乙醇消毒凝胶中乙醇的含量测定方法（GC-FID法）验证

乙醇消毒凝胶中乙醇的含量测定方法（GC-FID法）验证

黄筱婷,杜翠梅,杨晓燕,熊燕飞

云南白药集团股份有限公司 云南昆明 650500

摘要：用气相色谱法测定乙醇消毒凝胶中乙醇含量，对测定方法进行验证。本文通过GC-FID法进行测定，对乙醇消毒凝胶乙醇量的测定方法进行系统适用性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系与线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）的验证，确保检验方法对被检物质有足够的专属性和灵敏度，通过重复性试验和回收率试验验证检验过程的回收率和重现性，并确定乙醇的线性范围、定量限，用以确定GC-FID法在本实验室的适用性及可控性。

关键词：乙醇量；GC-FID法；方法验证

1．仪器与材料

1.1 样品：乙醇消毒凝胶1批。

1.2 方法选择：按照GBT26373-2020-《醇类消毒剂卫生要求》附录A；《消毒技术规范》2002年版，用气相色谱法测定乙醇消毒凝胶中乙醇的含量方法。

1.3 仪器及试药: 气相色谱仪为Agilent 7890B（FID检测器）。色谱柱为ateo GDX-102（2m）填充柱。试剂为超纯水（自制），使用前经0.45μm滤膜滤过后使用；乙醇对照品为色谱级，德国默克，K52028527003。天平为赛多利斯电子天平（BSA224S-CW）（0.1mg /0.01mg）。

2．验证内容

试验方法：依据GBT26373-2020-《醇类消毒剂卫生要求》附录A；《消毒技术规范》2002年版，具体内容如下：

2.1系统适用性试验:照气相色谱法（通则0512）测定。

色谱条件：2.0m*4mm 玻璃柱；固定相：GDX 102 0.2mm～0.3mm（60目～80目）；柱温：程序升温，初始温度150℃，保持1.5分钟，以每分钟105℃的速率升温至220℃，保持4分钟；进样口温度和检测器温度230℃；载气（N2）流速10ml/min；氢气流速45ml/min；空气流速450ml/min。

对照品溶液的制备：取乙醇，用水稀释制成浓度为0.3%的对照品溶液，即得。

乙醇标准系列溶液的制备：取乙醇，用水稀释制成浓度为分别为0.1%、0.2%、0.3%、0.5%、1.0%、2.0%的标准系列溶液，即得。

供试品溶液的制备：称取样品约0.3g，精密称定，置100mL容量瓶中，加入水定容至刻度，摇匀，即得。

测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入色谱仪，测定，即得。

测试结果：对照品的保留时间、峰面积、理论塔板数依次为2.562、23143.395、3267，供试品的保留时间、峰面积、理论塔板数依次为2.570、19037.240、2495，供试品和对照品保留时间一致，理论板数满足要求，说明系统适用性符合规定。

2.2精密度试验

分别精密吸取浓度为0.3%的乙醇对照品溶液各1μl，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值。各次测得的峰面积值分别是23143.395 ，22963.387 ，22482.146，22665.301 ，22173.553 ，23322.469 ，平均值为22791.709，相对标准偏差RSD为1.89%。相对标准偏差小于2.0%，说明仪器精密度良好。

2.3线性关系与线性范围考察

精密量取按上述对照品溶液制备方法制备乙醇对照品标准序列溶液，分别按照0.1ml→100ml、0.2ml→100ml、0.3ml→100ml、 0.5ml→100ml、1.0ml→100ml、2.0ml→100ml将溶液稀释制备成6个浓度的对照品溶液。分别取上述6个浓度的对照品溶液1μl注入气相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积；以峰面积为纵坐标，以乙醇进样量（μg）为横坐标作线性回归，绘制标准曲线。得乙醇线性回归方程y=7E+06x+30.66（R² = 1）。

测定结果：乙醇在浓度0.1%～2.0%范围内得到线性回归方程y = 7E+06x + 30.66（R² = 1），相关系数大于0.999，说明在该范围内乙醇线性关系良好。

2.4检测限的确定

    根据GBT26373-2020-《醇类消毒剂卫生要求》附录A；《消毒技术规范》2002年版所述，乙醇检出限为0.03%，按照此检出限进行换算，得乙醇稀释后浓度为0.00009%，，精密量取 1μl注入气相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，测其信噪比为3.0，满足要求，因此该方法中的检出限与仪器检出限所推到得到的乙醇检出限一致，均为0.03%。

2.5定量限的确定

取浓度为0.00015%的乙醇对照品溶液，精密量取 1μl注入气相色谱仪，按上述色谱条件进样，测得信噪比为10.1，信噪比大于10:1，说明仪器的定量浓度为0.00015%，定量限为0.005%。

2.6重复性试验

取1批免洗手乙醇消毒凝胶（批号：JKXH02），取供试品6份，样品称样量依次为0.3062、0.3183、0.3045、0.3082、0.3181、0.3026，依法测定。同时，取乙醇对照品溶液同法测定，分别计算出乙醇含量。（对照品浓度为0.21882%，对照品平均峰面积为6996.5）。测定结果：6份样品的含量依次为75.471%、76.803%、74.418%、76.017%、75.492%、75.709%，相对标准偏差为1.03%，小于2.0%，说明本方法在本实验室内重复性好。

2.7加样回收率试验（准确度试验）

采取全程加样法。取9份已知含量的乙醇消毒凝胶（云南白药集团股份有限公司生产）1.5g，乙醇的含量分别按照80%、100%、120%浓度精密添加乙醇对照品适量，按含量测定方法测定，同时取乙醇对照品溶液，依法测定，并计算出乙醇的含量。以下式计算回收率(对照品浓度为2.0%，按下式计算出实测值)。

回收率＝×100%

试验结果：回收率在98.0%～101.0%的范围内，平均回收率为99.6%（RSD=1.1%）。结果较满意，表明本法适用于本实验室。

3.结论

通过对GBT26373-2020-《醇类消毒剂卫生要求》附录A；《消毒技术规范》2002年版，“乙醇消毒凝胶”【含量测定】方法进行系统适用性试验、精密度试验、定量限、线性关系与线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验），各项试验测试结果均能满足要求，仪器性能稳定，质控结果满意。

从以上数据可以看出用该方法检测乙醇消毒凝胶中乙醇的含量，结果准确可靠，可以在本实验室运用此方法检测乙醇消毒凝胶中乙醇的含量。

参考文献：

【1】GBT26373-2020-《醇类消毒剂卫生要求》附录A

【2】《消毒技术规范》2002年版