介绍一种将鲍曼不动杆菌从变形杆菌迁徙生长的血平板上分离出单个菌落方法

介绍一种将鲍曼不动杆菌从变形杆菌迁徙生长的血平板上分离出单个菌落方法

邢乐文,郑立兵,马晓东,王德浩

（徐州仁慈医院检验科，江苏 徐州 221000）

摘要：目的：介绍一种将鲍曼不动杆菌从变形菌迁徙生长的血平板上分离出单个菌落的方法。方法：选取住院病人送检的痰标本作为研究样本，结合相关资料文献，对鲍曼不动杆菌进行分离单个菌落操作。观察平板生长情况。结果：经过实验后，发现使用氨曲南、阿莫西林、阿米卡星K-B药敏纸片可有效分离单个菌落。结论：为进一步提升分离效果，应对氨曲南、阿莫西林、阿米卡星K-B药敏纸片等药物进行联合运用。

关键词：鲍曼不动杆菌；变形杆菌；血平板；单个菌落；分离方法

A method of isolating a single colony of Acinetobacter baumannii from the blood plate of Proteus was introduced

Xing Lewen, Zheng libing, Ma Xiaodong, Wang Dehao

(Laboratory Department of Xuzhou benevolent hospital, Xuzhou, Jiangsu 221000)

Abstract: Objective: to introduce a method to isolate a single colony of Acinetobacter baumannii from the blood plate of Proteus. Methods: sputum samples from hospitalized patients were selected as research samples, and Acinetobacter baumannii was isolated from a single colony in combination with relevant documents. Observe the growth of the plate. Results: after the experiment, it was found that single colonies could be effectively separated by using aztreonam, amoxicillin and amikacin K-B drug sensitive paper. Conclusion: in order to further improve the separation effect, aztreonam, amoxicillin, amikacin K-B drug sensitive paper and other drugs should be combined.

Keywords: Acinetobacter baumannii; Proteus; Blood plate; Single colony; separation method

鲍曼不动杆菌是临床常见致病菌。2019年全国耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌检出率最高达78.6%[1]，我院重症病房检出率为92.5%[1]。来自病区痰、分泌物及其它标本，在细菌培养及鉴定过程中，常常遇到鲍曼不动杆菌和变形杆菌（多数为奇异变形杆菌）同时生长在血平板上，平板呈弥漫或波纹状薄膜布满整个培养基表面，这很难获得鲍曼不动杆菌单个菌落。对鲍曼不动杆菌感染的患者，尽早分离出单个菌落极为重要[2]。本文主要介绍痰标本培养分离单个菌落的方法。方法如下：

1标本来源与方法

标本来自住院病人送检的痰标本。收到标本，经涂片、染色、镜检，判断标本是否合格，初步掌握细菌分布情况。如镜检有大量革兰氏阴性球菌且不完全脱色，成簇、成片出现，且伴有大量白细胞或查见白细胞吞噬球菌，可疑似鲍曼不动杆菌感染。接种血平板、巧克力平板和沙保弱平板，培养18小时以上，观察平板生长情况。如血平板表面呈薄膜波纹状布满整个血平板，则挑取疑似菌落，涂片、染色、镜检。符合鲍曼不动杆菌菌体特征的进行下一步分离单个菌落操作。

方法①：取菌落四区划血平板，在二三区之间各贴一片阿莫西林、氨曲南药敏纸片，在三四区之间贴一片阿米卡星药敏纸片。方法②：制备0.5麦氏单位菌悬液，用5微升接种环取一环四区划血平板，贴上述药敏纸片。培养18小时以后，抑菌圈内即有单个菌落生长，涂片、染色、镜检，确认后做进一步鉴定和药敏试验。可根据该病区感控情况，如考虑可能为多重耐药菌，还可选择其它药敏纸片。

2  小结

奇异变形杆菌的大多数菌株以及少数普通变形杆菌均呈迁徙扩散生长现象，很多抗生素对此均具有抗菌活性，可抑制其迁徙生长，如氨曲南、阿米卡星、阿莫西林等。奇异变形杆菌对氨曲南敏感性为89%

[3]，对阿米卡星耐药率在3%左右[4]，对阿莫西林的敏感性未见报道。鲍曼不动杆菌对氨曲南的敏感性为8.2%[2]，对阿米卡星平均耐药率为27.4%[5] ，对阿莫西林天然耐药。如遇耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌，几乎对所有头孢类、碳青霉烯类、氨基糖苷类及喹诺酮类抗生素耐药。借此利用氨曲南、阿莫西林、阿米卡星K-B药敏纸片，予以分离单个菌落[6]。我们在工作中利用这一方法皆获得满意地结果。

麦康凯琼脂平板含有胆盐，往往能抑制变形杆菌迁徙生长。我们将上述疑似菌落接种到麦康凯琼脂平板，生长圆形、扁平、无色、半透明，其菌落大小、色泽没有明显区别，挑不出鲍曼不动杆菌单个菌落，有可能被抑制了生长[7]。本文制备0.5麦氏单位菌悬液，目的是为了待分离菌株均匀分布在悬液内，容易被分离出。其次是为了控制菌量，以便获得最佳效果。

本文查阅了奇异变形杆菌产ESBL，产ESBL率为16.5%[8] 。结合上述奇异变形杆菌对药物的敏感性，说明用其中一种药敏纸片未必能尽早分离出单个鲍曼不动杆菌菌落。所以，为提高时效性，本文采用3种不同药物联合应用，力求一次获得。

另外，氨曲南对金黄色葡萄球菌天然耐药，用同样方法也可以将其分离出单个菌落。

参考文献

[1] 全国细菌耐药监测网，2019年全国细菌耐药监测报告

[2] 齐慧敏，吕 媛，钱 霞。卫生部全国细菌耐药监测网2010年女性尿标本细菌耐药监测[J]。中国临床药理学杂志，2011；27（12）:913-918

[3] 全国细菌耐药监测网，全国细菌耐药监测网2014-2019年尿标本细菌耐药监测报告

[4] 胡付品，朱德妹，汪复，等。2016年中国CHlNET细菌耐药性监测[J]。中国感染与化疗杂志，2016,16（6）:685-694

[5] 柴媛,王俊瑞,朝鲁门其其格. 鲍曼不动杆菌外膜蛋白研究新进展[J]. 内蒙古医科大学学报,2020,42(2):205-209.

[6] 张环,徐笑红. 鲍曼不动杆菌碳青霉烯酶及流行分布研究[J]. 中国抗生素杂志,2020,45(9):855-860.

[7] 戴晓玥,吴亮,阴晴,等. 肺炎患者痰液分离鲍曼不动杆菌耐药基因分析[J]. 临床检验杂志,2020,38(1):60-65.

[8] 时文静,余甜,李可可,等. ε-聚赖氨酸对鲍曼不动杆菌生长及生物膜形成的影响[J]. 中国抗生素杂志,2020,45(1):73-77.