成都中医药大学
摘要:目的 观察蝙蝠蛾拟青霉的增强免疫力和缓解体力疲劳作用。方法 选用SPF级健康小鼠,实验设低、中、高剂量组和阴性对照组,连续灌胃30天后, 测定各项免疫指标。采用肝糖原、血清尿素、血乳酸测定实验和负荷游泳实验,灌胃给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉,比较各组小鼠力竭游泳时间、肝糖原、血清尿素及血乳酸浓度水平的变化。结论:蝙蝠蛾拟青霉对小鼠具有增强免疫力和缓解体力疲劳作用。
关键词:蝙蝠蛾拟青霉;增强免疫力;体力疲劳
蝙蝠蛾拟青霉菌丝体粉是天然冬虫夏草在制药业和食品工业上的替代品。从天然冬虫夏草分离得到虫草菌丝,经发酵培养,所得菌丝体的作用与天然冬虫夏草基本相同,而效果更强。清朝汪昂的《本草备要》(1694)和之后赵学敏的《本草纲目拾遗》(1756)和《中华人民共和国药典》记载虫草功效为:“补肺益肾,止血化痰”,可用于“久咳虚喘,劳嗽咯血,阳痿遗精,腰膝酸痛”。现代药理研究已证明,虫草不仅具有对抗肿瘤、氧化、炎症的作用,还具有调节血脂和免疫功能的作用,以及松弛支气管平滑肌、促进组织修复、代谢调节作用。蝙蝠蛾虫草菌丝体粉富含腺苷、多糖等活性物质,不仅含量丰富且比例适当,能有效增强人体体质,全面提高了免疫机能和抗疲劳能力。蝙蝠蛾拟青霉菌粉中含有HH2,是女性生物钟的重要成分,可促使人体的抗体分泌量增加,激活机体的免疫活性细胞,尤其对淋巴细胞转化和巨噬细胞吞噬率有明显促进作用。
1 材料和方法
1.1受试物 蝙蝠蛾拟青霉粉。成人推荐每日服用0.8g。
1.2 实验方法 参照卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)中增强免疫力功能和缓解体力疲劳功能检验方法和操作规程进行。实验设2个大组,每大组设3个实验组和1个阴性对照组,每组10只小鼠。每天灌胃体积为0.2ml/lOg.BW,阴性对照组给予等量去离子水。每天1次,连续灌胃30d,分别进行增强免疫力和缓解体力疲劳试验。
1.3试验剂量 根据成人推荐用量,设受试物低、中、高剂量组,分别为0.07、0.13、0.4g/kg·BW(即相当于成人推荐用量的5倍、10倍和30倍),同时设一个阴性对照组。
1.4 实验数据处理 采用 SPSS 16.0 软件对数据进行分析处理与计算,P<0.05 为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 小鼠的初始体重低、中、高剂量组与对照组比较,差异无统计学意义。表明小鼠的初始体重在各组间较为均衡。
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,低、中、高剂量组与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。
2.2 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠胸腺、脾脏器官的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,低、中、高剂量组与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。
2.3 蝙蝠蛾拟青霉粉对ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,用MTT法进行ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化实验,计算加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值,并对其进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表1结果可见,高剂量组加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。
表1蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠脾淋巴细胞转化的影响(±SD)
剂量 (g/kg·bw/d) | 动物数 (只) | 加ConA孔与不加ConA孔 吸光度的差值 | P值 |
对照组 | 10 | 0.010±0.004 | |
低剂量组 | 10 | 0.011±0.006 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 0.012±0.004 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 0.016±0.005 | P<0.05 |
2.4蝙蝠蛾拟青霉粉对DNFB诱导小鼠DTH的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,用耳肿胀法进行DNFB诱导小鼠DTH实验,计算耳壳增重,并对其进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表2结果可见,高剂量组耳壳增重高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。
表2蝙蝠蛾拟青霉粉对DNFB诱导小鼠DTH的影响(±SD)
剂量 (g/kg·bw/d ) | 动物数 (只) | 耳壳增重 (mg) | P值 |
对照组 | 10 | 16.5±3.3 | |
低剂量组 | 10 | 16.8±3.6 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 16.7±4.1 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 21.0±4.7 | P<0.05 |
2.5 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠抗体生成细胞(溶血空斑数)的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,用Jerne改良玻片法进行小鼠抗体生成细胞实验,计算溶血空斑数,并对其进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表
3结果可见,高剂量组溶血空斑数高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。
表3 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠溶血空斑数的影响 (±SD)
剂量 (g/kg.bw/d) | 动物数 (只) | 溶血空斑数 (个/106脾细胞) | P 值 |
对照组 | 10 | 52±27 | |
低剂量组 | 10 | 61±30 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 60±37 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 91±39 | P<0.05 |
2.6 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠血清半数溶血值(HC50)的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,用半数溶血值法测定小鼠的血清半数溶血值(HC50),并对其进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表4结果可见,低、中、高剂量组与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。
表4蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠HC50的影响(±SD)
剂量 (g/kg·bw/d) | 动物数 (只) | HC50 | P值 |
对照组 | 10 | 72±20 | |
低剂量组 | 10 | 72±17 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 75±25 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 80±13 | P>0.05 |
2.7 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠碳廓清能力的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,进行小鼠碳廓清实验,计算廓清指数a,并对其进行方差齐性检验,满足方差齐性要求,用单因素方差分析方法中多个试验组与一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理。由表5结果可见,高剂量组小鼠碳廓清指数a高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。
表5蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠碳廓清能力的影响(±SD)
剂量 (g/kg·bw/d) | 动物数 (只) | 碳廓清指数a | P值 |
对照组 | 10 | 5.28±0.52 | |
低剂量组 | 10 | 5.19±0.64 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 5.53±0.62 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 6.02±0.53 | P<0.05 |
2.8蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬百分率及吞噬指数的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,用半体内法进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验,计算吞噬指数及吞噬百分率,并将吞噬百分率经sin-1P1/2(P为吞噬百分率,用小数表示)转化后进行方差齐性检验,不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。由表6结果可见,高剂量组吞噬百分率及吞噬指数高于对照组,差异有统计学意义(P﹤0.05)。
表6 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率
及吞噬指数的影响(±SD)
剂量 (g/kg·bw/d) | 动物数 (只) | 吞噬百分率 (%) | P值 | 吞噬指数 | P值 |
对照组 | 10 | 22.6±5.4 | 0.30±0.07 | ||
低剂量组 | 10 | 23.2±2.1 | P>0.05 | 0.30±0.03 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 23.5±3.2 | P>0.05 | 0.34±0.03 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 27.3±3.3 | P<0.05 | 0.35±0.03 | P<0.05 |
2.9 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠NK细胞活性的影响
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉粉一个月后,用乳酸脱氢酶测定法进行小鼠NK细胞活性测定,将NK细胞活性经sin-1P1/2(P为NK细胞活性,用小数表示)转化后进行方差齐性检验,不满足方差齐性要求,用秩和检验进行统计处理。由表7结果可见,低、中、高剂量组NK细胞活性与对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05)。
表7 蝙蝠蛾拟青霉粉对小鼠NK细胞活性的影响 (±SD)
剂量 (g/kg·bw/d) | 动物数 (只) | NK细胞活性 (%) | P值 |
对照组 | 10 | 26.4±5.4 | |
低剂量组 | 10 | 29.2±11.1 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 31.9±13.6 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 32.0±14.1 | P>0.05 |
2.10小鼠负重游泳时间
表8 蝙蝠蛾拟青霉对小鼠负重游泳时间的影响(±s)
组 别 | 动物数(只) | 游泳时间(min) | P值 |
对 照 组 | 10 | 9.99±10.58 | |
低剂量组 | 10 | 12.61±7.46 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 14.76±9.04 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 21.89±9.58 | P<0.01 |
由表8可见,经口给予小鼠不同剂量样品后,高剂量组小鼠的负重游泳时间比对照组显著性延长(P<0.01)。
2.11小鼠血清尿素含量
表9蝙蝠蛾拟青霉对小鼠血清尿素的影响(±s)
组 别 | 动物数(只) | 尿素(mmol/L) | P值 |
对 照 组 | 10 | 11.44±1.59 | |
低剂量组 | 10 | 10.48±2.15 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 9.71±1.54 | P<0.05 |
高剂量组 | 10 | 9.09±1.88 | P<0.01 |
由表9可见,经口给予小鼠不同剂量样品后,中、高剂量组小鼠血清尿素含量显著性低于对照组(P<0.05,P<0.01)。
2.12小鼠肝糖原
含量
表10 蝙蝠蛾拟青霉对小鼠肝糖原含量的影响(±s)
组 别 | 动物数(只) | 肝糖原(mg/g) | P值 |
对 照 组 | 10 | 12.20±2.43 | |
低剂量组 | 10 | 12.42±3.51 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 14.49±4.71 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 16.56±3.87 | P<0.05 |
由表10可见,经口给予小鼠不同剂量样品后,高剂量组小鼠肝糖原含量显著性高于对照组(P<0.05)。
2.13小鼠血乳酸含量
表11 蝙蝠蛾拟青霉对小鼠三个时间点血乳酸含量的影响(±s)
组 别 | 动物数 (只) | 游泳前 ( mmol/L) | P值 | 游泳后0min ( mmol/L) | P值 | 游泳后休息 20min( mmol/L ) | P值 |
对 照 组 | 10 | 5.67±1.00 | 7.09±1.01 | 6.03±1.11 | |||
低剂量组 | 10 | 5.51±0.74 | P>0.05 | 6.94±1.44 | P>0.05 | 6.02±0.91 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 5.34±0.98 | P>0.05 | 6.55±1.02 | P>0.05 | 5.59±0.77 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 5.30±0.81 | P>0.05 | 5.91±1.11 | P>0.05 | 5.41±1.03 | P>0.05 |
由表11可见,经口给予小鼠不同剂量样品后,游泳前、游泳后休息0min、休息20min时各组小鼠血乳酸含量均无显著性差异(P>0.05)。
表12 蝙蝠蛾拟青霉对小鼠三个时间点血乳酸曲线下面积的影响(±s)
组 别 | 动物数(只) | 血乳酸曲线下面积 | P值 |
对 照 组 | 10 | 195.00±18.28 | |
低剂量组 | 10 | 191.78±20.66 | P>0.05 |
中剂量组 | 10 | 180.85±19.29 | P>0.05 |
高剂量组 | 10 | 169.15±15.67 | P<0.01 |
由表12可见,经口给予小鼠不同剂量样品后,高剂量组小鼠三个时间点血乳酸曲线下面积与对照组比有显著性差异(P<0.01)。
3 小结
经口给予小鼠不同剂量的蝙蝠蛾拟青霉样品,结果提示,蝙蝠蛾拟青霉具有增强免疫力和缓解体力疲劳功能。
参考文献
[1]张博华,陈晶.冬虫夏草药理作用研究进展[J].中医药信息,2012,29(1):134-135.
[2] 周雯,唐慧,陈敏.关于蝙蝠蛾拟青霉菌丝体安全性的实验研究[J]. 中国卫生检验杂志.2009,19(2):420-424.
[3]戴如琴,兰江丽,陈伟华等.蝙幅蛾拟青霉新种的研究[J].北京农业大学学报,1989,15(2):221-225.
[4]徐曦,胨国桢.冬虫夏草对免疫及造血功能影响的实验研究[J].湖南医学,1995,12(4):202-204.