简介：

简介：摘要目的确定问号钩端螺旋体vWF-A基因产物结合人胶原蛋白的作用与机制。方法采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株vWF-A基因(LA_0012、LA_0697和LA_4207)产物结构与功能。构建上述基因vWF-A功能结构域片段原核表达系统，采用SDS-PAGE和Ni-NTA亲和层析法检查目的重组蛋白rLep0012、rLep0697和rLep4207表达情况和提纯效果。采用ELISA和表面等离子共振法(SPR)检测目的重组蛋白与人Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅵ型胶原蛋白(hCOL1/3/4/6)的结合能力。采用实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测问号钩端螺旋体赖株感染人和小鼠血管内皮细胞(HUVEC和EOMA)时vWF-A基因转录和表达水平变化。结果vWF-A基因产物均为含vWF-A超家族结构域表面或跨膜蛋白，但LA_0697和LA_4207基因还含有金属离子依赖性黏附位点(MIDAS)。所构建的原核表达系统能有效表达目的重组蛋白，Ni-NTA亲和层析法提纯后SDS-PAGE检测均显示为单一蛋白条带。ELISA结果显示rLep0697与hCOL3/6、rLep4207与hCOL1/4呈强结合。SPR结果显示rLep0697快速结合hCOL3/6但快速解离(KD值＝5.71×10-8和5.89×10-8 mol/L)，rLep4207快速并稳定结合hCOL1/4(KD值＝6.4×10-9和3.2×10-9 mol/L)。感染HUVEC和EOMA细胞时，上述vWF-A基因转录和表达水平均显著升高(P<0.05)。结论LA_0697和LA_4207基因产物可作为问号钩端螺旋体感染过程中的黏附因子。

简介：摘要目的了解铁对问号钩端螺旋体生长繁殖和能量代谢的影响，确定LA_2690与LA_3598基因产物为问号钩端螺旋体储铁蛋白及其亚铁氧化酶功能。方法采用Petroff-Hausser计数法了解缺铁对问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型56601株在EMJH培养基中生长繁殖的影响。分光光度法和化学发光法检测缺铁抑制问号钩端螺旋体DNA和ATP合成的作用。采用生物信息学软件分析问号钩端螺旋体LA_2690和LA_3598基因结构与功能。构建LA_2690和LA_3598基因原核表达系统，Ni-NTA亲和层析法提纯目的重组蛋白rLep2690和rLep3598。分光光度法检测rLep2690和rLep3598亚铁氧化酶活性。实时荧光定量RT-PCR检测问号钩端螺旋体56601株感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和单核细胞(THP-1)时LA_2690和LA_3598基因转录水平变化。结果在缺铁EMJH培养基中，问号钩端螺旋体生长繁殖能力、DNA和ATP合成水平均显著下降(P<0.05)。LA_2690和LA_3598基因产物分别为细菌铁蛋白(Bfr)和细菌DNA结合铁蛋白(Dps)，均含有双亚铁氧化酶中心，但后者缺乏亚铁血红素结合位点和亚铁氧化酶核心。LA_2690和LA_3598基因原核表达系统能高效表达目的重组蛋白rLep2690和rLep3598，提纯后经SDS-PAGE检测均显示为单一的蛋白质条带。rLep2690和rLep3598亚铁氧化酶活性分别为1 238.619和60.052 U/L。感染细胞时，LA_2690和LA_3598基因mRNA水平均显著升高(P<0.05)。结论铁离子参与问号钩端螺旋体生长繁殖、DNA和ATP合成。LA_2690和LA_3598基因(Bfr和Dps)均为问号钩端螺旋体感染细胞时所需，其中LA_2690基因产物具有较强亚铁氧化酶活性。

简介：关于青年的需求与激励方式孙爱华人类活动在某种意义上讲就是为了满足某种需求。青年作为人生的特定阶段，必然有着许多特定的需求。作为青年教育工作者，就必须了解青年的这种需求，采取适当的激励方式对青年人加以引导，培养其正确的人生观和健康向上的思想情操，树立起...

简介：摘要：在现代城市道路的发展中,道路桥梁的施工与养护管理关系到一个工程是能否顺利的完成,我国现代施工企业的质量对施工和养护质量的控制力度将直接决定我国现代施工企业的发展。在道路桥梁施工与养护管理过程中可能会出现各种各样的问题,有效防范桥梁施工中存在的各种问题至关重要。

简介：摘要：随着新时代的发展和城市化建设的加快， 在建筑工程建设中，工程管理属于十分重要的内容及任务，而工程管理中的关键就是工程质量控制，因而建筑工程管理人员需要科学合理地进行工程质量控制，从而使建筑工程质量得到保证，在此基础上使建筑工程建设的需求及要求能够得到满足，促使建筑工程建设得以更有效发展。

简介：摘要；目的： 探讨分析小儿肺炎患者护理中实施优质护理的应用效果。 方法 ：选取本院自 2017 年 6 月 -2018 年 12 月期间收治的小儿肺炎患者 112 例作为研究对象，随机分成两组，各组 56 例，对照组患者实施常规护理措施，观察组患者实施优质护理干预措施，对比两组患者临床治疗效果及病发症发生率情况。 结果 ：观察组患者体温恢复时间显著低于对照组患者，憋喘时间显著低于对照组患者（ p ＜ 0.05 ）；心力衰竭发病率低于对照组患者，肺气肿发病率低于对照组患者；呼吸衰竭发病率低于对照组患者，差异明显具有统计学意义（ p ＜ 0.05 ）。 结论 ：小儿肺炎护理工作中实施优质护理干预措施可有效提高患者治疗效果，降低并发症发生率。

简介：摘要：道路与桥梁工程的质量一方面与城市交通运输业有着密切关联,另一方面,也会对我国经济发展带来一定社会影响。因此,随着城市范围内车辆不断增多,人们开始关注着道路与桥梁工程质量问题。在道路与桥梁工程中,最重要的问题就是桥梁或者桥面部位出现裂缝或者桥台出现沉降现象。因此,在施工过程中,就应当对道路与桥梁工程可能存在的常见病害以及问题点,做事前分析并采取预防措施,通过有针对性进行预防和及时处理问题,保证道路与桥梁质量。 

简介：摘要：当前，核心素养是深化课程改革进程的着力点，它对落实立德树人的根本任务具有重要的战略作用。作为德育主渠道的道德与法治课堂，要“以人为本，立足生活，寻找课堂生活化”的教学新思路，实现学生在文本世界和生活世界之间的对话与意义构建。特别是小学《道德与法治》的教学，无论是理念引导，还是核心素养培养，生活化都是当前教育目标下的一种必要选择。

简介：摘要目的分析肺炎链球菌丝氨酸/苏氨酸激酶StkP胞外区(EC-StkP)基序(motif)在与β-内酰胺类抗生素结合中的作用。方法分别将EC-StkP的3个motif(SXXK)依次和全部突变为AXXA，将突变后得到的质粒导入受体细胞进行克隆表达，SDS-PAGE联合凝胶图像分析系统检查目的重组突变蛋白(EC-rStkP)表达情况，Ni-NTA亲和层析法分别提纯突变蛋白。采用等温滴定量热法(ITC 200)和表面等离子共振法(Biacore t200)检测突变蛋白与青霉素(PCN)和头孢噻肟(CTX)结合能力。结果PCN和CTX均不能与第1个、第3个以及3个motif均突变的蛋白质结合，但第2个motif突变后还能与CTX有较弱结合，而与PCN却不能结合。结论肺炎链球菌StkP激酶胞外区的3个motif都能与β-内酰胺类抗生素结合，且以与第1个motif和第3个motif结合为主。

简介：摘要目的确定肺炎链球菌β-内酰胺抗生素耐药相关胞内应答调节蛋白CiaR能与跨膜丝氨酸/苏氨酸激酶StkP结合组成StkP/CiaR二元信号传导系统(TCSS)。方法采用PCR扩增stkP基因胞内区片段(IC-stkP)，T-A克隆测序确认序列正确后构建其原核表达系统。SDS-PAGE检查IC-stkP片段和我们以往构建的ciaR基因原核表达系统目的重组蛋白rIC-StkP和rCiaR表达情况，Ni-NTA亲和层析法提纯rIC-StkP和rCiaR。采用Co-IP和LC-MS/MS鉴定rIC-StkP捕获的肺炎链球菌靶蛋白。采用等离子共振法(SPR)和等温滴定量热法(ITC)检测rCiaR与rIC-StkP结合能力。结果所构建的IC-stkP片段原核表达系统能有效表达rIC-StkP。SDS-PAGE结果显示提纯的rIC-StkP和rCiaR在胶上均为单一蛋白质条带。CiaR可与rIC-StkP特异性共沉淀，其3个裂解肽位于CiaR分子内且序列完全相符。SPR和ITC结果显示，rCiaR与rIC-StkP呈高亲和力强结合，其KD值分别为1.526×10－9 mol/L和1.980×10－6 mol/L。结论肺炎链球菌CiaR可作为StkP激酶下游应答调节蛋白组成StkP/CiaR-TCSS。