高效液相色谱测定补骨脂配方颗粒中4种成分含量

高效液相色谱测定补骨脂配方颗粒中4种成分含量

闫伟亚

商丘市食品药品检验检测中心，商丘，476000

摘要：目的 使用HPLC同时测定补骨脂配方颗粒中的四种有效成分。方法 使用Pntulips QS- C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0ml·min-1，柱温30℃，检测波长246nm，进样量10μl。结果 补骨脂苷在0.010~0.149mg/ml（r=0.9995）、异补骨脂苷在0.020~0.298mg/ml（r=0.9996）、补骨脂素在0.017~0.260mg/ml（r=0.9999）、异补骨脂素分别在、0.026~0.387mg/ml（r=0.9999）范围内线性关系良好，平均加样回收率分别为99.1%，98.5%，99.0%，99.4%，RSD分别为1.83%、1.82%、1.27%、2.00%，4批样品各成分含量有差异。结论 补骨脂配方颗粒中补骨脂苷和异补骨脂苷含量高于补骨脂素和异补骨脂素，不同厂家补骨脂配方颗粒各成分含量有差异。

关键词：补骨脂配方颗粒；HPLC;补骨脂苷；异补骨脂苷；补骨脂素；异补骨脂素

Determination of four components in Psoralea corylifolia formula granules by HPLC

Abstract: Objective To analyze the content of active components in Psoralea corylifolia formula granules. Methods HPLC was used. Use pntulips QS - C18 (250mm × 4.6mm，5 μm) Chromatographic column, acetonitrile (a) - 0.1% phosphoric acid solution (b) was used as the mobile phase with flow rate at 1.0ml · min-1, column temperature is 30 ℃, detection wavelength was 246 nm, and the sample size was 10 μl。Results Psoralide, isopsoralen, psoralen and isopsoralen have good linearity in the range of 0.010 ~ 0.149mg/ml (r = 0.9995), 0.020 ~ 0.298mg/ml (r = 0.9996), 0.017 ~ 0.260mg/ml (r = 0.9999) and 0.026 ~ 0.387mg/ml (r = 0.9999). The average recovery rates are 99.1%, 98.5%, 99.0% and 99.4% respectively, and the RSD are 1.83%, 1.82%, 1.27% and 2.00% respectively. There are differences in the contents of various components in the four batches of samples. Conclusion The contents of psoralen and isopsoralen in psoralen formula granules are higher than those of psoralen and isopsoralen. The contents of components in psoralen formula granules from different manufacturers are different

Keywords: Psoralea Corylifolia Formula Granules; HPLC; Psoralide; Isopsoralen glycoside; Psoralen; Isopsoralen

补骨脂是蔷薇目豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia Linn的干燥果实，主产于河南、四川、山西等地[1]，民间俗称破故纸。具有补肾壮阳、补脾健胃的功效，可应用于肾虚、腰膝冷痛等症状治疗，具有免疫调节、抗肿瘤活性、平喘和促进骨细胞增殖等功能[2-4]。中药配方颗粒是由中药饮片经过现代化工艺提取保留中药饮片的有效成分，加工而成的颗粒，具有携带方便、服用简单、容易保存等优点，是中药饮片现代化，特别是中药饮片走向国际的一个重要方向

[5-6]。补骨脂配方颗粒是由补骨脂经过加水煎煮、浓缩、干燥、加辅料混匀、制粒而成。

补骨脂的化学成分较复杂，含有很多化学成分，主要活性成分为香豆素类化合物和黄酮类化合物。香豆素类化合物包括呋喃香豆素和拟雌内酯类两种，呋喃香豆素类化合物主要包括补骨脂素和异补骨脂素等，拟雌内酯类化合物主要包括补骨脂苷和异补骨脂苷等[7-9]，这四种物质均为补骨脂发挥药效的主要活性成分，而中药饮片补骨脂含量测定指标为补骨脂素和异补骨脂素的总含量[10]，因此测定补骨脂配方颗粒中的这四种物质具有重要意义。

1仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪，Chem Station for LC Systems色谱工作站；梅特勒XPE205电子分析天平；明澈-D24UV纯水/超纯水系统。

1.2 试药 对照品补骨脂苷（批号ST55020105Lot：7816）、异补骨脂苷（批号ST55030105Lot:9626）由Shanghai Standard Technology Co.,Ltd.提供，补骨脂素（批号110739-201918）、异补骨脂素（批号110738-202016）由中国食品药品检定研究院提供。补骨脂配方颗粒从2020年商丘市专项监督抽检中挑选。乙腈为色谱纯（美国Honeywell公司）；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件和系统适用性试验 色谱柱：Pntulips QS- C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脱（0~6min，11%→17%A；6~15min，17%→36%A；15~19min，36%→70%A；19~21min，70%→95%A；21~22min，95%A；22~22.1min，95%→11%；22.1~25min，11%A）流速为1.0ml·min-1；检测波长246nm，进样量10μl。4种成分与其他组分能够达到基线分离，见图1。

1.补骨脂苷 2.异补骨脂苷 3.补骨脂素 4.异补骨脂素

1. Psoralide 2 Isopsoralen glycoside 3 Psoralen 4 Isopsoralen

图1 各成分HPLC色谱图

Fig. 1 HPLC chromatogram of each component

2.2 对照品溶液制备 精确称取补骨脂苷（S1）、异补骨脂苷（S2）、补骨脂素（S3）、异补骨脂素（S4）对照品，加甲醇制成浓度为0.100mg/ml（S1）、0.199mg/ml（S2）、0.173mg/ml（S3）、0.258mg/ml（S4）该对照品的溶液，即得。

2.3 供试品溶液制备 准确称取研细的样品0.1g，加入70%甲醇50ml，室温下超声处理（频率40kHz）30分钟，放冷摇匀过滤，取滤液即得。

2.4 线性关系考察 依次配置一系列不同浓度的对照品溶液，补骨脂苷0.010、0.020、0.050、0.100、0.149mg/ml，异补骨脂苷0.020、0.040、0.099、0.199mg/ml，补骨脂素0.017、0.035、0.087、0.0173、0.260mg/ml，异补骨脂素0.026、0.052、0.129、0.258、0.387mg/ml的溶液，在“2.1”项色谱条件下测定，结果见表1，X为对照品质量浓度，纵坐标(Y)为峰面积。可知各成分在各自范围内线性良好。

表1 4种成分线性关系

Table 1 linear relationship of four components

2.5 精密度试验 取同一补骨脂苷（S1）、异补骨脂苷（S2）、补骨脂素（S3）和异补骨脂素（S4）对照品溶液，在“2.1”项色谱条件下重复进样6次，计算得出S1、S2、S3、S4峰面积RSD分别为0.54%、0.68%、0.94%、1.02%，表明该仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 取供试品（批号2003001W）6份，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按照“2.1”进行测定，测得S1、S2、S3、S4含有量RSD分别为1.54%、1.62%、0.84%、1.95%，表明该方法重复性良好。

2.7 稳定性试验 取同一供试品（批号2003001W）溶液，在“2.1”项色谱条件下于0、2、4、6、8h、10h测定，测得S1、S2、S3、S4峰面积RSD分别为1.11%、2.23%、0.58%、1.07%，表明溶液在10h内稳定性良好。

表2 4种成分回收率试验结果（n=2）

Table 2 Test results of recoveries of four components (n = 2)

2.8 加样回收率试验 精密称取约0.05g含有量已知的样品（批号2003001W）6份，分成3组，每组分别按50%、100%、150%水平加入各对照品，进样测定，计算回收率，结果见表2。

2.9 样品含有量测定 取样品适量，按照供试品溶液制备方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，进样测定，分别计算供试品中各成分含量，结果见表3。

表3 样品四种成分含量测定结果（mg/g）

Table 3 Determination results of four components in the sample (mg/g)

3 讨论

补骨脂配方颗粒是临床使用较多的几种配方颗粒之一，市场需求量大，但目前各省市对中药饮片配方颗粒企业的批准和监管标准都不尽相同，因此对市售补骨脂配方颗粒含量进行研究具有比较重要的意义。本研究发现，在补骨脂配方颗粒中，补骨脂苷和异补骨脂苷含量高于补骨脂素和异补骨脂素的含量。现代研究表明补骨脂水提液中主要成分为补骨脂苷和异补骨脂苷，二者可在体内快速吸收，水解转化为补骨脂素和异补骨脂素。4批市售样品成分差异含量差异较大，原因可能是所用的补骨脂饮片来源不同和所用生产工艺不同。

参考文献：

[1]国家中医药管理局《中华本草》编委会. 中华本草[M]. 上海科学技术出版社, 1999:603-608.

[2]王淑云. 补骨脂的药理作用研究概况[J]. 时珍国医国药, 2006, 17(6):1081-1082.

[3]黄剑, 赵陆华. 补骨脂化学成分及药理研究进展[J]. 药学进展, 2000, 24(4):3.

[4]鲁亚奇, 张晓, 王金金,等. 补骨脂化学成分及药理作用研究进展[J]. 中国实验方剂学杂志, 2019, 25(3):10.

[5]孙源源, 施萍. 借助中药配方颗粒推进中药国际化的对策研究[J]. 中草药, 2013.

[6]赵睿榛. 中药配方颗粒国际化问题的有关思考[J]. 健康大视野, 2018, 000(024):256.

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[10]国家药典委员会. 中华人民共和国药典:2020年版一部[S].北京：中国医药科技出版社,2015:195

[作者简介] 闫伟亚，硕士，研究方向：中药检验检测，Email：yanwy_2013@163.com