荧光免疫层析法NT-proBNP测定试剂线性区间的建立

荧光免疫层析法NT-proBNP测定试剂线性区间的建立

曾繁兵

深圳市博卡生物技术有限公司，广东 深圳 518110

摘要：目的：应用《YY/T 1789.4-2022 体外诊断检验系统 性能评价方法 第4部分：线性区间与可报告区间》建立N末端B

型钠尿肽原（NT-proBNP）测定试剂盒（荧光免疫层析法）的线性区间。方法：线性区间的研究，需采用高值和低值样本配制一系列不同浓度的样本。建立试剂的线性区间时，配制出较预期线性区间更宽的至少9个左右不同浓度的样本，每个样本进行多次重复检测。采用重复检测均值和预期值进行直线回归分析，通过线性回归方程、线性相关系数（r）及线性偏差，判断结果是否满足可接受标准。结果：线性允许误差为10%，各梯度稀释检测结果均符合要求，得出样本的线性区间为99.7pg/mL-25040.6pg/mL。结论：建立了N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）测定试剂盒（荧光免疫层析法）的线性区间。

关键词：NT-proBNP；免疫层析；线性区间

中图分类号：R446.6文献标识码：A

体外诊断试剂分析性能的评价是指对测量系统检测患者样品结果可靠性的估计。体外诊断检验系统的分析性能包括精密度、正确度、准确度、检出限与定量限、线性区间与可报告区间、分析特异性等，其中线性区间是定量测定体外诊断试剂研发与评价的关键指标。线性区间是使用实验系统的最终分析结果为可接受的线性的浓度范围，此时非线性误差应低于允许误差。线性区间是在排除随机误差的情况下反映待评价被被测量在样本中稀释能力的指标，主要基于统计学计算。本文应用《YY/T 1789.4-2022 体外诊断检验系统 性能评价方法 第4部分：线性区间与可报告区间》建立N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）测定试剂盒（荧光免疫层析法）的线性区间。

1 材料与方法

1.1仪器深圳博卡生物FR-300干式荧光免疫分析仪

1.2试剂博卡生物配套N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）测定试剂盒（荧光免疫层析法）

1.3低值样本混合阴性血浆。

1.4高值样本高值阳性血浆。

1.5方法依据《YY/T 1789.4-2022 体外诊断检验系统性能评价方法第4部分：线性区间与可报告区间》建立N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）测定试剂盒（荧光免疫层析法）的线性区间。

1.5.1检测系统准备仪器的各项性能指标应与标称值相符，不存在明显的携带污染等；应采用适当的校准品对仪器进行校准，确保仪器工作状态正常。进行线性评价是不应采用过期试剂或不同批号试剂。试剂的贮存与配制应按照产品说明进行。

1.5.2 样本制备选择预期浓度在25000pg/mL左右的NT-proBNP高值样本，使用低值样本(L)和高值样本（H）分别以不同比例混合，稀释成具有9个浓度水平的梯度样本。稀释方法如下表。

表1 不同浓度水平样本制备稀释比例

1.5.3 试验过程每个水平样本重复检测4次。所有样本可在一次运行中测量或几次间隔很短的运行中随机测量，试验过程应在1天之内完成。

1.5.4 统计方法以线性样本的理论浓度或稀释度作为X轴，以实测浓度作为Y轴，对数据组进行多项回归分析，得到一阶、二阶与三阶多项式。对回归方程进行线性检验，通过SPSS的分析→回归→曲线估计得到各系数对应的标准误，也可以利用excel中的LINEST函数计算相关参数。

2 结果

2.1线性区间建立试验样本检测数据每个水平样本重复检测4次。检测结果见表2。

2.2多项式回归分析及线性检验通过SPSS分析及利用excel中的LINEST函数计算相关参数。统计分析结果见表3。

2.3线性区间计算根据稀释度及最适拟合方程，将稀释度作为X值代入方程中计算该稀释度预估值，并计算每个稀释度单个重复结果与预估值的相对偏倚。得出样本的线性区间为99.7pg/mL-25040.6pg/mL。线性区间计算数据见表4。

3 结论

依据《YY/T 1789.4-2022 体外诊断检验系统 性能评价方法 第4部分：线性区间与可报告区间》，配制出预期线性区间的9个不同浓度的梯度样本，每个样本进行4次重复检测，通过线性回归方程、线性相关系数（r）及线性偏差统计分析，成功建立了N末端B型钠尿肽原（NT-proBNP）测定试剂盒（荧光免疫层析法）的线性区间。

参考文献

[1]YY/T 1789.4-2022 体外诊断检验系统性能评价方法第4部分：线性区间与可报告区间.

[2]ISO/DIS 15189.2-2007.医学实验室——质量和能力的要求[S].中国国家实验室国家认可委员会，2007.

[3]张莉,吴炯，郭玮,等.医学检验检测系统应用前的性能评价[J].检验医学,2006,21(5):560-564.