药品洁净实验室物体表面微生物采集方法研究

药品洁净实验室物体表面微生物采集方法研究

刘利

四川省达州市食品药品检验所  四川省  达州市  635000

【摘要】目的：对于药品洁净实验室物体表面微生物采集方法进行研究。方法：对实验室物体表面微生物采用接触碟法与擦拭法进行收集，将采集结果进行分析。结果：在对于药品洁净实验室物体表面微生物采集方法中，接触碟法采集率较高于擦拭法，（P<0.05）。结论：接触碟法在药品洁净实验室物体表面微生物采集中效果明显，值得广泛推广与应用。

【关键词】药品洁净实验室；物体；表面微生物；采集方法

药品无菌检测和微生物控制必须在严格控制微生物污染的情况下进行，为确保药品的质量和安全，保持洁净实验室检测结果的可信度，有必要对洁净实验室的微生物进行监测和控制[1]。药品洁净实验室微生物污染主要来自操作人员和材料，为了防止药物无菌检测过程中出现假阳性，有必要对于药品洁净实验室环境微生物进行检测与控制，并在洁净室建立环境细菌库，以确定检测到的细菌与环境细菌之间的关系，降低实验室污染度[2]。本文即对于药品洁净实验室物体表面微生物采集方法进行研究，具体报告如下。

1.资料与方法

1.1一般资料

  仪器选择：PBS 100浮游菌取样机（苏州诺达Refinition Technology Co.，Ltd.）；BX51光学显微镜（日本奥林巴斯公司）；SHP-350生化孵化机（上海Jinghong实验设备有限公司）；细菌ID BBL Crystal AutoReader仪（美国BD公司）；C1000 Touch PCR（美国Bio RAD公司）；QBUIT 3.0-核蛋白探测器（Invitrogen，美国）；第二代MISEQ测序器（美国Illumina公司）。

1.2方法

1.2.1接触碟法

从冰箱中取出要使用的接触碟，并将其放置以恢复至室温。检查接触碟标签，确保它在有效期内使用。检查接触碟包装、外观，丢弃有缺陷的器皿，选择待检物，打开包装，打开接触碟盖，将培养基扣在待检地方，轻轻按下8-10秒，关闭接触碟盖并将培养物放入孵化器中。采样后的接触碟放在20-25度的培养箱中，30-35度连续培养7天，培养后观察接触碟内菌群形态，计算菌落数量，计算每单位面积（1小格为1平方厘米）的细菌数量，进行分类和识别。

1.2.2擦拭法

在S型水平方向用棉拭子擦试样表面，在S型垂直方向用棉拭子擦另一层，然后在取样中心以湿无菌干棉拭子为出发点，从内向外用环擦试样表面。擦拭时，转动棉拭子，轻轻用力以增加摩擦。擦拭棉布拭子后，用无菌方法割断拭子头，去除手部接触部位，将湿棉布拭子放入大试管，用同温计振动1分钟。

1.3观察指标

分离的微生物通过色谱Gram涂片、VITEK2 IM PACT试剂、微生物生化反应鉴定、菌株分类和统计初步确定了所获得的菌株类型。

1.4统计学方法

SPSS 23.0软件对所统计的研究数据进行处理和分析，计量资料（±s），t检验，计数资料（%），χ2检验。P<0.05说明有统计学有意义。

2.结果

2.1采集结果

选择药物无菌实验室、微生物限制室、P2级阳性细菌实验室A、B、C、D环保设备分别进行微生物取样表面。在完成30次试验作业后，使用擦拭法和接触碟法在不同环境水平上随机选择同一地点的高污染风险表面，以实际取样污染微生物，采集结果显示为，擦拭法回收率为50%，接触碟法回收率为85%，接触碟法采集率较高于擦拭法，（P<0.05）。

3.讨论

由于洁净室中的微生物污染主要来自外部环境，因此洁净室中受影响的微生物可能与短期外部环境不同，但从长远来看，洁净室内的微生物与外部环境基本一致。对于药品的微生物检测，特别是无菌检测，环境中微生物的类型和数量是影响测试结果准确性和可信度的重要风险因素[3]。因此，有必要在污染区收集环境微生物，确定污染和控制清洁环境的细菌来源。

本研究所用的擦拭法采样用棉拭子擦拭物体表面，收集过程包括样品微生物转移、提供洗涤液、滤膜等，被测物体表面的微生物被移动到某个介质表面，但转移过程可能会导致重大误差，擦拭收集用于使用培养皿法确定菌落数量，与稀释因子相乘的结果存在巨大的数据误差[4]。接触碟法简单、快速、准确，这种方法不需要复杂的设备和技术，非常适合现场检测和快速筛查。此外，接触碟法广泛应用于制药、食品、医院、化妆品公司和机构，如环境微生物检测，比传统棉签更方便、更准确，它可用于清洁环境中微生物的动态/静态监测，以及测试灭菌效果等[5]。接触碟法测试可以在短时间内完成，通常只有几个小时或更短的时间，这使得它在紧急情况下非常有用。然而，接触碟法也存在不足之处，例如只检测活细菌，而不检测其他类型的微生物，如死细菌或病毒，尽管培养时间相对较短，但它仍然比一些快速检测技术用时长[6]。研究结果显示，擦拭法回收率为50%，接触碟法回收率为85%，接触碟法采集率较高于擦拭法，可说明接触碟法对于药品洁净实验室物体表面微生物采集效果明显，

具有重要的临床应用价值。

综上所述，接触碟法在药品洁净实验室物体表面微生物采集中具有积极影响，有重要应用价值。

参考文献

[1]詹清,周阿容,林梦丹，等.微生物检测实验室环境菌库的建立及分析[J].现代食品,2024,30(1):106-110.

[2]孟茹茹,韩鑫,张亚琼，等.2019年包头市城乡不同类别教育机构空气和物体表面微生物的检测[J].包头医学院学报,2020,36(1):46-48.

[3]武爱萍,王雪利,王蕾，等.2021年唐山市某医院环境微生物监测结果分析[J].环境卫生学杂志,2023,13(7):511-515523.

[4]王谨,冯雪梅,杨康梅，等.分离擦拭法和浸泡法腹膜透析外接短管更换方法效果的对比分析[J].护理实践与研究,2023,20(23):3607-3611.

[5]梁玉运,何世海,陈秋霞，等.三种采样方法对表面微生物监测效果观察[J].广东化工,2023,50(11):194-196.

[6]韩杰,金虹,任哲，等.两种采样方法对环境中微生物采样效果的比较研究[J].中国消毒学杂志,2020,37(1):10-12.

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