中药注射剂无菌检验技术及其应用

中药注射剂无菌检验技术及其应用

徐丽娜

哈尔滨珍宝制药有限公司

【摘要】文章旨在深入探讨中药注射剂无菌检验技术及其应用。先对无菌检查结果受到的影响加以分析，包括供试品溶液成分，微生物复杂特征，针对微生物的检查方法，检验过程中准备的条件，之后通过一系列实验进行验证，准备菌种、培养基、冲洗液等条件，通过专项操作得出结果，评价中药制剂抑菌性，得到不同中药注射剂的检验结果。希望以下论述能起到借鉴作用，为药剂无菌检验进行提供参考，保证药品安全规避用药事故。

【关键词】中药；注射剂；无菌检验技术

注射药剂是临床治疗过程中经常使用的药品，在病危症治疗、急救等方面具有不可代替的作用。中药注射剂是我国医学行业经过长时间发展而衍生的新型产品，在临床方面得到广泛应用。舒血宁注射液是银杏经过提取之后制成的灭菌药剂，穿心莲注射液是以穿心莲作为主要材料加工之后得到的产品，银杏叶提取物注射液常用于心血管病症治疗。中药药剂使用过程中出现的安全事件受到社会各界高度重视，但这种情况主要是药液没有接受细菌检验所致，只有做好相应工作才能确保检验结果真实准确。

1无菌制剂无菌检查结果的影响因素

1.1供试品的组分

某些供试品制剂较为特殊，其中成份具备抑菌功能，例如抗生素、黄连等。另外，多数供试品制备过程中加入定量防腐药剂、抗氧剂等多种化学产品，这些材料浓度达到某种程度之后会抑制微生物发展，引起药物污染的情况，对微生物造成一定影响。此外，针对药物开展专项检验工作时，因药物来源之间存在较大差异，制备阶段所用工艺技术不尽相同，药物生产辅料差距较大，以致于即便厂家生产同种药物也无法保证各批次药物质量一致。

1.2微生物的多样性及复杂性

自然环境下存在的微生物难以统计，且多数微生物生存要求并不相同，因此并不是所有微生物都会污染药物制剂；即便是同一厂家推出的产品，当存储条件不一致时，微生物存在方式同样有可能出现意想不到的变化。各类微生物抵抗力及存活状态不尽相同，如果盲目使用同一方法检验药剂，很有可能得到不够精准的数据，这对后续环节执行而言极为不利。

1.3无菌制剂微生物的检查方法

常规情况下，针对中药制剂的检验方法分为两类，其一是通过供试液制备进行检测，其二是以微生物为介质进行检测，方法应用是保证检测结果准确性的基础条件。微生物检测过程中，首先要对检测目标有足够了解，以此作为切入点制备检测环节所需供试品溶液，鉴于供试品溶液之间的差异，制备方法同样有所不同，无论是物理制备还是化学制备，具体操作过程中都会对溶液中的微生物造成一定影响，微生物难以正常生长。面对同一批次的相同供试液，若检测过程中使用不同的方法加以检验，得到的检测结果可能存在误差，究其原因供试品溶液中各成分占比不完全相同，特别是能起到抑菌作用的供试品液体。

1.4检验条件

中药试剂制备过程中，微生物污染状况是依据微生物培养做出判断结论。正因如此，培养环境质量、ph值、培养温度、时长、氧气供给等均会造成一系列影响，这对微生物生长而言极为不利，以致于最终检验结果出现差异。除上述因素之外，药剂检验是通过人工方式进行，人为操作失误同样会导致检验结果出现误差，实验环境差异也会影响结果准确性。

2试验材料

2.1验证菌种

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉均购自中国食品药品检定研究院。

2.2培养基及冲洗液

利用硫乙醇酸盐流体培养基，塑造适用于培养微生物的环境，依据检验需求利用营养肉汤制备培养基，优化马丁琼脂培养基,制备营养琼脂培养基,加强蛋白胨水溶液控制力度，把握其中各项成分所占比例，依照2020年推出的《中国药典》二部附录XIH无菌检查法制备所需药剂。

2.3样品

为保证实验结果公正性与准确性，此次实验选用舒血宁注射液作为样品，且样品是由不同药物生产单位提供，实验阶段所用穿心莲注射液同样来自多家药物生产单位，银杏叶提取物注射液来自同一家生产单位，上述所提及的所有药品生产批次各不相同。

2.4仪器和滤器

HTY无菌隔离器、HTY22000A集菌仪和一次性使用的全封闭三联集菌培养器,生化培养箱,生物安全柜。

3方法与结果

3.1菌液制备

深究2020年推出的《中国药典》一部附录XI H无菌检查法内容，按照所提要求制备对照菌溶液，最终确定每毫升液体当中含有10-100个细菌（efu），利用平板进行计算。

3.2样品的取样量

利用上文提及的样品制备中药注射液，将药剂规格控制在2ml-5ml之间，分析2020版本中国药典记录的无菌检查法，依照所提要求进行后续操作，实验过程中准备三联集菌培养器，用于对细菌进行全面检查，过滤药液当中含有的细菌，并制备具体参照物，如此实验人员需至少准备30支过滤器。对样品进行过滤处理之前，首先要通过浓度适中的蛋白胨水溶液打湿滤器，之后将多余气体排出，之后继续对样品溶液进行过滤。

3.3中药制剂的抑菌性的初步考察

选择直接接种法，首先制备适量培养基，满足药剂检验实验即可，整合硫乙醇酸盐流体培养基和优化之后的马丁培养基，将样品用量控制在1ml左右，之后向混合之后的培养基中加入定量阳性菌，经过一段时间培养之后发现，相比于阳性菌对照溶液，舒血宁输液中金黄色葡萄球菌生长速度较为缓慢，且单个细菌规模较小，其余细菌培养表现与金黄色葡萄球菌大致相同。这一现象表明舒血宁注射液能抑制金黄色葡萄球菌扩散，至于其它样品经过上述检验之后发现和对照组之间差异可忽略不计，表明无法起到抑制细菌的作用，且样品本身并不透明，利用药典中记录的方法进行过滤，当样品颜色完全去除之后可能具备抑菌功能。

3.4中药注射剂的无菌检查方法学验证

借助薄膜过滤法，使用三联集菌培养器，将过滤膜放入0.1%无菌蛋白胨水溶液当中，使过滤膜完全湿润，之后称取定量供试品溶液，利用过滤器对这些液体加以处理，过滤操作结束之后再次使用冲洗溶液进行冲洗，注意每次冲洗溶液用量控制，过滤结束之后向其中两个过滤筒倒入硫乙醇酸盐流体培养，剩余过滤筒放入优化之后的马丁培养基,平行两份，分别加入上述6种验证菌株(10~100efu),作为试验组:另取一装有同体积相同培养基的滤筒,加入等量试验菌.作为阳性对照组,硫乙醇酸盐流体培养基的滤简置33C培养,优化马丁培养基置259培养，观察验证菌生长情况。

3.5三种中药注射剂的无菌检验结果

根据药典要求,中药注射剂必须达到无菌要求，采用验证后的无菌检查方法，对所有来自8个生产企业159批次的舒血宁注射液，来自5个生产企业107批次的穿心莲注射液和来自1个生产企业158批次的银杏叶提取物注射液进行无菌检查试验，结果表明供试品溶液均保持澄清状，阳性对照均生长良好。判定中药注射剂无菌检查均符合规定。

4结语

由上述分析内容可以看出，伴随我国医药行业飞速发展，中药注射剂应用范围持续扩张，已经成为临床治疗过程中不可缺少的重要组成，为此必须保证药物本身安全性与质量。然而，最近几年中药注射剂应用过程中经常出现问题，受到社会各界高度重视，究其原因主要是受药物细菌影响。为此，药物制备过程中必须选择无菌技术加以检验，掌握细菌对药物造成的影响，进一步加强控制力度。

参考文献

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