HPLC法测定强阳保肾丸中五味子醇甲的含量

HPLC法测定强阳保肾丸中五味子醇甲的含量

季文如

镇江江南大药房连锁有限公司,镇江212000

目的： HPLC法对强阳保肾丸中的五味子醇甲含量。方法：KromasilC18(4.6mm×250mm，5μm)为色谱柱,甲醇∶醋酸：水(35：4∶65)为流动相;流速:1.0ml/min;检测波长:440nm，柱温40℃。结果：五味子醇甲浓度在5.50～27.48 ug/ ml之间线性关系良好,平均回收率96.62%,RSD=1.1%，结论：该方法简单、可靠、专属性强，可用于强阳保肾丸的质量控制。                                                                                                                                                                 

[关键词]: 强阳保肾丸, 五味子醇甲 , HPLC

强阳保肾丸是淫羊藿（ 炙），阳起石（煅，酒淬），肉苁蓉（酒制），葫芦巴（盐水炙），补骨脂（盐水炙），五味子（醋制），沙苑子，蛇床子，覆盆子，韭菜子，芡实（麸炒），肉桂，小茴香（盐水炙），茯苓，远志（甘草制）等多味中药组成的复方制剂[1]。具有用于肾阳不足引起的精神疲倦，阳痿遗精，腰酸腿软，腰腹冷痛。五味子（醋制）为该制剂的主要药物之一，含有五味子醇甲等有效成分。原标准中未收载含量测定项 ,本文采用高效液相色谱法对该制剂中的五味子醇甲[2，3]含量进行研究 ,实验结果表明，该法简便易行，灵敏度高，能准确地反映五味子醇甲的含量，为更好的控制本品的内在质量提供了科学依据。

1  方法和结果                                                                     1.1 仪器与试药　                                                       

BP211D型电子天平（赛多利士）；Agilent1100高效液相色谱仪，G1314A VWD检测器（美国安捷伦公司），五味子醇甲对照品 (中国食品药品检定研究院110857-201815),甲醇为色谱纯；水为二次重蒸水；其他试剂为分析纯；强阳保肾丸（仲景宛西制药股份有限公司  批号：210601，220604，211203）。

1.2  实验方法和结果

1.2.1  色谱条件

色谱柱：KromasilC18(4.6mm×250mm),流动相：甲醇∶醋酸：水(35：4∶65)为流动相，流速：1.0mL/min，检测波长440nm，进样量：10ul，理论塔板数：5352，柱温：40℃，色谱图见图1。

1.2.2  对照品溶液制备：

精密称取五味子醇甲对照品9.46mg，加3%磷酸甲醇稀释至50ml棕色量瓶，摇匀，制成每1mL 含0.1374mg五味子醇甲的对照品储备液（五味子醇甲 =五味子醇甲/1.377）。精密量取对照品储备液3ml，加3%磷酸甲醇稀释至25ml棕色量瓶，即得对照品溶液(每1ml中含五味子醇甲16.49 ug)色谱图见图1。

1.2.3  样品溶液的制备　

取重量差异项下的内容物，研细，取0.6g，精密称定，置25ml棕色量瓶中，精密加入3%磷酸甲醇20mL，密塞，超声10min，放冷，加3%磷酸甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得样品溶液。色谱图见图2。

1.2.4标准曲线的制备

分别精密取对照品储备液1、2、3、4、5 mL于25ml棕色量瓶中，用3 %磷酸甲醇溶液稀释至刻度 ,摇匀，在上述色谱条件下进样10μl，依法测定。以峰面积（y）为纵坐标，相应浓度（x）为横坐标进行线性回归，得回归方程： y=19.955x+0.2224(R=0.9999) ，线性范围为 5.50~27.48 ug /ml。结果表明峰面积与浓度呈良好的线性关系。

1.2.5  精密度测定

精密取16.49 ug/ml五味子醇甲对照品溶液（五味子醇甲=五味子醇甲/1.377）10μl

重复进样5次，峰面积基本不变，RSD为1.0%。

1.2.6  重复性测定

取同批号(批号210601)样品5份，分别制备供试液，在上述色谱条件下测定5次，得五味子醇甲含量为0.608mg/g，RSD为0.9%

1.2.7  稳定性试验 

取同一批供试品溶液（批号210601），于室温放置,每隔2h测一次,共测5次,记录峰面积，RSD为0.5%。

1.2.8回收率试验　

分别取已知含量的样品(批号210601)6份,各0.15 g,精密称定,分别置于25ml的棕色容量瓶中,精密加入五味子醇甲对照品溶液(0.1374mg/ml)各0.5、0.7、0.9ml, 照样品测定法测定，计算回收率，平均回收率96.62%，RSD为1.1%。

1.2.9  空白试验 

按处方比例称取除骨碎补以外的其它八味药，按制备工艺制成供试液，依样品测定法测定，在主成分出峰处无干扰(见图3)。

图1对照品色谱图                            图2样品色谱图

图3 空白试验图

1.2.10  样品测定　

取样品溶液和对照品溶液，各进样10μL，读取峰面积值，按外标法计算含量(见表1)。

表1 样品含量测定结果（n=3）

2讨论：

2.1　提取时间的选择　分别超声处理3，10，15min测定同批样品，结果表明超声处理10min已经提取较完全。

2.2  实验过程中曾尝试乙腈∶0.05mol/l磷酸二氢钠溶液(50∶50)[4]为流动相，五味子醇甲色谱峰与杂质峰未能完全分离，调整流动相为乙腈∶0.05mol/l磷酸二氢钠溶液(35∶65)时能完全分离，且峰形好，柱效高。

2.3  通过试验，确定了强阳保肾丸中的五味子醇甲含量测定方法，测定结果准确可靠，方法简便，可以作为强阳保肾丸质量控制的依据之一。

参考文献

[1] 李岩, 王彤, & 赵俊华. (2015). Hplc测定五味子丸中五味子醇甲的含量. 中国卫生产业, 12(6), 3.

[2] 许乾丽, 茅向军, 许亚玲,等. HPLC法测定石斛夜光丸中五味子醇甲的含量[J]. 药物分析杂志, 2010(12):3.

[3] 苏彪, 赵艳, 杨荣艳,等. HPLC法测定三子降酶胶囊中五味子醇甲的含量[J]. 中国药物警戒, 2014, 000(006):328-330.

[4] 李军, 杜汴兴. HPLC法测定肝复康胶囊中五味子醇甲的含量[J]. 中医研究, 2007, 20(6):2.

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