灵芝孢子油对小鼠增强免疫力的试验研究

灵芝孢子油对小鼠增强免疫力的试验研究

康艳萍

长春大政药业科技有限公司  吉林长春  130000

摘要：目的：本文旨在探讨不同剂量的灵芝孢子油对小鼠免疫功能的影响。  方法：以0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d剂量的灵芝孢子油连续灌胃小鼠30天，观察其对小鼠的各项免疫指标。结果：灵芝孢子油能增强小鼠的细胞免疫功能、体液免疫功能和单核-巨噬细胞能力，差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论：灵芝孢子油具有增强免疫力的保健功能，应用于保健食品具有广阔的发展前景。

关键词：灵芝孢子油 免疫功能 小鼠   动物实验

灵芝是担子菌纲多孔菌科，灵芝是我国传统的扶正固本、滋补强壮的中药，是中医药宝库中的珍品。素有“仙草”之誉，《神农本草经》将其列为上品，有“益肺气，益肝气，益脾气”之功效。随着生活水平提高，增强免疫功能有助于降低疾病负担，提高生活质量，大部分的人会进行食补。而灵芝具有多种生物学活性，尤其是免疫活性，对提高机体免疫力具有一定的作用。灵芝孢子油是从灵芝孢子粉中萃取出的油脂性物质，浓缩了灵芝孢子中的有效成分，是灵芝孢子中功效成分的集合体。

研究表明，以0.17 g/kg·BW、0.33 g/kg·BW、1.00 g/kg·BW剂量的灵芝孢子油连续灌胃小鼠30天后，结果显示灵芝孢子油0.33 g/kg·BW、1. 00 g/kg·BW剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应水平、脾淋巴细胞转化能力以及NK细胞活性，提示灵芝孢子油对小鼠细胞免疫功能和NK细胞活性均有明显的促进作用[1]。因此，本研究通过整体动物试验，探究灵芝孢子油对机体免疫功能的影响特征，以期为灵芝孢子油应用于保健食品的开发提供有价值的依据。

1 材料与方法

1.1受试样品：灵芝孢子油，油状液体。由某公司提供，人体推荐临床服用量为1.0g/d，样品阴凉、干燥、通风处存放。

1.2  受试动物：选用某公司繁殖的SPF级CI/F1代健康雌性小鼠，体重为19.0～21.9g。试验动物在温度为20℃～26℃、相对湿度为40%～70%的环境中饲养。

1.3剂量选择与受试物给予方式：受试样品人体推荐剂量为1.0g/人/日，即0.0167g/kg.bw（以60kg体重计），设0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d三个剂量组（分别相当于受试样品人体推荐摄入量的5倍、10倍、30倍），临用前称取受试样品5g加食用植物油至100mL，混匀作为高剂量受试物；量取高剂量组受试物40mL，加食用植物油至120mL，混匀作为中剂量受试物；量取中剂量组受试物40mL加食用植物油至80mL，混匀，作为低剂量受试物。另设0 g/kg.bw/d组以食用植物油代替受试物，经口每日一次给予小鼠相应剂量的受试物，小鼠灌胃量为0.1mL/10gbw。连续灌胃一个月后测定各项增强免疫力功能指标。

1.4主要仪器：打孔器、T1000型电子天平、JA2003型电子天平、SG-603生物安全柜、多功能酶标仪、二氧化碳培养箱、JJ-100电子天平等。

1.5  主要试剂：DNFB、SRBC、豚鼠血清、印度墨汁、RPMI1640、ConA、MTT、异丙醇、SA 缓冲液、都氏试剂、YAC-1 细胞、LDH基质液等。

1.6试验数据统计用 SPSS 软件对各试验原始数据进行方差齐性检验，满足方差齐要求的数据资料，用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料用秩和检验进行统计处理。

2 结果

2.1  灵芝孢子油对小鼠体重和胸腺、脾脏器官的影响 经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，小鼠初始体重0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d与0 g/kg.bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)，表明小鼠的体重在各组间较为均衡。另取小鼠的胸腺和脾称重，计算脏体比，由表1结果可见，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组胸腺体比和脾体比与0 g/kg.bw/d组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

表 1 灵芝孢子油对小鼠胸腺、脾脏器官的影响（±s）

2.2  灵芝孢子油对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响 经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，用MTT法进行ConA

诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验，计算加ConA与不加ConA孔吸光度的差值。由表2结果可见，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠脾淋巴细胞中加ConA与不加ConA孔吸光度的差值高于0 g/kg.bw/d组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 2 灵芝孢子油对小鼠脾淋巴细胞转化的影响（±s）

注：*与对照组比较P＜0.05

2.3  灵芝孢子油对DNFB诱导小鼠DTH的影响经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，用耳肿胀法进行DNFB诱导小鼠DTH实验，计算耳壳增重。由表3结果可见，0.500 g/kg.bw/d组耳壳增重高于0 g/kg.bw/d组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 3灵芝孢子油对DNFB诱导小鼠DTH的影响（±s）

注：*与对照组比较P＜0.05

2.4灵芝孢子油对小鼠抗体生成细胞（溶血空斑数）的影响经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，用Jerne改良玻片法进行小鼠抗体生成细胞实验，计算溶血空斑数。由表4结果可见，0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠溶血空斑数高于0 g/kg.bw/d组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 4灵芝孢子油对小鼠溶血空斑数的影响（±s）

注：*与对照组比较P＜0.05

2.5灵芝孢子油对小鼠HC50的影响经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，用半数溶血值法进行小鼠的血清半数溶血值（HC50）。由表5结果可见，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠血清半数溶血值（HC50）高于0 g/kg.bw/d组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 5灵芝孢子油对小鼠HC50的影响（±s）

注：*与对照组比较P＜0.05

2.6灵芝孢子油对小鼠碳廓清能力的影响经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，进行小鼠碳廓清实验，计算吞噬指数a。由表6结果可见，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠碳廓清吞噬指数a高于0 g/kg.bw/d组，差异有统计学意义(P＜0.05)。

表 6灵芝孢子油对小鼠碳廓清能力的影响（±s）

注：*与对照组比较P＜0.05

2.7灵芝孢子油对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数的影响经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，用滴片法进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验，计算吞噬指数及吞噬百分率。由表7结果可见，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数与0 g/kg.bw/d组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表 7灵芝孢子油对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数的影响（±s）

2.8灵芝孢子油对小鼠NK细胞活性的影响经口给予小鼠不同剂量的灵芝孢子油一个月后，用乳酸脱氢酶测定法进行小鼠NK细胞活性测定。由表8结果可见，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠NK细胞活性与0 g/kg.bw/d组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。

表 8灵芝孢子油对小鼠NK细胞活性的影响（±s）

3 小结

根据本次研究结果可知，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠脾淋巴细胞中加 ConA 孔与不加 ConA 孔吸光度的差值高于0 g/kg.bw/d组，0.500 g/kg.bw/d组小鼠耳壳增重高于 0 g/kg.bw/d组；0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠溶血空斑数高于0g/kgbw/d组，0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组血清半数溶血值（HC50）高于0 g/kg.bw/d组；0.083 g/kg.bw/d、0.167 g/kg.bw/d、0.500 g/kg.bw/d组小鼠碳廓清吞噬指数a高于0 g/kg.bw/d组，差异均有统计学意义(P＜0.05)。根据增强免疫力功能试验的结果判定，在本试验条件下灵芝孢子油具有增强免疫力功能。

参考文献：

[1]黄建康,王凤岩,黄琼,等.灵芝孢子油增强小鼠免疫功能及护肝作用的实验研究[J].现代预防医学,2007,34(7):1272-1274.