对《中国药典》2020年版一部红参药材中人参皂苷含量测定方法的探讨

对《中国药典》2020年版一部红参药材中人参皂苷含量测定方法的探讨

郑梦婷

福建省药品审核查验中心     350003

红参是由五加科植物人参的栽培品经蒸制后的干燥根及根茎，具有大补元气、复脉固脱、益气摄血的作用。人参皂苷是其主要活性成分之一，也是判断其质量优劣的重要指标之一。《中国药典》2020年版I部对红参药材中人参皂苷的含量进行了测定并规定了限度。在文献报道中，也多参照药典的方法来测定人参皂苷含量。

本课题采用改进方法，以红参中的人参皂苷Rg1、Re和Rb1的含量为指标，结果显示改进方法所测定红参中的人参皂苷含量高于药典法，可用于红参药材的质量控制，为进一步完善《中国药典》的含量测定方法提供参考。

1 仪器与试药

LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津公司)；KQ-250D型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

对照品：人参皂苷Rg1（批号：110703-201933）、人参皂苷Re（批号：110754-202028）和人参皂苷Rb1（批号：110704-202028）均由中国食品药品检定研究院提供，供含量测定用；红参药材为市场商品。

试剂：乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1  对照品溶液的制备

分别取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1 ml中含人参皂苷Rg10.5mg、人参皂苷Re 0.3mg、人参皂苷Rb1 0.5mg的混合溶液，即得。

2.2  供试品溶液的制备

2.2.1  方法一  按2020版中国药典方法[1]，取红参药材粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置索氏提取器中，加三氯甲烷适量，加热回流3h，弃去三氯甲烷液，药渣挥干溶剂，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入水饱和正丁醇50ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250W，频率50kHz）30分钟，滤过。精密量取续滤液25ml，置蒸发皿中蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液1。

2.2.2  方法二  取红参药材粉末（过四号筛）约1g，精密称定，置圆底烧瓶中，加甲醇50ml，加热回流1h，放冷滤过，滤液蒸干，残渣加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次20ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液2。

2.3  色谱条件

色谱柱：PLATISIL-ODS( 4.6mm×250mm，5μm)，流速：1.0ml·min-1，检测波长203nm，柱温35℃，进样量10μl。流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱。(见表1)

表1  流动相梯度洗脱安排表

2.4  系统适用性试验

在上述色谱条件下，人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1的分离度良好，均大于1.5，理论塔板数以人参皂苷Rg1峰计算大于6000，满足定量要求。色谱图见图1。

图1  高效液相色谱图

A对照品溶液；B供试品溶液1；C供试品溶液2

2.5  线性关系

分别精密量取对照品溶液2，4，6，8ml置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，照上述色谱条件进样10μl，记录色谱数据，以峰面积Y对浓度X（mg·ml-1）进行线性回归处理，求得人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1回归方程分别为: Y=2685.6X+20921,r=1；Y=1140.4X-17413,r=0.9999； Y=2626.9X-42603,r=0.9999。

2.6  精密度试验

取“2.2.2”项下方法制得的供试品溶液，在上述色谱条件下，重复进样6次，3种组分的RSD分别为0.44%、0.84%和0.65%。

2.7  重复性试验

按“2.2.2”项下方法，同一批药材平行制备6份供试品溶液, 照“2.3”项下色谱条件进样测定。根据峰面积计算各成分的含量，测得样品中的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量平均值（n=6）RSD分别为0.51%、0.24%和0.39%，表明重复性良好。

2.8  稳定性试验

取“2.2.2”项下方法制得的供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件于0,2,4,6,8,12,24 h进样，测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1色谱峰峰面积，计算RSD分别为1.01%，1.12%和1.02%。表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.9  回收率试验

称取已知含量红参粉末共6份，每份约0.5g，精密称定，分别精密加入一定量的人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1对照品，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3”项下色谱条件进样测定待测成分的量，计算回收率。结果人参皂苷Rg

1、人参皂苷Re和人参皂苷Rb1平均回收率(n=6)分别为99．1% ，99.9%和99.4%，RSD分别为0.94%，1.03%和0.89%。

3  测定

分别精密吸取对照品溶液与两种提取方法红参的供试品溶液10μl，在“2.3”项下色谱条件注入液相色谱仪，测定，即得。含量测定结果见表2。

表2 不同提取方法下样品含量测定结果

4  讨论与结论

本研究对供试品溶液的制备方法进行了考察，结果表明以甲醇50 ml作为溶剂，加热回流1h，提取效果优于中国药典方法，准确可靠，且减少了有害试剂的使用，可用于红参药材的质量控制，为进一步完善其含量测定的方法提供参考。

参考文献:

[1]  中华人民共和国药典委员会，《中国药典》2020年版一部[S]：160．