摘要目的探讨微小RNA-519d-3p(miR-519d-3p)在结直肠癌(CRC)中的表达及对增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法体外培养人结直肠癌细胞系和人正常结肠上皮细胞。将miR-519d-3p模拟物(mimic)分别转染于RKO及SW620，同时设置mimic阴性对照(mimic NC)。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-519d-3p表达及DCAF4L2 mRNA表达水平。细胞计数试剂盒(CCK-8)和平板克隆实验检测细胞增殖活性。划痕愈合实验、Transwell迁移和侵袭实验检测细胞迁移及侵袭能力。蛋白质印迹法(Western blot)检测DCAF4L2蛋白表达水平。符合正态分布的计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用两样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析。结果miR-519d-3p在人结直肠癌细胞系中显著下降，其中RKO和SW620表达倍数明显低于NCM460[RKO：(0.311±0.165)倍比1.000倍，t＝7.783，P<0.05；SW620：(0.354±0.079)倍比1.000倍，t＝15.72，P<0.01]，差异有统计学意义。成功转染mimic过表达miR-519d-3p，过表达组表达倍数高于对照组 [RKO：(2.913±0.602)倍比1.000倍，t＝5.409，P<0.01；SW620：(3.194±0.427)倍比1.000倍，t＝8.765，P<0.001]，差异有统计学意义。通过生物学功能实验证实miR-519d-3p表达升高能显著抑制CRC细胞的增殖、迁移和侵袭能力。CCK-8检测结果示，过表达组24、48、72、96 h细胞吸光度值低于对照组(RKO：0.248±0.018比0.184±0.012、0.388±0.007比0.277±0.010、0.658±0.033比0.496±0.008、0.877±0.020比0.681±0.021，t＝3.064，P<0.01；SW620：0.213±0.018比0.181±0.050、0.375±0.008比0.274±0.014、0.720±0.009比0.482±0.006、0.978±0.115比0.721±0.032，t＝2.432，P<0.01)，差异有统计学意义。过表达组平板克隆集落形成个数显著低于对照组[RKO：(262.300±11.320)个比(181.700±2.333)个，t＝7.127，P<0.05；SW620：(448.000±33.260)个比(190.300±7.446)个，t＝9.387，P<0.05]，差异有统计学意义。过表达组划痕愈合率低于对照组[RKO：(39.040±0.812)%比(8.979±0.846)%，t＝394.900，P<0.01；SW620：(28.840±0.848)%比(5.576±1.435)%，t＝21.350，P<0.01]，差异有统计学意义。Transwell迁移和侵袭实验中过表达组穿透微孔膜的细胞个数明显低于对照组，迁移实验[RKO：(196.700±6.360)个比(93.330±4.096)个，t＝44.290，P<0.01；SW620：(198.300±4.485)个比(101.300±1.764)个，t＝16.090，P<0.01]，差异有统计学意义；侵袭实验[RKO：(274.700±3.844)个比(85.670±2.728)个，t＝33.950，P<0.01；SW620：(263.300±6.566)个比(70.330±4.256)个，t＝50.980，P<0.01]，差异有统计学意义。在线预测软件(miRWalk、StarBase 2.0和TCGA)预测，并通过qRT-PCR及Western blot验证结果显示，DCAF4L2作为miR-519d-3p靶基因调控CRC，过表达组DCAF4L2的mRNA表达及蛋白表达倍数明显低于对照组，mRNA表达倍数[RKO：(0.170±0.050)倍比1.000倍，t＝18.400，P<0.01; SW620：(0.256±0.069)倍比1.000倍，t＝26.800，P<0.01]，差异有统计学意义；蛋白倍数[RKO：(45.504±6.076)%比100.000%，t＝15.540，P<0.01；SW620：(43.567±3.760)%比100.000%，t＝26.000，P<0.01]，差异有统计学意义。结论结直肠癌细胞中miR-519d-3p表达显著下降，并通过调控DCAF4L2表达抑制结直肠癌增殖、迁移及侵袭能力。
