高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量

高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量

于志华

 河北长天药业有限公司  071000

摘要：

目的建立小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量的高效液相色谱法的检测方法，分析条件为：流速1.0ml/min，流动相：乙腈-0.3%十二烷基硫酸钠溶液-磷酸（70:30:0.02）（用三乙胺调节PH值至3.3±0.1），柱温30℃，检测波长为210nm，进样量为20μl，色谱柱Agilent SB-C18（4.6*150mm，5μm），实验结果为：马来酸氯苯那敏在0.010~50μg/ml浓度范围内线性关系良好（r=0.9993），平均回收率为99.5%，RSD为0.53%（n=9），溶液稳定性、精密度、耐用性试验含量的RSD均小于2.0%。结论：高效液相色谱法[1] [2]简便准确，专属性强，重复性好，适用于小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量的检测。

关键词：高效液相色谱法，含量测定，小儿氨酚黄那敏颗粒，马来酸氯苯那敏

一、试验方法

流动相：乙腈-0.3%十二烷基硫酸钠溶液-磷酸（70:30:0.02）（用三乙胺调节PH值至3.3±0.1）；流速：1.0ml/min；波长：210nm；柱温：30℃；进样量：20μl；

色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂（C18,150*4.6mm，5μm）；

溶剂：0.3%十二烷基硫酸钠溶液

含量对照品溶液（20μg/ml）：取对照品10mg，精密称定，置50ml量瓶，用乙腈溶解，定容，摇匀，精密量取该溶液1ml置10ml量瓶中，加0.3%十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻线，摇匀即得。

供试品溶液：取装量差异项下的内容物，研细，精密称取适量（约相当于马来酸氯苯那敏1mg）置具塞锥形瓶中，精密加乙腈25ml振摇超声使溶解，过滤，精密量取续滤液1ml，置10容量瓶中，加0.3%十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻线，摇匀，作为供试品溶液。

二、结果

2.1专属性

溶液配制过程：按照上述溶液配制步骤配制溶剂，空白辅料及对照品溶液，精密量取上述各溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明溶剂及空白辅料均不干扰马来酸氯苯那敏含量检测。

2.2进样精密度

溶液配制：按照上述溶液配制步骤配制对照品溶液，精密量取对照品溶液20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明同一溶液连续进样6次，峰面积RSD为0.36%小于1.0%，保留时间RSD为0.11%小于1.0%，表明仪器进样精密度良好。

2.3溶液稳定性

溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置对照品与供试品溶液，分别在室温下0h，4h，8h，12h，24h，48h进样，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明对照品溶液、供试品溶液室温下48h内相对于0h的峰面积变化值均小于2.0%，对照品溶液、供试品溶液室温下48h内稳定性良好。

2.4滤膜吸附性

溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置对照品与供试品溶液，分别采取未过滤，经0.45μm滤膜过滤，弃去初滤液0.5ml、1ml及2ml，去续滤液，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明弃去0.5ml、1ml及2ml均不干扰样品检测，因此，本品含量供试品溶液采用0.45μm滤膜过滤弃去2ml。

2.5准确度

溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置空辅及对照品溶液。

回收率溶液：取空白辅料3.9999g置具塞锥形瓶中，分别精密称取马来酸氯苯那敏对照品10mg、12.5mg、15mg，精密加乙腈25ml振摇使溶解，用干燥滤纸过滤，精密量取续滤液1ml，置10容量瓶中，加0.3%十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻度，摇匀。回收率80%、100%、120%溶液各平行配制3份。精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明马来酸氯苯那敏平均回收率（n=9）为99.5%，RSD为0.53%。

2.6线性

线性贮备液：取对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，用乙醇溶解并用水稀释至刻线，摇匀即得，作为线性贮备液。分别精密量取线性贮备液3.0ml、4.0ml、5.0ml、6ml、7ml分别置50ml量瓶中，用0.3%十二烷基硫酸钠溶液稀释至刻线，摇匀，精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以马来酸氯苯那敏峰面积为纵坐标，以马来酸氯苯那敏浓度为横坐标，绘制标准曲线，结果表明马来酸氯苯那敏浓度在0.010~50μg/ml范围内，线性方程为y=0.3465x+0.0162，R为0.9993（n=6），线性关系良好。

2.7精密度

溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置空辅、对照品、供试品溶液平行配置6份。精密量取20μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果表明马来酸氯苯那敏含量的RSD0.68%（n=6），精密称取同一批号样品6份，在另外一台高效液相色谱仪上检测，马来酸氯苯那敏含量的RSD为1.56%（n=12），说明精密度良好。

2.8耐用性

溶液配制：按照上述溶液配制步骤配置空辅、对照品、供试品溶液。分别在流速±0.1ml/min，柱温±5℃，有机相比例变化±2%，波长±5nm，PH值±0.1，相同品牌不同批号色谱柱，不同品牌色谱柱，在各色谱条件下，分别精密量取上述溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，各条件下空白溶剂及空辅溶液均不干扰样品检测，马来酸氯苯那敏含量与原条件的RD均小于2%，符合可接受标准，方法的耐用性良好，适合马来酸氯苯那敏含量检测。

[参考文献]

[1]2020版《中国药典》第四部通则0512高效液相色谱法。

[2]2020版《中国药典》第四部指导原则9101分析方法验证指导原则。

[3]HPLC法测定含体外培育牛黄的小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏的含量.中国药品标准. 2019,20(01),程岁寒、张双庆等。

[4]高效液相色谱法测定小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏含量及均匀度.安徽医药. 2016,20(08),曹玉明。

[5]小儿氨酚黄那敏颗粒中马来酸氯苯那敏的含量测定及制剂检查.黑龙江医药. 2013,26(06)，王卓艺、付俊美、奚俊杰、刘雪筠。

[6]HPLC法同时测定小儿氨酚黄那敏颗粒中对乙酰氨基酚和马来酸氯苯那敏的含量.天津药学. 2010,22(03),于和、孙燕燕、李惠芬。