题，例如部分患者遵医嘱性差，影响检测结果；研究样本数量较少，研究时间较短。因此在后期应加强对患者的沟通，保障患者均能正常沟通交流，能积极配合研究与治疗；延长研究时间，增大研究样本数量，为后期临床治疗提供科学数据，保障患者的安全。

综上所述，对菌阴肺结核患者诊断时，采取支气管冲洗液涂片、噬菌体生物扩增法检测效果显著，可以提升检测准确度，值得推广。

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