基于聚合物胶束的香豆素-6荧光探针构建与检测

基于聚合物胶束的香豆素-6荧光探针构建与检测

黄龙平1，李奇1，叶艾珂2，盛秋慧1，罗德彦1，覃思尚1，蓝苑菱1，冯海1，黄炎敏1，叶芳1

叶芳：通讯作者

作者单位：1：广西医科大学；2：佑棵智能科技（上海）有限公司

摘要：目的：HPLC法测定Cou-6/mPEG-PLA聚合物胶束的包封率，为聚合物胶束的细胞摄取实验提供理论依据和实验基础。方法：以mPEG-PLA为纳米载体，采用薄膜水化法包载香豆素-6(Cou-6)并用高效液相色谱(HPLC)法测定香豆素-6的包封率。结果：Cou-6/mPEG-PLA聚合物胶束的包封率为81.38%。结论：采用mPEG-PLA纳米材料包载的Cou-6聚合物胶束的包封率高达81.38%，制备工艺简单，包封率高，为纳米载药系统的质量评价提供参考并为后续的细胞摄取实验提供实验基础。

关键词：Cou-6；mPEG-PLA；HPLC

聚乙二醇(PEG)和聚乳酸(PLA)都是FDA批准的可生物降解材料，具有良好的生物相容性。香豆素-6是一种脂溶性荧光染料，其常被作为稳定的荧光标记物包载于纳米给药系统内，进行给药系统的体内示踪、细胞摄取和转运机理研究[1]。本实验采用HPLC法测定Cou-6/mPEG-PLA胶束的包封率，为纳米载药系统的质量评价提供参考。

1仪器与试剂

1.1仪器

1260 Infinity Ⅱ高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；RE-2000E旋蒸仪（杭州亿捷科技有限公司）。

1.2试剂

香豆素-6（美国MCE公司）；色谱级甲醇（美国Thermo Fisher公司）。

2实验方法

2.1Cou-6/mPEG-PLA聚合物胶束的制备

采用薄膜水化法制备负载Cou-6的聚合物胶束。取160 μg的Cou-6和20 mg的mPEG-PLA置于茄形瓶中，加入2 mL氯仿溶解，溶解后50℃减压旋转蒸发除去溶液中的有机试剂。加入60℃的去离子水2 mL，充分振荡使其自组装成包封Cou-6的聚合物胶束。

2.2Cou-6含量测定分析方法的建立

2.2.1 Cou-6最大吸收峰的确定

配制Cou-6标准溶液，用紫外光谱仪在190-600 nm波长范围内进行波长扫描，确定Cou-6的最大吸收峰为463 nm。

2.2.2色谱条件

用中谱科技RD-C18色谱柱，流动相为纯水：甲醇=10:90（v/v），柱温25℃，流速为1.0 mL/min，进样量为10 μL，检测波长为463 nm。

2.2.3 HPLC测定Cou-6聚合物胶束的包封率

配制好1、2、3、4、5 μg/ml浓度的Cou-6标准溶液，0.22 μm微孔滤膜过滤后稀释30倍，用HPLC法测定样品，进样量为10 μL，重复进样三次。再通过标准曲线计算出Cou-6的含量。包封率的计算公式如下：

包封率=聚合物胶束中Cou-6的量/投入Cou-6的量×100%

3结果

3.1 Cou-6最大吸收峰的确定：图1为不同浓度的Cou-6标准溶液在波长范围为190-600 nm的波长扫描结果，最大吸收峰都为463 nm。

图1Cou-6在190-600 nm波长下的紫外可见吸收光谱

3.2 Cou-6的包封率：图2-A为包载后的Cou-6胶束（稀释30倍）的色谱图，图2-B以峰面积(A)为纵坐标，Cou-6浓度为横坐标(C)，得到标准曲线方程为A=85.332C+1.1505，回归系数R2=1，计算后得到Cou-6的包封率为81.38%。

图2Cou-6色谱流出曲线图及Cou-6峰面积-浓度线性关系分析(A)Cou-6/mPEG-PLA的色谱图(B)浓度梯度为1、2、3、4、5 μg/mL的Cou-6的标准曲线

4讨论

聚合物胶束是由两亲性嵌段共聚体自组装形成的核-壳结构，内核是疏水基团，主要用于溶解疏水性分子药物等，外壳是亲水基团，有助于其溶解于水性介质中[2]。本研究采用Cou-6作为模型药物，制备Cou-6/mPEG-PLA聚合物胶束，并利用HPLC法测定其包封率，结果显示聚合物胶束的包封率高达81.38%。为Cou-6纳米载药系统的质量评价提供参考并为后续的细胞摄取实验提供理论依据和实验基础。

基金项目：广西医科大学“大学生创新创业训练计划”项目No. 202210598036, S202210598060, 202210598004, 202210598011, 202110598003, X202210598323， 和202210598050, 未来学术之星项目No. WLXSZX22121。

参考文献

[1]孙蓉, 许小艺, 徐伟, et al. 载香豆素-6聚乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒包封率的测定[J]. 广州化工, 2018, 46(03): 84-5.

[2]李菲, 张家彦, 杜丽, et al. 聚合物胶束在药物传输系统中的研究和应用 [J]. 转化医学电子杂志, 2017, 4(06): 72-6