新复方大青叶片中四种西药成分含量测定结果分析

新复方大青叶片中四种西药成分含量测定结果分析

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【摘要】目的：对新复方大青叶中的对乙酰氨基酚、异戊巴比妥、维生素C、咖啡因的成分含量进行测定。方法：使用高效液相色谱法（HPLC）对上述四种成分含量测定。结果：四种成分的精密度、重复性、平均回收率均处于良好水平，VC于3h内测定为稳定性最佳，其余三者为8h内测定稳定性最佳。结果：HPLC测定新复方大青叶片含量显示出准确性高、重复性好的重要特点，可用于质量控制工作的开展当中。

【关键词】新复方大青叶；西药成分；检测

新复方青叶片作为中西药物复方感冒制剂，其含量测定在药物控制方面非常重要。采用合理的测量方式对复方大青叶片的成分含量实施测定，在提升该药物安全性和有效性方面都可发挥出重要作用。将HPLC应用在上述成分的的测定当中，可发挥出良好的应用价值，现报告如下。

1.材料与仪器

1.1实验材料

实验试剂均主要有对照品、供试品、阴性对照样品。

1.2实验仪器

本次实验的主要仪器：（1）高液相色谱仪：岛津20-2010A；（2）紫外分光光度计：岛津UV -2550；（3）超纯水器：MILLIPOPE Simplicity；（4）电子天平：St- artorius BP211。

2.方法与结果

2.1乙酰氨基酚、咖啡因、异戊巴比妥的含量测定

2.1.1色谱条件

（1）色谱柱：Phenomenex C18(50mm×4.6mm,5μm)；（2）流动相：甲醇-0.1% 浓度磷酸水溶液 (30：70)；（3）检测波长：215nm；（4）进样量：20μL。

2.1.2溶液的制备

（1）对照品制备：分别取适量对照品，称定后加50%甲醇分别制成每1ml含乙酰氨基酚0.5mg、含咖啡因0.05mg、含异戊巴比妥0.05mg的溶液；（2）供试品制备：选取复方大青叶片20片，去除糖衣后研磨为细末，称定0.5g于锥形瓶中，加甲醇100ml称定，以60min完成加热回流之后，将其静置作冷却处理，混匀滤过之后得溶液；（3）阴性对照样品：选取不含有药物成分的阴性试剂（0.1g），称定后按照供试品制备方法制取。

2.1.3专属性试验

将适量的对照品、供试品和阴性对照样品溶液（20μL）分别注入到色谱仪中可发现（如图1、2、3所示），处于相同时间位置的供试品与对照品表现为相同波峰，但阴性对照样品无此种现象（无干扰）。

图1 对照品HPLC色谱图

图2 供试品HPLC色谱图

图3 阴性对照样品HPLC色谱图

注：A：对照品；B供试品；C：阴性对照样品

1.对乙酰氨基酚；2.咖啡因；3.异戊巴比妥

2.1.4精密度试验

将等量对照品（20μL）吸取注入到色谱仪中，连续进样5次测出的结果显示，对乙酰氨基酚、咖啡因和异戊巴比妥的RSD分别为0. 89%、0. 97%和1.03%，精确度均处于良好状态。

2.1.5稳定性试验

将同一份供试品（序号1）为依据来吸取溶液，在0、2、4、6、8h进样，测定峰面积后对RSD计算，观察稳定性情况。结果显示，对乙酰氨基酚、咖啡因和异戊巴比妥三者的RSD分别为0.16%、0.17%、0.34%，提示室温状态下8h内可满足测定的相关需求。

2.1.6重复性试验

制备出5份样品供试品溶液（序号1），实施对乙酰氨基酚、咖啡因和异戊巴比妥含量的同时测定，将含量作为指标对RSD进行计算，分析重复性。试验结果显示，三者的重复性分别为0.45%、0.61%、0.38%，提示重复性良好。

2.1.7回收率试验

称取已知含量的制剂5份，分别加入适量的对乙酰氨基酚、咖啡因和异戊巴比妥对照品，混合均匀之后进行测定，结果显示三者的平均回收率分别是99.23%（RSD=0.88%,n=5）、98.43%（RSD=0.68%,n=5）、98.56%（RSD=0.78%,n=5）。

2.1.8样品含量测定

使用HPLC对上述制备的对照品、供试品进行样品含量的测定，结果如表1所示。

表1 样品含量测定结果 （%）

2.2维生素C的含量测定

2.2.1色谱条件

（1）色谱柱：Phenomenex NH2(50mm×4.6mm,5μm)；（2）流动相：乙腈-0.1%浓度磷酸水溶液 (5：95)；（3）检测波长：215nm；（4）进样量：20μL。

2.2.2溶液的制备

（1）对照品制备：取适量VC对照品，称定后加0.1% 浓度磷酸水溶液制成每1ml含0.1mg的溶液；（2）供试品制备：选取复方大青叶片20片，去除糖衣后研磨为细末，称定0.35g于棕色锥形瓶中，加磷酸溶液100ml后使用超声处理10min后冷却，混匀滤过后得到溶液。

2.2.3专属性试验

取适量对照品、供试品和阴性对照样品注入色谱仪中，在相同时间位置处的供试品与对照品在存在峰值，阴性对照样品则未显示（无干扰），如下图4、5、6所示。

图4 对照品HPLC色谱图

图5 供试品HPLC色谱图

图6 阴性对照样品HPLC色谱图

注：A：对照品；B供试品；C：阴性对照样品

2.2.4精密度实验

将等量对照品（20μL）吸取注入到色谱仪中，连续进样5次的测定结果提示精密度较好（RSD=0.65%）。

2.2.5稳定性试验

吸取同一份供试品，在0、1、2、3、4h进样，测定峰面积后实施RSD计算。结果显示，VC在3 h内稳定性较好（RSD=2.52%），4h内RSD=3.32%。

2.2.6重复性试验

称取同一批样品5份，重复测定得到结果提示VC重复性较好（RSD=1.17%）

2.2.7回收率试验

称取已知含量的制剂5份，分别加入适量VC对照品进行测定，加样回收率结果为99.37%（RSD=1.41%,n=6）。

2.2.8样品含量测定

使用HPLC对上述制备的对照品、供试品进行样品含量的测定，结果如表2

所示。

表2 样品含量测定结果 （%）

3.讨论

使用紫外可见分光光度计扫描发现，对乙酰氨基酚、咖啡因和异戊巴比妥的最大吸收波长分别为246nm、272nm、215nm，故选用215nm为检测波长。同时选用甲醇为主要提取溶剂，超声法和振摇法为主要提取方法。高效液相色谱提取法具有操作简单且重复性较好的特点，可为上述成分的含量测定提供技术支撑。VC为稳性较差，因此选取磷酸水溶液为溶剂，并将其置于棕色量瓶中缓解分解，由实验可知，VC含量含量测定需在3h内完成。

综上所述，对乙酰氨基酚、咖啡因、异戊巴比妥和维生素C都是构成新复方大青叶片的重要成分，与其疗效密切相关，使用HPLC测定成分含量显示出重要价值。

【参考文献】

[1]张俊莹. 新复方大青叶片中四种西药成分的含量测定方法研究[J]. 中国处方药,2020,18(07):32-34.

[2]孔维洁,翟莹,袁发浒,张涛,曹晓琴,陈中强. 连翘、黄芩、大青叶三味中药药理作用及主要活性成分含量检测方法研究[J]. 广东化工,2021,48(10):199-201+208.