气相色谱法测定饼干类食品中甜蜜素的含量

(整期优先)网络出版时间:2022-07-18
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气相色谱法测定饼干类食品中甜蜜素的含量

张兴玮

合浦县食品药品检验检测中心   广西北海 536100

摘要:甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)是一种具有天然甜味的非营养性甜味剂。甜蜜素是一种没有营养价值的物质,过量食用,其代谢物会对人体的肝、神经产生损害,甚至引起肿瘤。采用气相色谱法对周口市饼干、面包等食品进行了测定。结果显示,该产品的糖化率为6.94%,在0.002~0.379克/千克之间,产品的检出率为100%,回收率为85%~99%。

关键词:气相色谱法;饼干类;甜蜜素

气相色谱法(gaschromatography简称GC)是色谱法的一种。色谱法中有两个相,一个相是活动气相色谱图相,另一个相是固定相。假如用液体作活动相,就叫液相色谱,用气体作活动相,就叫气相色谱。该方法常应用于检测食品中的防腐剂,以酸型、酯型防腐剂为主,用来测定能气化但是难以分解的物质。对于那些难以气化的物质主要是运用化学衍生化方法来测定,其操作过程和步骤都比较简单。

环己基氨基磺酸钠(中国食品添加剂代码):19.002;INS号码(国际代码):952.甜蜜素是一种在各种食品中广泛应用的人造甜味剂,也是各级食品监管部门经常进行的监测和检验,GB2760-2014中对甜蜜素的使用上限为0.65~8.0g/kg。新的国家标准GB5009.97-2016于2017年3月1日开始执行。HPLC—MS—MS方法是测定白酒、葡萄酒、黄酒和料酒中甜蜜素含量的方法;采用液相色谱法测定配制葡萄酒中的甜蜜素;其它如饮料类、蜜饯凉果、果丹类、话化类、带壳及脱壳的成熟坚果与籽类、罐头、果酱、糕点、面包、饼干、冷冻饮料、果冻、复合调味料、腌渍蔬菜和腐乳中的甜蜜素含量。

1.仪器与试剂

1.1仪器

气相色谱仪(产品型号:7890B,厂家:美国安捷伦科技有限公司);电子天平(产品型号:QU[NT]X125D-1CN,厂家:德国赛多利斯);分析天平(产品型号:MS105DU,厂家:瑞士梅特勒托利多);瓶口分液器(产品型号:V116869,厂家:德国艾本德)超声波振荡器(产品型号:TS-2403CL,厂家:常州金坛);离心机(产品型号:TGM-20M,厂家:金坛市瑞华仪器有限公司);移液枪(产品型号:V114339,厂家:北京大龙)。

1.2试剂

甜蜜素(环己基氨基磺酸钠)标准品(纯度99.5%):将0.5612g的甜蜜素标准品用水溶解并定容到100毫升混合,得到5.00mg/mL的环己基氨基磺酸贮藏溶液,放置1-4℃冷藏,可储存12个月。将20.0毫升标准贮存溶液精确地从水中取出,并将其定容到100毫升,得到1.00毫克/毫升的环己基氨基磺酸标准用量。在1~4℃的冰箱中冷藏,可以存放6个月。

1.3实验方法

在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应,生成环己醇亚硝酸酯,正己烷提取,气相色谱分离,保留时间定性,外标法定量。

1.4实验步骤

1.4.1配制标准溶液

将标准储备溶液0.16毫升,0.40毫升,0.80毫升,1.60毫升,4.0毫升,8.0毫升,在50毫升的比色管中加入水到20毫升,以使得每根管子中的甜蜜素含量依次为0.08毫克,0.20毫克,0.40毫克,0.80毫克,2.00毫克,4.00毫克[1]

1.4.2样品前处理

将该样品的可食用部分捣碎,精确称重,于50毫升的比色管内,以蒸馏水定容,并以超声波振动30分钟。冷却、混合、静置(约1.5小时,也可以离心),在50毫升的比色管中加入25毫升的上清液。有个别试样经过定容、超声振荡、冷却、混匀和静置处理后,上清液少于25毫升时,可将试样注入离心管,用4000转/分钟的离心机进行5分钟的离心,如果仍不到25毫升,可加适量的蒸馏水,再进行5分钟的离心。

1.4.3色谱分析

将以上包含标准系列溶液及样品溶液的试管置于一个管架上,一同置于冰箱内,冷藏30分钟取出,将50克/升的亚硝酸钠溶液和10%的硫酸各5毫升,盖好,将它们上下翻转1分钟,混合均匀,然后置于冰箱中30分钟。取出后,正确添加10毫升的正己烷,5克的氯化钠,盖好,将其上下翻转1分钟,混合均匀。气体色谱法测定正己烷层[2-4]

1.5测定

根据仪器的基准条件,调整气相色谱仪到最佳的测量状态,并对标准组和试样进行了测量,使其保持时间的定性分析。用测量的峰表面积,画出标准曲线,用10%平行样品进行测定。另外,要立即对样品进行正己烷萃取,并在最短的时间内进行分析,时间越长,环己醇的峰位逐步升高。

1.5.1结果与分析-标准曲线

用仪器条件对上述标准系列的溶液进行了测定,以标准溶液的浓度为横坐标,用甜味素的定量峰面积为纵坐标,见图1。结果表明,在0.08毫克/毫升至4.00毫克/毫升之间存在较好的线性方程y=593853x-11081,其相关系数为0.9988,检测限为0.002g/kg。

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图1标准曲线

2.结果与分析

2.1样品检测结果

我国规定,在饼干、面包等食品中,最高使用甜味剂是0.65克/千克。在27个样本中,有25个在0.002以下的检出值,有2个在0.002~0.379克/千克之间,有6.94%的检出率,0个不合格的,100%的合格率。结果显示,27个样本的甜蜜素含量没有超过标准,如表1所示。为了提高试验的准确性,用1个无糖的空白试样进行6次平行测量,其相对标准偏差RSD为1.41%。

表1样品检测结果

样品编号

检出值

样品编号

检出值

BD16-PK00018

0.379

BD16-PK00030

0.068

2.2加标回收实验

将甜蜜素标准液添加到3个不同的试样中进行了再循环实验,每个试样中添加1个不同的糖精标准液,其回收率为85%~99%。

3.结论

对北海市销售的饼干、面包等食品进行了GC测定,共27个批次,其中2个样品的检出率为6.94%,在0.002~0.379g/kg之间,检出值0~0,合格率100%,回收率85%~99%。实验结果显示,该方法简便、快速、准确,适合于饼干、面包等食品中的甜蜜素含量测定。

3.1原理

用水浸提法从食物中得到环已基氨基磺酸盐,再用硫酸盐溶液中的亚硝酸与环已基磺酸钠进行反应,得到环已醇亚硝酸盐。采用气相色谱氢火焰电离检测仪对样品进行了分离和测定。

4.注意事项

4.1式样制备

在领取样本前,要对食物进行分类,有壳的、有种子的与无壳无籽类,在GB2760-2014中的最大甜蜜素用量也不同,所以在配制的时候,要根据顾客的要求,选用有壳的或无壳的。采用超声波法在20分钟内清除含二氧化碳的液体样品,取得了明显的效果;低脂低蛋白固体样品经超声波处理后20分钟或在水中浸泡一晚;高蛋白样品如冰淇淋、冰淇淋,待其溶化后混合称取,加入清水超声波萃取20分钟,加入沉淀剂使蛋白质沉淀;高脂样称取后,在水中超声波萃取20分钟,然后加入石油醚,振动超声波,除去石油醚。重复上述步骤几次,以除去多余的油脂[5]

(1)在加入正庚烷之前,应将样品置于冰浴中冷却(也可以用来分析纯正的庚烷,但要记住,必须要有空白的试剂,因为很多公司的纯度都会有干扰。)试验表明,如果夏季气温较高,而不是在冰浴中浸泡5分钟,而是在亚硝酸钠和硫酸的混合下。在此之前,冰浴可以防止氮氧化物的产生,减少氮氧化物对人体的伤害。2003年国家标准规定的萃取溶剂为正己烷,一些检验者仍然习惯于采用正己烷。正庚烷和正己烷的职业危害因子浓度为1000mg/m3和180mg/m3,表明正庚烷的毒性要比正己烷小得多,正庚烷的使用对人体的安全起到了积极的保护作用。正己烷作为萃取溶剂,其毒性比正庚烷更大,而且很易挥发,很容易导致测试结果的偏差[6]。由于正庚烷和正己烷的化学特性相近,所以采用正庚烷代替正己烷作为萃取溶剂,预先将密封液面预先加封,从而将易挥发的环己醇-亚硝酸酯溶于正庚烷中。这样就能降低损耗。(2)加试试剂的使用顺序必须严格遵守,首先加入亚硝酸钠,然后加入硫酸,然后盖上离心管盖子,然后摇匀。由于衍生反应一般对反应条件特别敏感,因此可以避免局部试剂的浓度太高。(3)要严格地控制冰浴的时间。将亚硝酸钠与硫酸混合后,立即放入冰浴中30分钟。(4)要使漩涡的时间、振摇的次数和强度尽可能的一致,因为漩涡或摆动实际上是一个提取的过程,漩涡的时间、振摇的力量都会对提取的效果产生影响,因此要尽可能地保持同样的提取效果。(5)在离心分层或静止分层后,在吸入样品瓶子之前,应将上清溶液混合均匀。由于衍生物的反应持续进行,所以上清液中的甜蜜素浓度分布不均匀,在无机相中的浓度要比远离的那一端高[7]

4.2衍生

(1)最好在每次检测中都同时进行空白样品和质量控制样品。使用空白试样,可以消除溶剂的干扰,可以使用之前的对照试样,也可以使用LC-MS/MS法定值的试样,或者使用标准曲线上的某个点作为质量控制的样本。可以在序列的前、中和后三个阶段加入质控样本。(2)若样品上清液的反应值超过了曲线的线性范围,则不能得到该值,必须先用溶剂稀释后再进行测量。(3)平行样品必须进行,由于甜蜜素的变化,在GB5009.97-2016中,需要同时进行两次以上的平行分析。样品测定要严格按操作规范进行,才能得到较好的实验数据,提高检测结果的可靠性。

参考文献:

[1]赵迪,柏超凡,赵小青,许聚超.气相色谱法测定饼干类食品中甜蜜素的含量[J].食品安全导刊,2021(15):111-112.

[2]刘志鹏,杨李胜,王小鹏,黄敏兴,林继钦,余构彬,陈其钊.基于气相色谱法测定食品中甜蜜素的碱性水解法研究[J].食品研究与开发,2021,42(10):154-158.

[3]袁河,陈慧鹏,夏延斌,赵志友,江日初.气相色谱法测定槟榔中甜蜜素含量的不确定度评定[J].食品安全质量检测学报,2019,10(01):215-219.

[4]刘本发,聂巍巍,刘宪军.气相色谱法测定食品中甜蜜素前处理优化研究[J].食品安全导刊,2018(30):179-181.

[5]王豆,王一欣,李涛,乔蓉霞,吕欧,刘海波.气相色谱法测定不同种类食品中甜蜜素的分析方法优化[J].食品安全质量检测学报,2018,9(11):2606-2610.

[6]郭红云.气相色谱法测定食品中甜蜜素准确性因素分析[J].食品安全导刊,2016(26):74-75.

[7]邓颖,岑建斌,区硕俊,李秀英,罗曼妮,李婷.优化高效液相色谱法和气相色谱法测定食品中甜蜜素的对比研究[J].广东化工,2016,43(14):235-236+230.

作者简介:张兴玮(1994-10-4),男,汉族,广西北海,本科,助理工程师,从事食品检验工作。