FSHB基因多态性（rs11031006）与多囊卵巢综合征的相关性研究

FSHB基因多态性（rs11031006）与多囊卵巢综合征的相关性研究

李玉萍

江门市妇幼保健院 广东 江门 529400

摘要

目的：研究FSHB基因rs11031006位点与多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）的关系。方法：选择2019年4月—2021年3月江门市妇幼保健院确诊的PCOS 患者76例为研究组，82例体检正常者为健康对照组。采集研究对象的外周血、提取基因组DNA并通过探针熔解曲线检测，得到两研究组FSHB基因rs11031006位点基因型分布情况及基因频率。结果：通过分析PCOS组和健康对照组的FSHB rs11031006位点基因型与基因频率，发现二者差异无统计学意义。结论：FSHB基因rs11031006位点多态性与PCOS 发生可能不存在相关性。

关键词：多囊卵巢综合征；FSHB基因；rs11031006多态性位点；探针熔解曲线

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是常见的妇女生殖内分泌代谢疾病，其发病率约为5.61%[1]。该病患者临床表现主要为多毛、月经失调、卵巢多囊样改变，或伴有胰岛素抵抗、肥胖等症状[2]。该病的致病原因尚不明确，但越来越多的证据显示PCOS发病具有显著的家族性聚集[3]，因而遗传因素可能在PCOS发病中扮演了重要的角色。卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）是糖蛋白促性腺激素，其参与合成的雄激素增高是PCOS的主要临床表现[4-5]。全基因组关联分析发现，构成FSH的具有生物活性功能的亚单位的β亚基（follicle-stimulating hormone β polypeptide，FSHB）基因rs11031006多态性位点与PCOS发病相关[6]。因此，本研究通过检测PCOS患者FSHB rs11031006多态性位点，进一步分析该位点与PCOS发生的相关性，以更多的了解PCOS的发病机制，为临床诊疗提供参考依据。

1对象与方法

1.1 研究对象

选取就诊于江门市妇幼保健院妇科门诊的PCOS患者76例作为研究组，诊断方法参照2003年鹿特丹诊断标准，符合一下三条特征中的两条：：1、稀发排卵或无排卵；2、高雄激素的临床表现和（或）高雄激素血症；3、超声表现为卵巢多囊样改变（一侧或双侧卵巢有12个以上直径为2-9mm的卵泡，和/或卵巢体积大于10ml）。再选取有规律月经周期，排除高雄激素血症的临床及生化表征及B超下卵巢有多囊样改变的健康妇女82例作为健康对照组。本研究经江门市妇幼保健院伦理委员会审批，所有患者均知情同意本研究。

1.2 主要仪器及试剂

实时荧光定量PCR仪SLAN-96S（上海宏石）、Lab-Aid 824全自动核酸提取仪及配套核酸提取Mini试剂(厦门致善)、NanoDrop2000超微量紫外分光光度计（美国Thermo公司）、Takara DNA聚合酶（北京宝生物公司）。

1.3方法

1.3.1血液基因组DNA提取

采集PCOS患者和健康对照者的EDTA抗凝静脉血2 ml，基因组DNA提取根据Lab-Aid 824全自动核酸提取仪及配套核酸提取Mini试剂说明书进行操作。基因组DNA提取完成后，使用NanoDrop2000超微量紫外分光光度计测定其浓度及纯度，并置于-20℃冰箱保存待用。

1.3.2引物和探针的设计

使用NCBI网站（https://www.ncbi.nlm.nih.gov）搜索FSHB rs11031006位点，然后根据探针熔解曲线的原理，使用Primer 5.0软件设计引物，使用Oligo 7.0设计探针，见表1。所有的寡核苷酸均由上海生工生物技术有限公司合成和纯化。

表1 FSHB rs11031006位点引物及探针

1.3.3探针熔解曲线检测

PCR反应总体积为25 μL，包括：10✖️PCR Buffer、MgCl2、正反向引物、探针、DNA聚合酶以及基因组DNA。PCR反应程序：95℃ 2 min，1个循环；95℃变性15 s，60℃退火15s（-0.5◦C/循环），72℃变性20 s，10个循环；95℃变性15 s，55℃退火15s（收集荧光信号），72℃延伸20 s，40个循环；变性95℃变性3 min，37℃杂交2 min，以0.06℃/s的升温速率从37℃上升到80℃（收集荧光信号）。SLAN-96S实时PCR系统软件根据荧光随温度（-dF/dT）与温度变化的负导数求导，得到了熔解曲线和荧光熔解峰，并自动生成具有熔解温度（Tm）值的图形输出。

1.4 统计分析

采用SPSS 19.0分析数据，计量资料以平均数±标准差表示，采用t检验。技术资料采用χ2检验，P<0.05表示数据差异有统计学意义。

2 结果

2.1 病例组与对照组的一般情况

我们共收集到对照组82例，平均年龄为(31.24±7.21)岁。PCOS组共76例，平均年龄为(29.35±4.2)岁，最小20岁，最大36岁。体重指数平均(23.4±4．50)kg／m2，月经周期最短15天，最长2年。

2.2 FSHB rs11031006位点基因型判断

根据SLAN-96S实时PCR系统软件自动生成的熔解曲线峰和Tm值进行基因型判断，标准如下：1、当熔解曲线只有一个峰且Tm值为54±1°C，则基因型为AA；2、当熔解曲线只有一个峰且Tm值为61±1°C，则基因型为GG；3、熔解曲线有两个峰且Tm值为54±1/61±1°C，则基因型为GA，见图1。

图1 rs11031006多态性位点基因型与熔解曲线峰对应的检测结果

2.3 FSHB rs11031006位点基因型分布与基因频率分析

PCOS 组76例患者中，FSHB基因rs11031006位点69 例（90.8%）为基因型GG；6例（7.9%）为基因型GA；1例（1.3%）为基因型AA。对照组82例正常者中，75例（91.5%）为基因型GG；7例（8.5%） 为基因型GA；0例为基因型AA。两组基因型分布及基因型频率差异没有统计学意义（P>0.05），见表2。

表2 rs11031006多态性位点基因型分布和基因频率相关统计分析

3 讨论

PCOS的临床症状众多，而高雄激素作为其判断标准之一，说明该症状在PCOS患者中是较为普遍存在的。FSH作为促性腺激素，对于雄性激素转化为雌激素起到了非常重要的作用[7]。由此可见，该基因可能与PCOS发病存在相关性。因而，作为FSH亚基单位的FSHB基因，同样的可能是导致PCOS发病的重要基因，所以该基因一直都是PCOS致病机理研究的候选基因。但目前关于FSHB基因多态性的研究不多，比如针对rs10835638、rs11031010多态性位点的少部分研究[5, 8-9]，因此缺乏足够、充分的数据支持FSHB与PCOS发病的相关性。根据欧洲人PCOS全基因组关联分析发现的易感位点FSHB rs11031006[6]，韩国的研究人员在韩国PCOS患者的研究中得到了验证，表明该位点与PCOS的发生存在相关性[10]。但目前尚未有报道FSHB rs11031006多态性位点与中国人PCOS发病的相关性研究。因而，本研究通过探针熔解曲线技术检测了76例PCOS病例组和82例健康对照组，并计算rs11031006多态性位点基因型分布和基因频率。但是，进一步的t检验分析发现两组之间没有显著性差异，这与欧洲人、韩国人对该位点与PCOS发病相关性的研究结果不一致。我们推测导致这种情况主要可能存在两种原因：第一，种族不同导致结果不同；第二：标本量少，造成检测偏差（可能性更大）。因而，需要通过加大标本量进一步检测，以得到足够多的数据去分析中国人PCOS患者发病与FSHB rs11031006位点的相关性。总而言之，该研究发现FSHB rs11031006多态性位点与PCOS的发生可能不存在相关性。

参考文献

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[9]李鹏, 赵学科, 邱慧玲. FSHB启动子基因多态性与多囊卵巢综合征的相关性研究[J]. 国际医药卫生导报, 2016, 22(14):5.

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