减少新型冠状病毒核酸检测的“假阴性”

减少新型冠状病毒核酸检测的“假阴性”

李阳

乐至县人民医院，四川 乐至 641500

春节将至，除了西安之外，郑州、深圳、天津等地也爆发了新一轮新冠疫情，各地医护人员纷纷奔赴疫区进行应援，开展全员核酸检测工作。虽说，如今我国疫情防控工作已进入常态化，但新型冠状病毒核酸检测仍是疫情防控工作中非常关键的一环，如何减少新型冠状病毒核酸检测的“假阴性”，确保检测结果准确，是值得思考的问题。

检测前质量控制

样本采集：新型冠状病毒传染性强，采样过程中，既要做好相应防护，还应依据口、鼻等部位采集要求，严格把控细节，确保样本量足够，避免其受到污染，保证所采集样本均达标。新冠肺炎患者感染初期，症状不明显，体内病毒含量低，以下呼吸道感染为主，病灶部位样本获取难度较大，容易出现“假阴性”。同理，经治疗后，患者也会出现“假阴性”情况。针对此类情况，最佳处理方法为增加采样频率，扩大采样部位。在新型冠状病毒核酸检测中，采样部位包括鼻咽拭子标本、口咽拭子标本、下呼吸道痰液及气道抽取物等。在全员核酸检测中，为兼顾便利度，减轻患者的不适感，通常采用口咽拭子标本采样方法。为减少“假阴性”情况，需严格按照标准，在无菌生理盐水中润湿拭子，合理把握采样速度、时间、距离，尽量把采样时间延长。同时，避免与腺体接触，以免病毒核酸降解，提高检出率。在采样设备选择中，以旋盖容器为宜。

样本转运：完成样本采集后，立即送检，预防核酸降解。在2-8℃环境中，把转运时间控制在72h，转运温度以-70℃及以下为宜。该过程中，还应对样本丢失、错位等一系列问题进行规避，优选密封性强，耐温、抗压强的转运箱，规避“假阴性”问题。

病毒灭活：为规避生物安全隐患，需在样本检测前，实施病毒灭活处理。曾有实验证实，病毒含量较低的样本容易受病毒灭活过程影响，造成“假阴性”结果。因而，需按照标准对病毒灭活过程进行严格控制，注意温度、时间把控，减少此类情况。由于口、鼻咽拭子中病毒含量较少，可用裂解液对病毒保存液进行替代，省略高温灭活环节，直接提取核酸，但应缩短样本转运时间，预防核酸降解，得出准确的检测结果。

检测中质量控制

优选核酸提取方法、试剂：在新型冠状病毒核酸检测中，检测结果会受提取方法、试剂等诸多因素影响。如今，磁珠法、煮沸裂解法等在核酸提取中应用普遍。其中，煮沸裂解法的缺陷在于无法使核酸浓缩，可能会存在相应物质，抑制PCR反应，标本病毒含量低，出现“假阴性”。磁珠法操作过程标准、便捷，自动化程度高，核酸提取过程稳定。同时，在试剂选择方面，把样量大，洗脱产物量小的提取试剂作为最佳选择，对各操作环节进行严格规范，获取准确的核酸检测结果。

阴性和阳性质量控制：这一环节的目的在于对核酸检测中是否存在试剂污染、试剂失效、操作失误等情况进行监测，确保核酸检测结果准确、可信。目前，在新型冠状病毒核酸检测试剂盒中，阳性质量控制以人工合成的含目的基因的假病毒为主，阴性质量控制以病毒保存液或生理盐水为主。上述两类质量控制样品应以各批次核酸提取、扩增检测全流程为参照。将阴性质量控制和阳性质量控制工作落实到位也是规避核酸检测结果“假阴性”的主要方法。

检测后质量控制

正确判读检测结果：对该批次核酸检测结果是否可信进行严格判断。倘若结果中出现阳性质量控制或阴性质量控制异常，提示该批次样本检测结果不可信，需进行二次样本提取、检测。反之，则说明检测结果准确。同时，以核酸检测试剂说明书为参照，将其作为检测结果判定依据。以两个不同耙标检测结果为依据判定。两耙标检测结果均显示阳性，提示新型冠状病毒核酸检测结果为阳性；两耙标检测结果均显示阴性，提示新型冠状病毒核酸检测结果为阴性；两耙标检测结果显示一阴性一阳性，说明检测结果存疑，再次进行样本提取、检测，把复检结果作为判定依据。

生成准确检测报告：在生成新型冠状病毒核酸检测报告过程中，既要确保样本检测结果准确，还要在报告中对阴性结果、可疑结果做出解释，给出科学、严谨的临床建议。检测报告是新型冠状病毒核酸检测结果的有效证明，生成过程中力求严谨。

温馨提示

在新冠肺炎疫情形势下，新型冠状病毒核酸检测非常关键，直接关乎到疫情防控成效。此项工作的特点决定了新型冠状病毒核酸检测专业性较强，对工作人员提出了非常高的要求，一定要从多个方面进行优化，方能有效规避核酸检测结果“假阴性”情况。其一，被感染者细胞内含病毒，不同时期、不同部位病毒浓度各异，应依据病情进展在各阶段对各部位实施多类型样本采集，得出准确的检测结果。其二，注意样本采集人员培训工作，确保样本采集流程、方法标准，采集到含病毒细胞。其三，加大研究力度，确保体外诊断试剂的可靠性。其四，在疫情防控大形势下，对临床实验操作过程进行严格要求，确保其规范性，既要加强实验室质量管理，还要确保分区合理，操作过程标准，避免因人为、环境等因素所致的“假阴性”结果，遏制疾病传染，为后续隔离、治疗方案的提出奠定良好的基础，提高全国新冠疫情防控工作质量。

作者简介：李阳（1986-），女，四川省资阳市，乐至县人民医院，本科，主管检验师，临床微生物检验