D-二聚体6大检测方法你了解多少

D-二聚体6大检测方法你了解多少

候彬

四川省科学城医院 四川 成都 610000

在凝血过程中，纤维蛋白在凝血酶的作用下会转化为交联的纤维蛋白，并在此过程中激活纤溶系统，将交联的纤维蛋白降解为不同种类的纤维蛋白降解产物碎片。两个含有D片段的纤维蛋白可以通过γ链结合成 D-二聚体。D-二聚体升高可提示患者出现继发性纤维溶解功能亢进。关于D-二聚体6大检测方法，你了解多少呢？以下笔者将对其进行阐述。

1 D-二聚体进行检测的意义

D-二聚体是一种反映凝血、纤溶系统活化程度的指标，其与多种血栓性疾病、病理性高凝等因素密切相关。尤其对静脉血栓栓塞有较高的敏感性，对静脉血栓栓塞的排除有较高的价值。除此之外，D-二聚体在心血管疾病、恶性肿瘤等疾病中，也有显著的变化，它是一种能够反映疾病的严重程度、发展变化，以及疗效和预后的指标。

1.1 D-二聚体可排除DVT静脉造影

 D-二聚体是最早采用的DVT静脉造影诊断手段，目前仍然是深静脉血栓诊断的“金标准”。不过，由于静脉造影的费用较高，而且有一定的侵入性，所以无论是医生还是病人，都不愿意使用。其他一些基本医疗机构也没有提供静脉造影术的仪器。目前广泛使用的是一些非侵入式的影像学检查手段，例如：静脉加压超声（CUS）、三维成像（DS）等。非侵袭性检查与静脉造影相比，具有更少的创伤和更便利的特点，但是仍需更高的费用和专业的操作。因为有20%左右的非侵袭性检查阴性的病人，在随访时出现静脉血栓栓塞，因此有必要对其进行持续、动态的监测。但是，这不但增加了病人的治疗成本，还增加了病人在五天之内得不到确切诊断的焦虑。 D-二聚体法是一种简便、快速、经济的检测方法，具有较高的灵敏度。因此，在小规模的人群中应用D-二聚体进行深静脉血栓的筛查与排除，可以大大地节约时间与资金。 

1.2D-二聚体在心脑血管疾病中的意义

D-二聚体水平的变化及其与动脉硬化的形成及严重程度相关，并与心肌梗死后复发相关。根据前人的研究发现：无心血管病临床表现的病人，有颈动脉损伤且有较高血栓风险的病人，其D-二聚体值显著高于无颈动脉损伤，但有较高血栓风险的病人。与此相似，D-二聚体浓度的增高，也会导致冠心病的发生。我们还发现，糖尿病患者的血药浓度与其血清中的脂质含量呈正相关。

2 D-二聚体6大检测方法

D-二聚体是一种存在于血液中的蛋白质，对血液中的凝血及纤溶起着关键作用。D-二聚体的含量发生改变，可能是凝血酶或纤溶作用发生了改变。所以，常用的D-二聚体测定方法有以下6种。

2.1乳胶凝集方法

其原理是利用乳胶颗粒吸附D-二聚体的特异性抗体，然后与血浆D-二聚体结合，如果有凝集块，就说明检测的结果是阳性的。这种方法操作简单，耗时短，但是它主要依赖于肉眼来观察测试的结果，并以定性和半定量的方法进行报道，其结果之间的差别较大，因此不适合进行大批量的测试。

2.2免疫荧光方法

通过对D-二聚体的单克隆抗体进行荧光标记，再与D-二聚体的单克隆抗体进行特异地结合，并在荧光显微镜下进行荧光检测。这种方法可以对血浆中的D-二聚体进行定量分析，具有灵敏度高、耗时少、可以批量测定等优点。

2.3化学发光方法

在磁珠表面包覆一种化学发光试剂或酶标记的D-二聚体抗体，并与待测抗原特异结合，经清洗后，利用氧化剂、荧光基质等发射光子，获得D-二聚体含量检测。该方法具有灵敏度高、准确度高、自动化程度高、可批量测定等优点，但存在着成本高等问题。

2.4酶联免疫吸附方法

将D-二聚体抗体通过双抗体夹心法包埋于固相中，得到抗体-抗原-酶标记的抗体夹心复合体，并通过添加酶使其显色，依据显色结果判定D-二聚体的含量。该法的不足之处在于其操作步骤较繁琐，测试时间较长。

2.5胶体金免疫渗透方法

它的原理是：在用单克隆抗体滤过膜对D-二聚体进行吸附之后，再加入D-二聚体单克隆抗体与胶体金偶联物，这时，在滤过膜上就会呈现出不同的颜色，再通过仪器区分颜色的深浅，就可以获得D-二聚体的浓度。此法操作简单，耗时短，费用低廉，但特异性差，不适合大规模检测。

2.6免疫比浊方法

通过乳胶颗粒来对D-二聚体特异性进行吸附，并将其和待测抗原结合，从而共同形成聚合体，通过它的吸光度与散射光强度变化，来检验D-二聚体水平。这种检测方式有着操作比较简便的优势，且有很高的灵敏度，耗时短，从而此检测方式是大批量的D-二聚体检测的首先。

3 D-二聚体检测结果

目前，D-二聚体的定量分析方法主要有D-二聚体单位（DDU）和FEU 单位两种。而同时在D-二聚体报告模式中，也有ng/mL、μg/mL和mg/L等单位，一般应直接使用生产商的单位，不推荐形式和量纲的转换。D-二聚体的检测都是建立在抗原、抗体作用的基础上，但是在同一样本中，用不同的试剂进行检测时，常常会出现难以比较的问题。这主要是因为，D-二聚体并不是一种结构简单、均匀的物质，它是包含D-二聚体结构的大小不同片段的混合物，而针对不同片段制备的单克隆抗体对同一份血浆中不同片段的结合能力也存在差异。并且由于试剂制造过程的差异，没有统一的标准单位，各厂家的试剂说明书的参考范围不同，标准品的不同，使得不同试剂之间的D-二聚体测定结果的可比性较差。

综上所述，常见的D-二聚体检测方法有以上6种，具体而言，还是需要根据实际情况，来选择适合的检测方法。