梅毒检测的实验应用体会

摘要：目的 对检测梅毒的确证实验明胶凝集试验（ＴＰＰＡ）的结果易造成假阴性的实验比对分析。方法　收集本院２０１８年3月至 2018年８月6个月４３２０份检测梅毒抗体的标本中，１２２份化学发光值高出正常范围的标本进行确证实验：明胶凝集试验（ＴＰＰＡ），将不能明确判断结果的标本分组进行酶法（ＥＬＩＳＡ法）、胶体金法实验比对。Ａ组：７８人抗ＴＰ≥10S/CO，B组：44人抗TP酶法（ＥＬＩＳＡ法）阳性率100%（P0.05),胶体金法阳性率84.1%(P>0.05),TPPA法阳性率68.2%。结论 梅毒化学发光法检测超出正常值的结果,筛选出的标本做TPPA试验并不能达到确证结果，有必要再进行酶法（ELISA法），为确保检测质量，避免出现假阴性结果，本着临床早发现早治疗r的原则，更好的发挥检验科辅助临床医生快速高效诊治工作。关键词：梅毒抗体 化学发光法 明胶凝集试验（TPPA） 酶法（ELISA） 胶体金法 假阴性   　　梅毒是皮肤性病科属疾病，与感染者黏膜病损和体液接触均可导致病毒感染，一期表现为斑疹、溃疡，RPR血清试验与TPPA抗体检测目前广泛应用于临床诊断与治疗方案的制定，分期用药方案会有区分，但RPR转化为非反应性（阴性）是目前临床康复判断依据。    梅毒检测已经成为临床综合性医院的常见检验项目，用人单位对新人入职体检、无偿献血者体检、参军入伍的体检、婚检等都要做梅毒抗体检测的，梅毒检测结果关系个人隐私，确保检验结果的准确度是检验科的宗旨。    随着现代化科技进步，全自动分析仪已走进医院各个科室，满足了前来就诊和健康体检的人们快速能完成检查并能很快得到检查结果的需求，也提高了临床医生尽快尽早医治病患的诊治效率，临床中诊断梅毒主要采取血清学检测，常用的检测方法是化学发光免疫分析法、酶法（ELISA法）和明胶凝集TPPA试验法，均具有较高的敏感性，但在实际工作中易出现假阴性、假阳性的情况，给临床工作带来较大影响，为有效提高梅毒检验结果的准确性，本人对工作中对于梅毒阳性标本的酶法和明胶凝集法TPPA试验的对比进行探讨。1、资料与方法：1.1一般资料：收集本院2018年3月初至2018年8月末6个月4320份检测梅毒抗体的标本作为研究对象，其中有男性1440人，女性：2880人。1.2仪器：    深圳爱康全自动酶免仪、旋转仪、澳鑫脱帽离心机、全自动化学发光免疫分析仪i30001.3试剂：科华生物有限公司的梅毒抗体酶联免疫吸附试验法检测试剂盒、英科新创生物有限公司的梅毒抗体胶体金法检测试剂盒、四川迈克生物有限公司的化学发光法梅毒抗体检测试剂盒。1.4方法与检测：     对进行梅毒检测的4320份标本，化学发光法检测出122份抗-TP化学发光值高出正常范围进行具体酶法、胶体金法、明胶凝集试验TPPA实验比对。按标准操作规程：标本血清分离，3000转/分钟，离心15分钟，确定血清达到上机检测标准，将梅毒抗体结果大于正常值的标本，继续做RPR试验和TPPA试验。通过TPPA试验结果确证该标本梅毒阳性，确诊梅毒患者；TPPA结果阴性，考虑化学发光值的假阳性存在可能。RPR结果阴性结合TPPA阳性，说明是既往梅毒患者；RPR结果阳性结合TPPA阳性，说明是现症梅毒，正是梅毒螺旋体和非梅毒螺旋体感染活动期。2、结果：     将122份化学发光值高出正常值的梅毒“阳”性标本，进行酶法（ELISA法）、胶体金法、明胶凝集法试验TPPA三种实验研究。采用不同结果分组：A组78人抗-TP≥10S/CO，B组44人,同样将两组标本进行了酶法、胶体金标、TPPA明胶凝集试验。阳性符合率A酶法100%，胶体金标100%，TPPA93.6%；B酶法90.9%，胶体金标84.1%,TPPA68.2%。详见附表1。3、讨论：在TPPA检测化学发光值高的标本时，曾多次遇到结果并不明确的现象：这种TPPA结果评目测判断是否出现分散或聚集，对于一些看似凝集的“阴”性标本，继续做酶法（ELISA法）梅毒螺旋体抗体检测，结果是阳性。基于TPPA检测方法的干扰因素多[1]：1.试验操作产生的偶然误差：重复使用的U型板在清洗时，用硬质刷导致内孔划痕较多，阴性样本的致敏粒子不能正常沉淀而看上去像凝集图像、静置过程中意外震动（导致沉淀粒子散开）。2.因为样本个体之间的差异，部分患有其他疾病的患者可能会产生与致敏粒子包被的抗原产生非特异性反应的因子，造成异常结果。根据文献中对于异常结果分析，可能会造成异常结果的疾病是：自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮、盘状红斑狼疮、药物诱发的红斑狼疮类、风湿性关节炎、混合结缔组织病、自身免疫性溶血性贫血等）、肿瘤（淋巴肉瘤、脑膜瘤、结肠癌）、皮肤病（皮肤相关的螺旋体引起）生殖器疱疹、麻风、热性病、莱姆病、地方性密螺旋体病等。通过统计分析得出结论：化学发光法检测的高精确度，在高出正常范围的一部分标本中，用胶体金标进行实验比对，将筛出的抗-TP“阴”性的标本，采用酶法进行了检测，可以将那些早期感染者含量不高的标本检测出来，实现早发现早治疗。不能单一只做TPPA试验来检测化学发光值高出正常值的标本，有必要对TPPA结果不确定的标本做酶法实验比对。真正体现检验工作不漏检不谎报结果的检验目标。附表1：组实验化学发光法酶法（ELISA）胶体金TPPA78人A抗-TP≥10S/CO78阳性100%78阳100%73阳93.6%44人B抗-TP