紫外分光光度法检测银黄口服液中绿原酸含量及特征的可行性

紫外分光光度法检测银黄口服液中绿原酸含量及特征的可行性

韦俏娜 

广西大学行健文理学院 南宁市 530005 

摘要：利用紫外分光光度法，在波长为327nm处，绿原酸浓度为2~28umol/L时，线性关系良好，回归方程为：C=0.0091A+0.0023，R2=0.9997（n=5）。平均加样回收率99.4%，RSD为0.20%，精密度为0.81%（n=5）。通过样品浓度检测试验得出，银黄口服液样品中绿原酸含量为2.121、2.123、2.121g/L，RDS为0.04%。该方法重复性好，灵敏度高，偏差较小，实验条件容易控制，简单方便，可用于检测金银花及其试剂银黄口服液中绿原酸的含量及特性。

关键词： 金银花  绿原酸  紫外分光光度计   精密度

银黄口服液由金银花和黄岑精制而成。主要功能为清热解毒、消炎，主治上呼吸道感染，急性扁挑体炎、咽炎等。绿原酸是银黄口服液中金银花的主要药效成分[1]。

目前，测定银黄口服液中绿原酸的花量多采用紫外分化光度法（UV）、高效液相色谱法（HPLC）和高效毛细电泳技术[2-4]。本文采用紫外分光光度法对银黄口服液中绿原酸的含量进行测定。以绿原酸标准品绘制出标准工作曲线，得出线性良好的线性回归方程。并通过精密度实验、稳定性实验、重复性实验、加样回收率实验、浓度检测等一系列方法验证，来研究该方法检测分析银黄口服液中的绿原酸含量是否可行，方法是否可靠。

1实验仪器与试剂

紫外分光光度仪（Spectrum 722型可见分光光度计），MP5002型电子天平，高速万能粉碎机。

95%乙醇溶液，绿原酸标准品（上海金穗实验公司），银黄口服液（提取物）（佛山友诺动物药业有限公司）。

2实验方法与设计

2.1 供试溶液的制备

绿原酸标准溶液的制备   精密量取绿原酸标准品20mg并将其与56.4mL，95%乙醇溶液充分混合，制得1umol/mL的绿原酸标准品溶液。

绿原酸对照品溶液的制备  分别做两种不同浓度梯度：0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8（mL）与0.09、0.12、0.16、0.20、0.24、0.28、0.32、0.36（mL）的对照品供试液，以验证方法的可靠性，并取其中浓度范围较广的试验数据制成绿原酸标准曲线。

银黄口服液供试液的制备  精密量取银黄口服液1mL，置于50mL棕色容量瓶中，加95%乙醇稀释定容至刻度，摇匀，待用。

2.2检测波长的确定  将配制好的2.4umol/L的绿原酸对照品溶液，以95%乙醇溶液为空白在紫外分光光度计的波长范围内扫描，并测得其吸光度最高的最大波长。

2.3 绿原酸标准工作曲线的建立  以95%乙醇为空白，将上述配制好的第一组绿原酸对照品供试液，在波长327nm条件下分别测定其吸光值。同样将上述配制好的第二组绿原酸对照品供试液，在波长327nm条件下分别测定其吸光值。

2.4精密度试验  取第一组对照品中浓度为4umol/L的供试液，重复测定其吸光值5次，并求出其结果的相对标准偏差值（RSD）。

2.5 稳定性试验  取同一对照品供试液浓度为（24umol/L），分别在0h、2h、4h、8h、16h测定其吸光值，并求出其结果的相对标准偏差值（RSD）。

2.6 重复性试验  精密量取银黄口服液1mL，置于50mL棕色容量瓶中，加95%乙醇稀释定容至刻度，摇匀。按上述操作配制五份相同溶液，同前操作，测定吸光值，并求出其结果的相对标准偏差值（RSD）。

2.7 加样回收率测定试验  加样回收率考察的是经过样品处理后分析的药物的比例。因为不论是生物基质还是制剂辅料中的药物经过样品处理都有一定的损失。回收率主要考察准确度，准确度系指用该方法测定的结果与真实值或认可的参考值之间接近的程度，有时也称真实度。一定的准确度为定量测定的必要条件，因此涉及到定量检测的检测项目均需要验证准确度，如含量测定、杂质定量试验等。

取3个干燥的50mL棕色容量瓶，分别精密量取1mL已知浓度的银黄口服液，置于该棕色瓶容量中。再向其中分别加入精密量取的绿原酸标准溶液1mL、2mL、3mL，加95%乙醇稀释定容至刻度，摇匀，制成供试液待用。用紫外分光光度法测定吸光值，求出绿原酸含量，根据回收率公式计算出回收率，重复3次。

回收率公式：R={[（C1+C2）-C1]/C2}*100%

C1：测出银黄口服液的溶度

C2：测出绿原酸标准品的溶度

3 实验结果与结论

3.1 实验波长的检测结果  当波长处于327nm处时，该绿原酸溶液有最大吸光值。故确定波长为327nm处为本次试验的最适宜波长。

3.2 标准工作曲线的绘制结果  在浓度为2~28umol/mL的条件下的绿原酸标准工作曲线具有良好的线性关系，本次实验所需的标准方程：C=0.0091A+0.0023，R2=0.9997（n=5）

3.3 精密度实验结果  测量结果表明用紫外分光光度法测定绿原酸含量，相对标准偏差较小，说明结果重现性好，精密度较高，所得数据精准。

3.4 稳定性实验结果  测量结果表明供试溶液在16小时内吸收度较为稳定。

3.5 重复性实验结果  测定结果为RDS=0.12%（n=5）。

3.6 加样回收率测定实验结果  本方法的平均回收率为99.4%,相对标准偏差为0.20%（n=3）。

3.7 样品检测实验结果

精密量取银黄口服液1mL，置于50mL棕色容量瓶中，加95%乙醇稀释定容至刻度，摇匀，待用。

将上述配制好的银黄口服液平均取三份，分别置于波长为237nm的分光光度计下，检测其吸光值，并带入标准工作曲线中C=0.0091A+0.0023，R2=0.9997（n=5），计算出其含量，结果可知，通过本次实验使用紫外分光光度法检测绿原酸含量，最终检测出银黄口服液中含量为2.121、2.123、2.121g/L，RDS为0.04%。

3.8 结论

根据实验所得到的工作标准曲线，通过加样回收率测定实验和样品检测试验，计算得出该样品的回收率，以及银黄口服液中绿原酸的含量。结果表明，该样品的加样回收率为99.4%、相对标准偏差RSD为0.20%。银黄口服液中绿原酸含量为2.121、2.123、2.121 g/L ，相对标准偏差RSD为0.04%，实验结果表明，其RSD≤1%，回收率在98-102%之间。说明该方法重复性好，灵敏度高，操作简便，可用于一般常规性实验室检测绿原酸的含量。

参考文献

[1]  国家药典委员会.中华人民共和国药典（2005 版第一部）[M] .北京：化学工业出版社.2005:152-153.

[2］ 王丽萍，郭栋，王果，等．中药绿原酸的研究进展[J] .时珍国医国药，2011，22( 4) : 961-963．

[3]  梅林.高效液相色谱法测定银黄口服液中绿原酸的含量[J] .中国药业.2007,16.

[4]  易昌华，贺建华.紫外分光光度法测定中草药提取物中绿原酸含量[J] .兽药与饲料添加剂.2004年第9卷第1期.