土家药材黄瓜香质量标准研究

土家药材黄瓜香质量标准研究

李轩，吴一振，杨慧琴，滕树忠，彭瑶

（湘西自治州民族中医院，湖南 吉首 416000）

【摘要】目的 建立土家药材黄瓜香的质量控制标准，为其质量评价提供参考。方法 通过外观特征鉴定、显微鉴别和薄层色谱法等对黄瓜香进行定性鉴别；参考《中国药典》（2020年版）四部通则，对黄瓜香总灰分、酸不溶性灰分、水分含量进行检查；采用高效液相色谱法测定黄瓜香中绿原酸的含量。结果 黄瓜香薄层鉴别特征斑点清晰，分离度良好；9批黄瓜香药材总灰分平均含量为27.88%%，酸不溶性灰分平均含量为13.19%，水分平均含量为1.17%；绿原酸平均含量为1.549%。结论 本研究建立的薄层鉴别、检查及含量测定方法专属性强、准确度高、操作简便，可用于黄瓜香药材质量标准研究。

【关键词】黄瓜香；绿原酸；高效液相色谱；质量标准

中图分类号：R284.1    文献标志码：A

土家药黄瓜香，又名七星莲、蔓茎堇菜，为堇菜科植物匍伏堇Viola diffusa Ging.的全草，土家语名“拍替塔王嘎那”，性冷，味甜，具有败毒消肿、生血补虚、止咳化痰等功效[1,2]。在民间，常用于跌打损伤、牙龈肿痛等病的治疗[3]。现代研究[4-6]表明，黄瓜香主要含有香豆素类、黄酮类、三萜类等化合物，而绿原酸则是其香豆素类化合物中已明确的重要活性成分，具有抗炎抗氧化、抗菌抗病毒、保肝护肝等多种药理作用[7-9]。近年来，关于黄瓜香的研究日益增多，但关于药材质量标准的却鲜有报道，为了更好地控制药材质量，本研究对黄瓜香的质量检测方法进行了探索，为黄瓜香的质量标准建立提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；电子天平（SQP型，赛多利斯科学仪器有限公司）；恒温水浴锅（HH-S26S型，江苏荣华仪器制造有限公司）；鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；超声波清洗器（深圳市洁盟清洗设备有限公司）。

1.2 试药

对照品：绿原酸（批号110751-202312，质量分数为96.1%），均购自中国食品药品检定研究院；色谱级乙腈（批号20180409）、分析级甲醇（批号20180522）均购自天津市科密欧化学试剂有限公司）；磷酸（批号20090402，天津市德恩化学试剂有限公司）。

药材：9批次黄瓜香药材均经州民族中医院滕树忠副主任中药师鉴定为堇菜科植物蔓茎堇菜的全草，具体信息见表1，原植物图见图1。

2 方法与结果

2.1 药材性状

本品多皱缩成团。主根呈长圆锥形，直径2～5mm，淡黄色至黄棕色，有稀纵皱纹，具多条细小须根；叶基生，上表面深绿色，下表面灰绿色，展平后叶片呈卵形或卵状长圆形，长1.5～3.5crn，宽1～2cm，先端钝或稍尖，基部宽楔形，下延于叶柄，边缘具钝齿，叶柄具明显的翅，见图2。

表1 黄瓜香药材信息

图1 黄瓜香原植物图

图2 黄瓜香药材

2.2 显微鉴别

2.2.1 根的横切面 根的横切面呈类圆形．表皮2～3列薄壁细胞组成，排列疏松．皮层宽广，细胞类圆形，薄壁细胞南外向内体积逐渐减小，细胞间隙不发达；木质部发达，导管单个或2～6个聚集而成；韧皮部呈压扁皱缩状，环绕水质部排列；无形成层；维管束为有限外韧型，见图3。

图3 黄瓜香根的横切面

2.2.2 叶的下表面特征 单细胞非腺毛，有的略弯曲，基部稍膨大，末端狭尖，长20～40pm，直径4～8μm。气孔多数呈直轴式，少数不等式，见图4。

图4 黄瓜香叶的下表面特征

2.3 薄层鉴别

称取黄瓜香药材样品粉末lg（过2号筛），加入乙醇30mI，稀盐酸10mI，超声处理20min，过滤，滤液水浴蒸干，残渣再加5mI，乙醇溶解，过滤，滤液水浴蒸干，残渣用1mI乙醇溶解，作为供试品溶液。取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。另取黄瓜香药材样品粉末lg（过2号筛），制备方法同供试品溶液，作为对照药材溶液。

参照2020年版《中国药典》[10]四部薄层色谱法试验，分别吸取供试品溶液、绿原酸对照品溶液、对照药材溶液各5μL，将三种溶液点在同一硅胶G板上，以甲苯－三氯甲烷－丙酮（体积比10：8：3）为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯（365nm）下检视，在薄层色谱相应位置上，供试品与对照品及对照药材显相同颜色的斑点。

图5 薄层色谱图

2.4 总灰分、酸不溶性灰分、水分含量测定

参照2020年版《中国药典》四部通则相关项下方法对黄瓜香药材的总灰分、酸不溶性灰分、水分含量进行测定。根据测定结果，总灰分含量为25.09%~29.78%，平均含量为27.88%；酸不溶性灰分含量为11.50%~16.83%，平均含量为13.19%；水分含量为0.78%~1.52%，平均含量为1.17%。根据测定结果，暂定总灰分不得超过30.0%，酸不溶性灰分不得超过17%，水分不得超过1.6%。

2.5 绿原酸含量测定

2.5.1 对照品溶液制备 精密称取绿原酸标准品5.30mg于100ml容量瓶中，用浓度60%乙醇定容至浓度为0.053mg/ml，备用。

2.5.2 供试品溶液制备 精密称取绿原酸样品粉末2g，加入浓度60%的乙醇20ml，超声处理30min，过滤，定容至100ml，备用。

2.5.3 色谱条件 以HypersilODS为色谱柱（300mm×4.6mm，2.5µm）；以4mL∙L−1磷酸水溶液（A）－乙腈（B）为流动相，梯度洗脱（0.01~10min，15%~15%B；10~20min，15%~22%B）；检测波长为360nm；柱温为35℃；流速为1mL∙min－1；进样量为10μL。

2.5.4　线性关系考察　精密吸取对照品溶液5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μL，按照2.5.3项下色谱条件进行HPLC分析，以进样浓度为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，得回归方程分别：y=513.25x+225658（r=0.9998），结果表明，绿原酸在1.42~4.25μg·mL−1浓度范围内线性关系良好。

2.5.5　精密度实验　精密吸取2.5.2项下方法制备的供试品溶液，按照2.5.3项下色谱条件连续进样6次进行测定，记录峰面积。结果显示绿原酸峰面积的RSD值为0.92%，表明精密度良好。

2.5.6 重复性实验　精密吸取2.5.2项下方法制备的6份供试品溶液，按照2.5.3项下色谱条件进行测定，进样体积为10μL，计算百分含量，测得绿原酸的平均含量为1.59%，RSD值为1.3%。

2.5.7 稳定性实验 精密吸取2.5.2项下方法制备的供试品溶液，分别在0、2、4、8、16、24h进样测定，记录峰面积。结果显示，绿原酸峰面积RSD值为0. 88%，

表明样品在24h内稳定性良好。

2.5.8 加样回收率试验 精密称定已准确进行含量测定的样品粉末0.5g（9份），分别置于具塞锥形瓶中，将高、中、低质量浓度对照品加入量与所取供试品中待测成分量之比控制在0.5:1、1:1、1.5:1，按照2.5.2项下方法制备供试品溶液，按照2.5.3项下色谱条件进行测定，计算得绿原酸的平均回收率为96.36%，RSD值为1.01%。表明本实验所用的测定方法准确、可靠，可用于黄瓜香的含量测定。

2.5.9 样品含量测定 分别取9批东北齿缘草粉末约1.0g，精密称定，按照2.5.2项下方法制备供试品溶液，按照2.5.2项下色谱条件进行分析，进样体积为10μL，计算百分含量，含量测定结果（按干燥品计算）见表2。结果表明，9批药材样品中绿原酸的含量在1.489% ~1.627%之间，平均含量为1.549%，各批含量离散程度较小，综合分析测定结果，考虑到本品产地、采集、加工、批次、贮运及季节气候等影响因素，其含量限度不宜拟定过高，暂定本品按干燥品计，含绿原酸不得少于1.4%。

表2 黄瓜香药材的含量测定结果（n=3）

4 讨论
　　质量标准研究的主要意义在于保证药材品质稳定、促进药用资源的开发利用。 黄瓜香是土家药中常用的药材资源，有较高的开发利用潜力。本研究对土家药黄瓜香的质量检测方法进行探讨，收集了9批不同地区的黄瓜香药材，初步建立了黄瓜香的药材质量标准，为其质量控制提供了理论依据。

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[10] 国家药典委员会.中国药典[S].北京:中国医药科技出版社,2020:63.

 作者简介：李轩(1988-)，男，主管药师，本科，主要从事临床药学研究

