(云南省肿瘤医院/昆明医科大学第三附属医院病理科)
对于一部分乳腺癌患者,病理报告上会明确指出“建议进行FISH检测”,这时病人就纳闷为什么要做FISH检测,它是做什么用的?;而已经进行FISH检测的乳腺癌患者,当其拿到检测报告时,她心里会想:我的结果是不是好的,有利于我的进一步治疗吗?那么,就让我们先了解一下有关乳腺癌FISH基因检测的基本知识,这样很多疑问就有了答案。
1、FISH
FISH是荧光原位杂交技术的简称,在分子病理检测领域其实它跟鱼没有关系。FISH技术的原理利用标记荧光素的DNA序列作为探针,变性成单链后,按照碱基互补配对原则,与待检样本中互补的核酸序列经过退火-杂交形成双链核酸,通过荧光显微镜检测荧光信号对结果进行分析,从而检测细胞、组织样本中的染色体或基因的异常。FISH检测具有直观、快速、敏感性和特异性高、定位准确等特点。目前在实体瘤中,FISH技术主要应用于个体化治疗方案的确定、肿瘤诊断、预后评估等,同时还应用于产前诊断及血液病的诊疗中。
2、乳腺癌HER-2基因
HER2基因又称人表皮生长因子受体(HER)2即c-erbB-2基因,属于原癌基因,位于染色体17q21,是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,激活后可传导分裂信号通路,抑制细胞凋亡,增加肿瘤细胞侵袭力等。25-30%乳腺癌患者存在HER-2基因的扩增及蛋白的高表达。HER2阳性(过表达或扩增)的乳腺癌患者病情进展速度快,化疗缓解期短,内分泌治疗(如他莫昔芬)效果差,HER-2基因扩增的病人用高剂S的蒽环类和紫杉醇类药物更有效,无病生存率和总生存率低。HER-2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin(赫赛汀,2001年FDA批准上市)靶向药物治疗。HER-2检测方法有免疫组化(IHC)和荧光原位杂交(FISH)等,在《乳腺癌HER2检测指南(2019版)》指出:FISH是检测HER2基因状态的金标准,目前已成为乳腺癌临床治疗中的常规检测项目。
3、与常规的免疫组化检测项目相比FISH检测的优势
免疫组化和FISH检测的样本为10%中性福尔马林固定后石蜡包埋标本(FFPE样本),防脱玻片切片厚度3~5μm,不是抽血。免疫组化和FISH检测HER-2的状态一致性很高,但也存在差异。主要原因是:1)由于蛋白质在标本固定、处理过程中易变性破坏等,并且抗体的不同批号存在差异,结果判断具有主观性等, 使得免疫组化技术在检测中易出现假阴性、假阳性问题,免疫组化阴性但HER-2基因扩增的患者与蛋白质降解有关。2)免疫组化结果阳性而HER2基因无扩增的患者多是由于17号染色体的非整倍体造成的蛋白表达,而17号染色体的非整倍体扩增的患者对于赫赛汀治疗效果不明显。
4、哪些患者适宜进行HER-2检测
目前需要做FISH基因检测的人群包括:①所有乳腺原发性浸润癌;②复发或转移的乳腺癌患者尽可能再次检测;③新辅助化疗后仍有肿瘤残留的病例建议再次检测;④对于细胞量过少微浸润的病例,则需要具体情况具体分析,医生需要对照HE切片和免疫组化结果,如果切片中微浸润灶和原位癌腺体很好区分,对于“≤5mm”的微浸润灶也可进行FISH检测,而如果两者互相混杂在一起,难以区分,则不宜行FISH检测,容易造成误诊。
为了尽可能减少患者的经济负担而又尽可能的提高HER-2靶向治疗的获益人群,HER-2基因的基本检测流程为先行免疫组化检测。在病理报告中通常会描述HER-2免疫组化的结果判读,包括(0)、(1+)、(2+)、(3+)。HER-2免疫组化(0或1+)的患者视为HER-2阴性,不适用进行FISH检测。HER-2(2+)的患者需再行FISH检测来确定HER-2的扩增状态。IHC3+判读为HER2阳性。
5、HER-2结果的解读
HER-2基因的观察流程为:
①HE观察:确定标本类型、肿瘤分布特征
②低倍→高倍
A.低倍:肿瘤区域、切片质量、HER-2扩增异质性
B.高倍:计数
计数细胞选择为细胞核边界完整、无重叠、标记HER2基因的红色信号和标记该基因所在的17号染色体着丝粒(CEP17)的绿色信号清晰的肿瘤细胞,随机计数至少20个细胞核中的双色信号。FISH结果解读如下。HER-2免疫组化结果为(3+)或FISH检测报告显示为HER-2基因扩增,则表明患者可以进行抗HER-2的靶向治疗,反之不需要。
2017年,人力资源和社会保障部将HER2靶向药物曲妥珠单抗纳入国家医保药品目录,抗HER-2治疗价格大幅降低, HER2阳性乳腺癌患者采用针对性靶向治疗可明显提高治愈机会,显著降低复发率和死亡率,提高生活质量。