食品添加剂蜂蜡的巴西棕榈蜡试验

  食品添加剂蜂蜡的巴西棕榈蜡试验

高志城1，,周敏2*，

1. 广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心），广东省化学测量与应急检测技术重点实验室，广东省原位电离质谱分析工程技术研究中心（广州510070）；2. 中国检验检疫科学研究院粤港澳大湾区研究院（中山528437）

摘要：［目的］对食品添加剂蜂蜡的巴西棕榈蜡试验进行优化，降低实验误差。［方法］通过在蜂蜡中添加不同剂量的对照品巴西棕榈蜡在显微镜下进行观察,并对添加前后的结果进行比较。［结果］纯蜂蜡（巴西棕榈蜡含量为0%）能通过试验,而巴西棕榈蜡含量为（1%，10%，50%，90%，99%）均不能通过试验，添加前后差异明显，效果满意。［结论］通过添加不同剂量的对照品,可以有效的降低试验过程中样品污染的风险,提升食品添加剂蜂蜡的巴西棕榈蜡试验的准确性。

关键词：蜂蜡；巴西棕榈蜡

蜂蜡是由蜜蜂（工蜂）腹部四对蜡腺分泌出来的蜡。蜂蜡在常温下呈固体状态，具有蜜、粉的特殊香味。颜色有淡黄、中黄或暗棕色及白色不等[1]。蜂蜡（蜜蜡）主要化学成分可分为4大类，即酯类、游离酸类、游离醇类和烃类。此外还含微量的挥发油及色素。蜂蜡据称尚含一种芳香性有色物质，名为虫蜡素[2]。天然蜂蜡可塑性强、润滑性好，并有绝缘、防潮、避免表面诱蚀等优点，这些优良特性都为其在在化妆品、医药、食品等各个领域的应用提供了可能[3-4]。

蜂蜡是一种复杂的有机化合物。蜂蜡的主要成分是高级脂肪酸和一元醇所合成的酯类、脂肪酸和碳氢化合物，但多因蜂种、蜜粉源植物、提炼方法等不同，其成分也有一定的差异[5]。 在日常鉴别蜂蜡质量优劣、真伪时，多数是凭着经验直观或简易检测方法来鉴别蜂蜡质量，最好方法是按国家标准、药典检测其理化指标及其他有关指标[6-7]，为应用蜂蜡和进一步开发蜂蜡产品提供技术指导[8-10]。蜂蜡的纯度会直接影响其应用价值，巴西棕榈蜡是从生长于南美洲巴西东北部的棕榈树叶上提取的天然植物蜡，用作药用辅料、包衣材料和释放阻滞剂等[11]，也会被用来做食品的可食性薄膜和涂层[12] 。巴西棕榈蜡试验也常被认为是衡量蜂蜡质量的重要指标之一[13-14]。本研究是在食品安全国家标准 食品添加剂 蜂蜡 GB 1886.87-2015 的基础上[6]，改善相关实验条件，进行对比试验，建立适用于食品添加剂蜂蜡的巴西棕榈蜡试验的测定方法。

作者简介：高志城（1990-），男，广东中山人，大学本科，助理工程师，从事微生物检测及研究工作，E-mail:570022726@qq.com

通讯作者：周敏（1986-），女，湖南长沙人，硕士研究生，工程师，从事微生物检测及研究工作，E-mail:zhoumin07079999@163.com

1 材料与方法

1.1材料与仪器

1.1.1 材料与试剂

试剂：巴西棕榈蜡（分析纯，麦克林试剂有限公司）。

1.1.2 主要仪器设备

Olympus生物显微镜 （CX23LEDRFS1C，奥林巴斯工业有限公司），万分之一电子天平（BSA224S型，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司），电热恒温水浴锅(HWS-12型，上海一恒科学仪器有限公司)。

1.2 样品制备

1.2.1 样品组：取试样A1100 mg（巴西棕榈蜡含量为0%）。

1.2.2 对照组：取试样B1巴西棕榈蜡100 mg。

1.2.3 试验组：取试样C199 mg，对照品巴西棕榈蜡1mg（巴西棕榈蜡含量为1%）；C290 mg，对照品巴西棕榈蜡10 mg（巴西棕榈蜡含量为10%）；C350 mg，对照品巴西棕榈蜡50 mg（巴西棕榈蜡含量为50%）；C410 mg，对照品巴西棕榈蜡90 mg（巴西棕榈蜡含量为90%）；取试样C51 mg，对照品巴西棕榈蜡99 mg（巴西棕榈蜡含量为99%）。

1.2.4 将以上样品混匀后，分别置于试管中，加正丁醇20 mL，将试管浸入沸水中，轻轻摇动至完全溶解，将试管移入盛有60 ℃水的烧杯中，冷却至室温。

1.3 测定

1.3.1 用吸管从澄清的母液中吸取一滴置于盖玻片，然后置于400倍数的光学显微镜下进行观察。

1.3.2 蜂蜡：置显微镜下观察该结晶呈针状或放线状，并没有无定型物质，如图1。

图1 蜂蜡显微形态（400倍）

1.3.3 巴西棕榈蜡标准品经过1.2.4步骤处理后的显微形态，如图2。

图2 巴西棕榈蜡标准品显微形态（400倍）

1.3.4 添加不同浓度的巴西棕榈蜡后的蜂蜡：置显微镜下观察没有针状或放线状的结晶，且有无定型物质，如图3。

图3 添加不同浓度的巴西棕榈蜡后蜂蜡显微形态（400倍）

2 结果与分析

2.1 样品组显微结果

试样A1置显微镜下观察该结晶呈针状或放线状，并没有无定型物质，即表明无巴西棕榈蜡存在，试验通过。

2.2 对照组显微结果

试样B1置显微镜下观察没有针状或放线状的结晶，且有无定型物质，结果表明巴西棕榈蜡自身是无定型物质，不能形成结晶。

2.3 试验组显微结果

试样C1，C2，C3，C4，C5置显微镜下观察没有针状或放线状的结晶，且有无定型物质，即表明只要有巴西棕榈蜡的存在，试验不通过。

2.4 结果分析

    通过实验结果可以看出，只要在蜂蜡中有巴西棕榈蜡的存在（1%，10%，50%，90%，99%），哪怕含量只有1%，试验均不通过。

3 结论与讨论

3.1 讨论

    为了保证巴西棕榈蜡试验结果的准确性，因此对实验人员和实验用器具都有严格的要求。在实际检验过程中要注意以下几点：第一，加热煮沸溶解时要在烧杯中加入沸石，由于蜂蜡及其混合物会沉淀到试管底部，因此需轻轻摇动试管，直至沉淀物完全溶解为止。第二，将溶解后的试管转移到60 ℃的水，自然冷却到室温，让晶体充分析出。此步骤对温度要求严格，需要用恒温水浴锅保温到60 ℃，过高温度会导致晶体析出时间长，过低温度会导致晶体析出时间过短，晶体析出不完整，影响显微观察，从而导致实验误差。第三，正丁醇是有挥发性，整个实验操作过程需要在通风橱中操作。在显微镜观察时，动作要迅速，针状或放线状的结晶只能在有液体情况下观察到，避免正丁醇挥发后，结晶形成定形物质，造成假阳性结果。

3.2 结论

巴西棕榈蜡试验是检验蜂蜡质量好坏的重要指标之一，为蜂蜡应用提供有效的保证[15]。本研究通过添加不同含量的巴西棕榈蜡，建立样品组，试验组，对照组，通过各组结果对比，得到了令人满意的实验结果。但是本研究还有个问题亟待解决：除了巴西棕榈蜡外，蜂蜡中还可能存在其他杂质，如纯白地蜡，石蜡及其他蜡，会不会对结晶的形成和析出造成影响，导致结果存在误差。下一步研究的重点就是解决在其他杂质的存在下试验结果有没有差异性的问题，提高检测准确度，为实际检测工作提供有效参考和数据支持具有重要意义。

参考文献

[1]陈惟馨. 蜂蜡的应用概述[J]. 明胶科学与技术, 2006, 26(3):7.

[2]南京中医药大学,中药大辞典（下册）（第2版）[M]. 上海科学技术出版社,2006,3486.

[3]胡晓玲,任晓晓,刘强等. 蜂蜡的理化性质与应用[J]. 中国蜂业. 2018,69(12) .

[4]SinhaA,GillPS,JawandhaSK,etal.Suppressionofinternalbrowningandmaintenanceofantioxidantsinbeeswaxplussalicylicacidcoatedpearfruitduringdifferentstorageconditions[J].InternationalJournalofFoodScience&Technology,2022,57(6):3515-3522.

[5]鲁捷. 人类和蜜蜂的关系始于公元前7000年[J]. 大众考古, 2015(11):1.

[6]食品安全国家标准 食品添加剂 蜂蜡 GB 1886.87-2015 附录A检验方法/A.7巴西棕榈蜡试验.

[7]国家药典委员会编. 中华人民共和国药典 2020年版 四部[M]. 北京: 中国医药科技出版社.

[8]王静琳,汪燕,马振刚. 综述蜂蜡的应用[J]. 蜜蜂杂志.2019,39(12):9-12.

[9]李万瑶.蜜蜂与人类健康: 中医古籍出版社[M]. 2010: 249-256

[10]曹炜, 陈卫军. 蜂产品深加工技术[M]. 中国轻工业出版社, 2011.

[11]关志宇. 药物制剂辅料与包装材料[M]. 北京：中国医药科技出版社, 2017(01):102-103.

[12]Chiumarelli M , MD Hubinger. Evaluation of edible films and coatings formulated with cassava starch, glycerol, carnauba wax and stearic acid[J]. Food Hydrocolloids, 2014, 38(jul.):20-27.

[13] 刘正启. 蜂蜡的加工与质量检验[J]. 蜜蜂杂志. 1988(04):23-24.

[14] 周萍,胡福良,胡元强,等. 中、西蜂蜂蜡理化指标分析及蜂蜡标准化建议[J]. 中国蜂业. 2007(10):7-9.

[15] 曾慧,刘学斌,范凤琼,等. 蜂蜡质量标准研究[J].  药物分析杂志. 1998(S1):181-183.