党参红景天联合枳椇子或葛根对胃粘膜损伤的保护作用研究

党参红景天联合枳椇子或葛根对胃粘膜损伤的保护作用研究

齐超 苏静 李建国

（南方医科大学 广东广州510515）

摘 要：目的 研究两种党参红景天复合物对无水乙醇诱导的急性胃粘膜损伤模型辅助保护作用。方法 将70只SD大鼠按体重随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、配方1低、高剂量组，配方 2低、高剂量组，10只/组，连续灌胃30d。末次给药后，无水乙醇造模，测定各项指标。结果 与空白对照组相比，模型对照组肉眼观察评分及组织病理学评分显著升高，有统计学差异(P<0.01)；与模型对照组相比，阳性对照组和配方1和配方2高剂量组组织病理学评分及肉眼观察评分降低(P＜0.05)。结论 两种党参红景天复合物对无水乙醇诱导的急性胃粘膜损伤模型具有辅助保护作用。

关键词: 党参红景天复合物；无水乙醇；急性胃粘膜损伤

临床研究表明，益气健脾中药具有修复胃肠粘膜损伤，增强粘膜屏障功能，加速上皮细胞再生，促进粘膜防护因子，促进胃肠运动作用[[1]]。党参甘、平，归脾、肺经，功能健脾益肺，养血生津，是常见的益气健脾中药；红景天具有益气活血功效；枳椇子甘、平，归心、脾经；葛根归脾、胃、肺经。本实验研究配方1、配方2对大鼠胃粘膜损伤的保护作用。

1材料与方法
1.1 药品及试剂
配方1由党参粉、红景天粉、枳椇子粉组成，其中三者的用量分别为 2g、1g、1g；配方2由党参粉、红景天粉、葛根粉组成，其中三者用量分别为 2g、1g、1g。样品由实验室自制。无水乙醇(分析纯)、甲醛(分析纯)、苏木素、伊红、实验室用水为超纯水。
1.2 动物材料
SPF级SD大鼠(体重180～220g)，雄性，由广东省医学实验动物 中心提供，实验动物生产许可证号：SCXK(粤)2018-0002，动物饲养于屏障级动物房，温度20～22℃，相对湿度50%～70%，12h照明/12h黑暗交替，动物自由摄食和饮水，适应性喂养1周后进行试验。

1.3 仪器设备

电子天平、数显卡尺、脱水机、EG1160石蜡包埋机、RM2235轮转式切片机、CM1850冷冻(冰冻)切片机、HI1210摊片机、HI1220烤片机(德国Leica公司)、生物荧光显微镜、病理图像采集系统(日本OLYMPUS公司)等。
1.4 实验方法[[2]]
1.4.1 动物分组动

物检疫合格后，按体重随机分为空白对照组、模型对照组、阳性对照组、配方1组低、高剂量组、配方2组低、高剂量组，10只/组，共7组。其中配方 1、2的低、高剂量分别相当于人体推荐量的5、10倍。
1.4.2 给药方法
配方1、2低、高剂量组每日按10mL/kg体重灌胃相应配方的受试样品，阳性对照组同法灌胃给予硫糖铝口服混悬液，空白对照组和模型对照组同法灌胃给予超纯水，1次/d，连续30d。
1.4.3 造模方法
末次给药后，全部动物严格禁食不禁水24h。除空白对照组外，其余各组动物灌胃给予无水乙醇，灌胃体积1.0mL/只，灌胃乙醇1h后安乐死，结扎贲门，然后从胃幽门处注入8mL 10%中性甲醛溶液，缝线结扎，剪取充盈的胃体，浸泡在 5%甲醛溶液中，固定20min，然后沿胃小弯剪开胃壁，避开出血带洗净内容物后沿胃大弯剪开，展开胃粘膜，进行相应指标检测。
1.5 检测指标
(1)一般观察：每天观察并记录大鼠的一般状态1次。
(2)体重：每周称重1次；试验结束称量动物体重1次。
(3)肉眼观察评分：展开胃粘膜后，肉眼下用游标卡尺测量出血点或出血带的长度和宽度，因宽度所代表损伤的严重性远较长度大，故双倍积分。并根据以下公式求得损伤发生率(%)、损伤积分指数和损伤抑制率。

损伤发生率(%)=某组出现出血或溃疡的大鼠数量/该组大鼠数量×100%

损伤积分指数=组损伤评分总和/组动物数量

损伤抑制率(%)=(模型对照组损伤积分-受试物组损伤积分)/模型对照组损伤积分×100%。

总积分=出血点分值+长度分值+宽度分值×2。

(4)组织病理学观察评分：肉眼评分结束后，将每只大鼠胃粘膜损伤最严重的部位切下(周围稍保留正常组织),固定于10%甲醛溶液，常规制片，HE染色，镜下观察。注意选择胃粘膜正横切面，包括粘膜全层的区域观察。评分方法：以充血、出血、粘膜细胞变性坏死在整个粘膜上皮层的累及程度分为5级，充血权重为1，出血权重为2，上皮细胞变性坏死权重为3。

病变总积分=充血积分+充血积分×2+上皮细胞变性坏死积分×3
1.6 统计学处理方法
所有数据采用(x s)表示，应用 SPSS 21.0 软件进行统计分析；体重采用重复测量方差分析；肉眼观察评分及组织病理学评分采用方差分析：空白对照组与模型对照组作t检验，各给药组分别与模型对照组、阳性对照组单独作方差分析；损伤发生率采用卡方检验。检验水平α=0.05。
2结果与分析
2.1 对大鼠体重的影响
实验期间，各组间动物体重无统计学差异(P＞0.05)。表明配方1和配方2对大鼠中期体重和终末体重无明显影响。

2.2 肉眼观察评分

与空白对照组相比，模型对照组肉眼观察评分显著升高(P<0.01)。与模型对照组相比，阳性对照组、配方1、配方2高剂量组肉眼观察评分显著降低，损伤抑制率分别为 46.2%、54.7%、 49%，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结果见表 1。

表1 急性损伤肉眼观察及评分结果

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
2.4 组织病理学结果
由表2可知，模型组大鼠胃粘膜充血、出血、上皮细胞坏死严重，并且胃粘膜损伤的组织病理学评分均升高。配方1和配方2高剂量组大鼠胃粘膜充血、出血、上皮细胞坏死均减轻，损伤评分均明显降低（P＜0.01或P＜0.05）。

表2胃粘膜组织病理学检查结果

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

3结论与讨论

本研究采用由无水乙醇灌胃引起的急性胃粘膜损伤模型,实验研究表明由党参粉、红景天粉、枳椇子粉组成的配方1和党参粉、红景天粉、葛根粉组成的配方2对无水乙醇诱导的急性胃粘膜损伤模型有辅助保护作用。

引用文献

[[1]]危北海.中医脾胃学说应用研究.北京：北京出版社，1993

[[2]]国食药监保化[2012]107 号附件 2 对胃粘膜损伤有辅助保护功能评价方法。